Описание
Этот набор может напрямую и быстро проводить ПЦР-амплификацию мышиной ткани (например, хвоста мыши, уха мыши, пальца ноги мыши, мышцы и т. д.) и имеет сильную совместимость с образцами. Оснащенный мощным лизирующим буфером, этот набор может быстро лизировать образцы и высвобождать геномную ДНК. Лизат можно напрямую добавлять в систему реакции ПЦР без очистки, и операция удобна. Кроме того, этот набор требует небольшого количества вводимого образца, и для экспериментов можно использовать 5 мг мышиной ткани или 1-5 мм мышиного хвоста.
Смесь 2× Mouse Direct PCR, предоставляемая этим набором, представляет собой раствор для ПЦР-реакции с горячим стартом и 2-кратной концентрацией. Он содержит все компоненты, используемые для амплификации ПЦР, за исключением матрицы и праймеров, что значительно упрощает процесс работы и снижает вероятность загрязнения. Набор можно использовать для идентификации трансгенов, генотипирования мышей и т. д.
Функции
- Требуется меньше образца: 5 мг мышиной ткани или 1–5 мм мышиного хвоста
- Удобная подготовка шаблона: нет необходимости в измельчении, очистке и очистке ДНК, более высокая скорость потока, экономия времени и денег
- Оптимизированная система ПЦР: с более высокой специфичностью и большей устойчивостью к ингибитору реакции ПЦР
Приложения
- Идентификация трансгенных мышей
- Генотипирование мышей
- Анализ нокаута гена у мышей
Технические характеристики
| Спецификация продукта | Набор |
| Горячий старт | Встроенный горячий старт |
| Условия транспортировки | Пакеты со льдом |
| Тип продукта | Набор для прямой ПЦР |
| Применять к (приложение) | Мышиный хвост, мышиное ухо, крысиный палец, внутренние органы, кожа и т. д. |
Компоненты
| Номер компонента | Имя | 10185ES50 | 10185ES70 |
| 10185-А | Буфер МЛ | 5×1 мл | 20×1 мл |
| 10185-Б | Буфер МТ | 0,6 мл | 2×1,25 мл |
| 10185-С | 2× Микс для прямой ПЦР на мышах | 500 мкл | 2×1 мл |
- а) Буфер ML представляет собой лизирующий буфер, содержащий сильные денатурирующие агенты для белков. Пожалуйста, наденьте перчатки.
- б) Буфер MT — это стоп-буфер, используемый для остановки функции лизиса буфера ML.
- c) Смесь для 2-кратной прямой ПЦР на мышах: содержит ДНК-полимеразу Taq горячего старта, смесь dNTP, MgCl2, реакционный буфер, усилитель реакции ПЦР, оптимизатор, стабилизатор, индикаторный краситель для электрофореза и т. д.
Хранилище
- Компонент А: Продукт должен хранить при температуре 2°C~8°C в течение одного года. При многократном использовании в течение длительного времени, пожалуйста, избегайте перекрестного загрязнения.
- Компонент B/C: Продукт следует хранить в-25℃ ~ -15℃ в течение одного года. Пожалуйста, избегайте повторного замораживания-оттаивания.
Цифры
1. Результат амплификации целевого гена (в пределах 1 кб)
Рисунок 1.Подходит для амплификации целевого гена в пределах 1 кб.
2. Демонстрация скорости расширения
Рисунок 2. Ген размером 500 п.н., скорость расширения может достигать 1 с/кб.
Цитируется из «TFPI — это рецептор толстой кишки для TcdB из гипервирулентного клада 2 C. difficile. Cell. 2022 Mar 17;185(6):980-994.e15. doi: 10.1016/j.cell.2022.02.010.»
