Описание
Набор Hieff® Blood Advanced Direct PCR Kit — это набор, который позволяет проводить прямую амплификацию образцов цельной крови без очистки ДНК или предварительной обработки образцов и совместим со свежей кровью, охлажденной (замороженной) кровью и коммерческими сухими пятнами крови, содержащими обычные антикоагулянты, такие как ЭДТА, гепарин, цитрат и т. д. Набор содержит генно-инженерную комбинацию ДНК-полимеразы с высокой точностью и устойчивостью к ингибиторам ПЦР, 2-кратный буфер Hieff® Blood Advanced PCR с сильным фактором удлинения, фактором усиления амплификации и оптимизированную буферную систему для эффективной амплификации 8 кб геномных фрагментов в условиях быстрого удлинения и установки времени удлинения 3–5 сек/кб для фрагментов менее 2 кб, тем самым значительно сокращая время идентификации и тестирования образцов крови.
Технические характеристики
| Верность (против Taq) | 1 × |
| Горячий старт | Да |
| Навес | 3'-А |
| Полимераза | Taq ДНК-полимераза (кат.: 10726) |
Компоненты
| Нет. | Имя | 10188ES20 | 10188ES60 |
| 10188-А | 2× Хифф® Буфер для ПЦР крови Advanced | 500 μЛ | 2,5 мл |
| 10188-Б | Хифф® Усовершенствованная высокоточная ДНК-полимеразная смесь | 20 μЛ | 100 мкл |
| 10188-С | Смесь праймеров положительного контроля (по 10 мкМ каждый) | 100 мкл | 200 мкл |
| 10188-Д | 10× буфер для загрузки ДНК | 1 мл | 1 мл |
Инструкции
Рекомендуемые системы ПЦР-реакций.
| Компоненты | Объем (мкл) |
| ддх2О | до 50 мкл |
| 2× Хифф® Буфер для ПЦР крови Advanced | 25 мкл |
| Прямой праймер (10 мкМ) | 2 мкл |
| Обратный праймер (10 мкМ) | 2 мкл |
| Хифф® Усовершенствованная высокоточная ДНК-полимеразная смесь | 1 мкл |
| Образец крови | Х |
2. Рекомендуемая конечная концентрация составляет 0,4 мкМ на праймер, слишком высокая концентрация приведет к неспецифической амплификации.
3. Оптимальная концентрация матрицы цельной крови составляет от 0,5% до 20%, а рекомендуемое использование составляет 10% в качестве начального условия испытания, то есть 5 мкл цельной крови добавляют в качестве матрицы в 50 мкл реакционной системы, следя за тем, чтобы не допустить аспирации сгустков крови. Для сухих пятен крови, хранящихся на фильтр-картах Whatman®, можно взять около 1 мм2 круглых кусочков бумаги с пятнами крови и амплифицировать их непосредственно в реакции ПЦР без предварительной обработки.
Программа реакции
| Цикл шаг | Темп. | Время | Циклы |
| Начальная денатурация | 95℃ | 5 мин. | 1 |
| Денатурация | 95℃ | 15 сек. | 30-35 |
| Отжиг | 60℃ | 15 сек. | |
| Расширение | 72℃ | 3-10 сек/кб | |
| Финал расширение | 72℃ | 5 мин. | 1 |
Температура отжига представляет собой общее значение Tm или на 1-2°C ниже значения Tm праймера. Если продукт амплификации менее специфичен, можно установить градиент температуры отжига, чтобы найти оптимальные условия отжига.
Время расширения 10 сек/кб может амплифицировать большинство целевых фрагментов ниже 8 кб, а 3-5 сек/кб может амплифицировать большинство фрагментов ниже 2 кб. Если эффективность амплификации низкая, время может быть соответствующим образом увеличено до 20-30 сек/кб и не должно превышать 60 сек/кб.
Доставка и хранение
Продукцию следует хранить при температуре -15℃. ~ -25℃ для 1 год
Цифры
Примечания
1. Рекомендуется использовать матрицу крови в размере 10% от общего объема реакции, то есть 5 мкл цельной крови добавляют в 50 мкл реакционной системы в качестве матрицы, соблюдая осторожность, чтобы не допустить аспирации сгустков крови.
2. Время расширения 10 сек/кб может амплифицировать большинство целевых фрагментов ниже 8 КБ, а 3-5 сек/кб может амплифицировать большинство фрагментов ниже 2 КБ. Если эффективность амплификации низкая, время можно увеличить до 30 сек/кб.
3. После проведения ПЦР-реакции рекомендуется центрифугировать продукт реакции при 4000 об/мин (1000×g) в течение 1–3 мин для осаждения фрагментов клеток крови и отобрать супернатант для последующего анализа.
4. Данный продукт нельзя использовать напрямую для медицинской диагностики.
5. Для вашей безопасности и здоровья, пожалуйста, наденьте лабораторный халат и одноразовые перчатки.
Оплата и безопасность
Ваша платежная информация обрабатывается надежно. Мы не храним данные кредитной карты и не имеем доступа к информации вашей кредитной карты.
Расследование
Вам также может понравиться
Часто задаваемые вопросы
Продукт предназначен только для исследовательских целей и не предназначен для терапевтического или диагностического использования на людях или животных. Продукты и содержимое защищены патентами, товарными знаками и авторскими правами, принадлежащими Yeasen Biotechnology. Символы товарных знаков указывают на страну происхождения, а не обязательно на регистрацию во всех регионах.
Для некоторых приложений могут потребоваться дополнительные права интеллектуальной собственности третьих лиц.
Йесен привержен этической науке, полагая, что наши исследования должны затрагивать важнейшие вопросы, обеспечивая при этом безопасность и соблюдение этических стандартов.