Хайфф Кэнэс^ТМ Высокоточная ДНК-полимераза Uracil+ — это новое поколение ДНК высокой точности Полимераза на основе Pfu ДНК-полимеразы. Hieff Canace^ТМ Высокоточная ДНК-полимераза Uracil+ обеспечивает быстрые и точные реакции ПЦР для сложных шаблонов. Ее точность значительно улучшена, и она полностью избегает сбоев амплификации, вызванных использованием содержащих dUTP праймеров/шаблонов/dNTP. Продукт оснащен оптимизированным ферментным буфером и добавлением компонентов, усиливающих ПЦР, что делает фермент высокоэффективным и адаптируемым к широкому спектру шаблонов, подходящим для амплификации сложных шаблонов.

Компоненты продукта

Доставка и хранение

Компоненты поставляются с пакетами со льдом и могут храниться при температуре -20°C в течение 1 года.

Применение продукта

Высокоточная амплификация библиотеки с использованием праймеров/шаблонов/dNTP, содержащих dUTP.

Предостережения

1. Для вашей безопасности и здоровья, пожалуйста, надевайте лабораторный халат и одноразовые перчатки во время работы.

2. Только для исследовательских целей!

Инструкции

Хайфф Кэнэс^ТМ Uracil+ High-Fidelity DNA полимераза используется немного иначе, чем обычные высокоточные ферменты. Перед использованием внимательно прочтите инструкцию.

1. Рекомендуемая система реакции

Все операции должны проводиться на льду. 2×Canace^ТМ Uracil+ PCR buffer должен быть хорошо перемешан после размораживания. Перед настройкой системы, пожалуйста, предварительно нагрейте инструмент для ПЦР. После добавления компонентов, тщательно перемешайте образец пипеткой и опустите его на дно пробирки, затем поместите его в предварительно нагретый инструмент для ПЦР для амплификации. После использования верните все компоненты в -20 °C для хранения.

Таблица 1. Реакция ПЦР-амплификации

[Примечания]:

1)Реагенты: Перед использованием тщательно разморозьте каждый компонент;

2) Шаблоны: использование очищенных высококачественных шаблонов ДНК может значительно повысить эффективность и успешность амплификации;

3)dNTPs: Рекомендуемая конечная концентрация dNTPs составляет 200 μM. dNTPs, поставляемые в наборе, не содержат dUTP. Если особые обстоятельства требуют подготовки dUTP-содержащих шаблонов, можно добавить дополнительный dUTP до конечной концентрации 400 μM.

4)Концентрация полимеразы: рекомендуется 1 U/50 мкл. Оптимизировать можно в диапазоне 0,5-2 U/50 мкл, не превышать 2 U/50 мкл. Чтобы предотвратить деградацию праймеров полимеразой из-за активности экзонуклида 3 '→5', предлагается добавлять полимеразу в реакционную систему на последнем этапе.

5)Конечная концентрация Mg2+: Конечная концентрация системы составляет 2 мМ. Пожалуйста, попросите нашу компанию предоставить буфер с низкой концентрацией Mg2+ или без Mg2+, если у вас есть особые потребности.

2. Рекомендуемая процедура реакции

Таблица 2. Процедура реакции ПЦР-амплификации

[Примечания]:

1) Начальная температура и время денатурации: рекомендуется 98℃. Рекомендуемое время составляет 30 сек для простых шаблонов, таких как плазмидная ДНК, 1 мин для библиотек, 3 мин для сложных шаблонов, таких как кДНК и геномная ДНК, и 5-10 мин для шаблонов с высоким содержанием GC.

2) Температура и время отжига: рекомендуется 60℃, или можно настроить градиент температуры, чтобы найти оптимальную температуру для отжига праймера в соответствии с потребностями. Рекомендуемое время отжига составляет 20 секунд и может быть скорректировано в пределах 10-30 секунд. Слишком длительное время отжига может привести к дисперсии амплифицированных продуктов на геле.

3) Температура и время расширения: рекомендуется 72℃. Время расширения регулируется в соответствии с фактическими потребностями.