[1] Luo J, Yang Q, Zhang X и др. TFPI — это рецептор толстой кишки для TcdB из гипервирулентного клада 2 C. difficile. Cell. 2022;185(6):980-994.e15. doi:10.1016/j.cell.2022.02.010(IF:41.584)
[2] Zhao J, Chen J, Li YY, Xia LL, Wu YG. Тирозинкиназа Брутона регулирует вызванное макрофагами воспаление в почках при диабете посредством активации инфламмасомы NLRP3. Int J Mol Med. 2021;48(3):177. doi:10.3892/ijmm.2021.5010(IF:4.101)
| Распространенная проблема | Возможная причина | Решение |
| В положительном контроле и образцах, подлежащих тестированию, полос не обнаружено. | Система реакции ПЦР или условия реакции оказались неподходящими. | Используйте градиентную ПЦР для изучения оптимальных условий реакции ПЦР. |
| Неправильное хранение реагентов ПЦР приводит к потере активности. | Смесь 2× Mouse Direct PCR следует хранить при температуре -20°C и избегать повторного замораживания и размораживания во время использования. При частом использовании ее можно хранить при температуре 4°C в течение короткого времени. | |
| Проблемы с дизайном грунтовки. | Попробуйте переделать праймеры для проверки. | |
| Положительный контроль имеет интересующую полосу, а исследуемый образец не имеет полосы или имеет слабую полосу. | Неправильное хранение или длительное хранение может привести к потере активности реагента. | Используйте свежие реагенты. |
| Добавьте избыток лизата ткани. | Увеличьте реакционную систему или уменьшите количество лизата. | |
| Смесь для лизиса образца хранилась неправильно или слишком долго, в результате чего геном ДНК был деградирован. | Смесь лизата можно хранить при температуре 4°С в течение 2–3 дней.Попробуйте использовать свежеприготовленную смесь лизата для ПЦР. | |
| Количество добавленного шаблона не подходит. | Количество добавляемого шаблона оптимизировалось в диапазоне 1–10% от реакционной системы. | |
| Недостаточное количество циклов ПЦР. | Увеличьте количество циклов ПЦР, желательно 35-40 циклов. Из-за сложности матрицы реакции ПЦР следует проводить с циклами на 5-10 больше, чем с очищенной ДНК-матрицей. | |
| Неспецифическая амплификация | Слишком низкая температура отжига ПЦР, слишком высокое количество циклов, концентрация праймера или концентрация матрицы. | Увеличьте температуру отжига ПЦР и уменьшите количество циклов ПЦР, концентрацию праймера или концентрацию матрицы. |
| Несоответствия праймеров ПЦР. | Перепроектируйте праймеры ПЦР. | |
| Слишком высокая температура при приготовлении системы реакции ПЦР или слишком длительное время после завершения приготовления. | Приготовление системы ПЦР-реакции проводят при низкой температуре, а реакцию ПЦР-амплификации проводят как можно скорее после завершения приготовления. | |
| Целевая полоса появляется в отрицательном контроле | Загрязнение рабочих инструментов или реагентов. | Все реагенты или оборудование в эксперименте должны быть автоклавированы. Будьте осторожны и нежны при обращении, чтобы не допустить засасывания целевой последовательности в пистолет для образцов или выливания из центрифужной пробирки. |
| Перекрестное загрязнение между образцами. | Каждый пробоотборник используется только для одного образца; или после взятия одного образца погрузите край пробоотборника в 2% раствор гипохлорита натрия, несколько раз промойте, а затем высушите остаток чистым бумажным полотенцем. |
Оплата и безопасность
Ваша платежная информация обрабатывается надежно. Мы не храним данные кредитной карты и не имеем доступа к информации вашей кредитной карты.
Расследование
Вам также может понравиться
Часто задаваемые вопросы
Продукт предназначен только для исследовательских целей и не предназначен для терапевтического или диагностического использования на людях или животных. Продукты и содержимое защищены патентами, товарными знаками и авторскими правами, принадлежащими Yeasen Biotechnology. Символы товарных знаков указывают на страну происхождения, а не обязательно на регистрацию во всех регионах.
Для некоторых приложений могут потребоваться дополнительные права интеллектуальной собственности третьих лиц.
Йесен привержен этической науке, полагая, что наши исследования должны затрагивать важнейшие вопросы, обеспечивая при этом безопасность и соблюдение этических стандартов.