Описание
Набор для прямой ПЦР растительной ткани — это набор, который может напрямую амплифицировать различные типы листьев растений с помощью ПЦР, с широкой адаптивностью и высокой стабильностью. В наборе используется уникальная система буфера лизиса, которая может быстро лизировать различные образцы растений и высвобождать геномную ДНК. Высвобожденная геномная ДНК может использоваться напрямую в качестве матрицы без удаления белка, РНК или вторичных метаболитов в реакции ПЦР. Кроме того, для набора требуется небольшое количество образца, для экспериментов можно использовать листья растений размером всего 1 мм.
2×Plant Master Mix, входящий в этот набор, обладает высокой совместимостью с амплификацией и может напрямую использовать лизат образца в качестве матрицы для эффективной и специфической амплификации. Этот реагент представляет собой 2-кратно концентрированную реакционную смесь ПЦР, которая содержит все компоненты, используемые для амплификации ПЦР, за исключением матрицы и праймеров, что значительно упрощает процесс работы и снижает вероятность загрязнения.
Набор может быть использован для идентификации трансгенных растений, генотипирования растений и т. д.
Перевозки
Продукция поставляется с пакетами со льдом.
Хранилище
1. Реагент 10187-A [Буфер P1] можно хранить при температуре 4℃ в течение 1 года.
2. Реагент 10187-B [Буфер P2], используемый для нейтрализации лизата, что позволяет хранить образец в течение более длительного времени и может храниться при температуре 4℃ в течение 1 года.
3. Реагент 10187-C [2× Plant Master Mix] можно хранить при температуре -20℃ в течение 1 года. Избегайте повторного замораживания и оттаивания.
Предостережения
1. При проведении экспериментов с листьями рекомендуется использовать свежесобранную листовую ткань. Если это долгосрочно замороженная ткань, ее необходимо хранить при температуре -80°C. Повторного замораживания и оттаивания следует избегать, насколько это возможно, чтобы избежать деградации шаблона и повлиять на эффективность ПЦР. Листовая ткань подходит для молодых листьев. Если это зрелый лист, не используйте ткань главной жилки листа.
2. Для лучшей эффективности амплификации рекомендуется амплифицировать фрагмент длиной в пределах 1 кб.
3. При отборе проб используйте дырокол или нож, чтобы взять образец подходящего размера. Если образцы разные, дырокол или нож необходимо очищать каждый раз перед обработкой образца.
4. Для листовой ткани рекомендуется брать листья размером 1-10 мм, слишком маленькая длина листа приведет к низкому выходу ПЦР-амплификации, слишком большая будет ингибировать реакцию ПЦР, используйте метод термического растрескивания, разминания наконечником пипетки и измельчения измельчителем для обработки листьев растений. После обработки его необходимо встряхнуть и центрифугировать. Обязательно возьмите супернатант для тестирования. Осадок будет серьезно ингибировать реакцию ПЦР.
5. Для вашей безопасности и здоровья, пожалуйста, надевайте лабораторный халат и одноразовые перчатки во время работы.
6. Этот продукт предназначен ТОЛЬКО для исследовательских целей！
| Распространенные проблемы | Возможные причины | Решения |
| В положительном контроле и образцах, подлежащих тестированию, полос не обнаружено. | Система реакции ПЦР или условия реакции оказались неподходящими. | Используйте градиентную ПЦР для изучения оптимальных условий реакции ПЦР. |
| Неправильное хранение реагентов ПЦР приводит к их инактивации. | Смесь 2×PCR следует хранить при температуре -20℃, избегать повторного замораживания и размораживания при использовании. При частом использовании ее можно хранить при температуре 4°C в течение короткого времени. | |
| Проблемы с дизайном грунтовки. | Попробуйте переделать праймеры для проверки. | |
| Положительный контроль имеет интересующую полосу, а исследуемый образец не имеет полосы или имеет слабую полосу. | Соотношение лизирующего буфера и нейтрализующего буфера ненадлежащее, а лизирующая смесь будет влиять на значение pH системы ПЦР. | В нормальных условиях pH нейтрализованной лизирующей смеси должен быть около 7–8 (продукт лизиса и буфер P2 должны быть нейтрализованы в строгом соответствии с соотношением 5:1). |
| Смесь для лизиса образца хранилась неправильно или слишком долго, в результате чего геном ДНК был деградирован. | Смесь лизата можно хранить при температуре 4°С в течение 5 дней. Для ПЦР попробуйте использовать свежеприготовленную смесь лизата. | |
| Количество добавленного шаблона не подходит. | Оптимизируйте количество добавляемого шаблона в диапазоне <5% от реакционной системы. | |
| Недостаточное количество циклов ПЦР. | Соответствующим образом увеличьте количество циклов ПЦР, предпочтительно 35-40 циклов. Из-за сложности шаблона, как правило, лучше использовать на 5-10 циклов больше реакции ПЦР, чем использовать очищенный шаблон ДНК. | |
| Неспецифическая амплификация | Слишком низкая температура отжига ПЦР, слишком высокое количество циклов, концентрация праймера или концентрация матрицы. | Увеличьте температуру отжига ПЦР и уменьшите количество циклов ПЦР, концентрацию праймера или концентрацию матрицы. |
| Несоответствие праймера ПЦР. | Перепроектируйте праймеры ПЦР. | |
| Слишком высокая температура при приготовлении системы реакции ПЦР или слишком длительное время после приготовления. | Приготовление системы ПЦР-реакции проводят при низкой температуре, а реакцию ПЦР-амплификации проводят как можно скорее после завершения приготовления. | |
| Целевая полоса появляется в отрицательном контроле | Загрязнение рабочих инструментов или реагентов. | Все реагенты и оборудование, используемые в эксперименте, должны быть автоклавированы.Будьте осторожны и аккуратны при обращении, чтобы не допустить засасывания целевой последовательности в пистолет для образцов или выливания из центрифужной пробирки. |
| Перекрестное загрязнение между образцами. | Каждый пробоотборник используется только для одного образца; или после взятия одного образца погрузите лезвие пробоотборника в 2% раствор гипохлорита натрия, несколько раз промойте, а затем высушите остаток чистым бумажным полотенцем. |
Оплата и безопасность
Ваша платежная информация обрабатывается надежно. Мы не храним данные кредитной карты и не имеем доступа к информации вашей кредитной карты.
Расследование
Вам также может понравиться
Часто задаваемые вопросы
Продукт предназначен только для исследовательских целей и не предназначен для терапевтического или диагностического использования на людях или животных. Продукты и содержимое защищены патентами, товарными знаками и авторскими правами, принадлежащими Yeasen Biotechnology. Символы товарных знаков указывают на страну происхождения, а не обязательно на регистрацию во всех регионах.
Для некоторых приложений могут потребоваться дополнительные права интеллектуальной собственности третьих лиц.
Йесен привержен этической науке, полагая, что наши исследования должны затрагивать важнейшие вопросы, обеспечивая при этом безопасность и соблюдение этических стандартов.