Технология изотермической амплификации нуклеиновых кислот может быть разделена на множество категорий в соответствии с различными принципами амплификации. В настоящее время наиболее распространенной и широко используемой является технология петлевой изотермической амплификации (LAMP), разработанная японским ученым Нотоми и др. в 2000 году. Bst ДНК-полимераза является основным ферментом технологии изотермической амплификации. Каковы функция и производительность Bst ДНК-полимеразы в LAMP?

1. Какую роль играет ДНК-полимераза Bst в LAMP?
2. Что такое лиофилизированная ДНК-полимераза Bst Plus?
3. Какова особенность продукта? Лиофилизированный Бст Плюс ДНК Полимераза(14405ES)?
4. Каковы эксплуатационные характеристики лиофилизированного продукта? Бст Плюс ДНК Полимераза (14405ES)?
5. Сопутствующие товары
6. О чтении

1. Какую роль играет ДНК-полимераза Bst в LAMP?

Техническая особенность LAMP заключается в разработке четырех праймеров для шести областей целевого гена и проведении реакции амплификации с использованием ДНК-полимеразы BST в условиях постоянной температуры 60~65 ℃, достигая 109-1010-кратной амплификации в течение 15-60 минут. ДНК-полимераза BST обладает высокой термостабильностью, активностью смещения цепи и полимеразной активностью. Она может быть быстрой, эффективной и специфической матрицей амплификации в условиях постоянной температуры без цикла амплификации тепловой денатурации ПЦР и завершить весь эксперимент LAMP в течение 1 часа.

2. Что такое лиофилизированная ДНК-полимераза Bst Plus?

Лиофилизированная ДНК-полимераза Bst Plus используется для замораживания ДНК-полимеразы Bst Plus без глицерина, что решает проблему нестабильности фермента Bst без глицерина. В то же время этот продукт обладает сильной 5'-3' ДНК-полимеразной активностью, активностью смещения цепи и толерантностью к dUTP, что больше подходит для реакции изотермической амплификации против загрязнения. Его удобно использовать клиентам при производстве лиофилизированных продуктов.

Рисунок 1: 14405ES-лиофилизированная ДНК-полимераза Bst Plus (60 ед./мкл, без глицерина)

3. Какова особенность продукта Лиофилизированный? Бст Плюс ДНК Полимераза (14405ES)?

• Фермент без глицерина, подходит для лиофилизации
• Транспортировка при нормальной температуре для снижения затрат
• Сильная активность смещения нитей, чувствительная и стабильная
• Быстрое повторное растворение и удобство эксплуатации

4. Каковы эксплуатационные характеристики лиофилизированного продукта? Бст Плюс ДНК Полимераза (14405ES)?

4.1 Форма лиофилизированного порошка: по сравнению с моментом T0 форма порошка остается неизменной после лиофилизации при 45 ℃ - 15 ДНЕЙ.

Рисунок 2. Форма лиофилизированного порошка

4.2 стабильность

Эффективность лиофилизированного порошка после термического ускорения может по-прежнему соответствовать эффективности жидкого реагента, а лиофилизированный порошок (14405ES)
универсален и может использоваться для метода флуоресцентного красителя и метода индикатора pH.

4.2.1 Метод флуоресцентного красителя — стабильность

В системе амплификации флуоресцентного красителя RT-LAMP эффективность лиофилизированного порошка Bst без глицерина после T0, 45℃-7 дней и 45℃-15 дней теплового ускорения соответствует эффективности жидкой версии фермента Bst без глицерина, а NTC не достигает пика.

Условия эксперимента:

Примечание: Контрольная группа представляет собой жидкую версию без глицеринового фермента Bst той же концентрации.

Рисунок 3. Результаты стабильности

4.2.2 Метод флуоресцентного красителя ——Характеристики фермента Bst после лиофилизации системы RT-LAMP

В системе амплификации флуоресцентного красителя RT-LAMP производительность продукта безглицеринового лиофилизированного порошка Bst, лиофилизированного в системе RT-LAMP после 45 ℃ - 15 дней, соответствовала производительности жидкой версии безглицеринового фермента Bst. Уровень обнаружения продукта в контрольной группе и системе RT-LAMP после лиофилизации составил 100% (16/16) и 94% (15/16) соответственно.

Условия эксперимента:

Примечание: Контрольная группа представляет собой жидкую версию без глицеринового фермента Bst той же концентрации.

Рисунок 4. Эффективность фермента Bst после лиофилизации системы RT-LAMP

4.2.3 Метод индикатора pH ——Стабильность

В системе амплификации индикатора pH RT-LAMP по сравнению со временем T0 уровень обнаружения лиофилизированного порошка Bst составил 88% (7/8) после 45 ℃ - 15 дней термического ускорения.

Условия эксперимента:

Примечание: Контрольная группа представляет собой жидкую версию без глицеринового фермента Bst той же концентрации.

Рисунок 5. Результаты стабильности

4.2.4 Метод индикатора PH ——Устойчивость к повторному замораживанию

В системе амплификации индикатора pH RT-LAMP после 45 ℃ - 7 дней повторного замораживания производительность стабильна. Контрольная группа - жидкий фермент Bst. По сравнению с контрольной группой, уровень обнаружения 14405ES после термического ускорения составляет 94% (30/32).

Условия эксперимента:

Примечание: Контрольная группа представляет собой жидкую версию без глицеринового фермента Bst той же концентрации.

Рисунок 6. Результаты стабильности при повторном замораживании

4.3 Специфичность

В системе амплификации флуоресцентного красителя RT-LAMP 48-луночный NTC не достиг пика, а специфичность 14405ES составила 100%.

Условия эксперимента:

Примечание: Контрольная группа представляет собой жидкую версию без глицеринового фермента Bst той же концентрации.

Рисунок 7. Конкретные результаты

5. Сопутствующие товары

Сопутствующие продукты, которые может предоставить Yeasen, показаны в Таблице 1.

Таблица 1.Сопутствующие товары

6. О чтении

Выбор правильного ключевого ферментного сырья для повышения чувствительности и скорости LAMP/RT-LAMP!

Руководство по выбору обратной транскриптазы

ЙЕСЕН УДГ: «Эксперт по борьбе с обрастанием» в реакциях ПЦР