Quick T4 DNA Ligase — это одноферментный продукт, который можно использовать для лигирования фрагментов ДНК и адаптеров в процессе создания библиотеки NGS. Этот продукт проверен высокопроизводительным секвенированием и имеет превосходное качество. Для клиентов, которым не требуется экспериментальная настройка системы, рекомендуется приобрести Hieff NGSTM Fast-Pace DNA Ligation Module (Cat#12607).

Компоненты продукта

Доставка и хранение

Продукт поставляется с пакетами со льдом и может храниться при температуре -20°C в течение двух лет.

Определение единицы измерения

В системе реакции лигирования объемом 20 мкл, когда 6 мкг λDNA-Hind Ⅲ реагирует при температуре 16 ℃ в течение 30 минут, количество фермента, необходимое для лигирования более 50% фрагментов ДНК, было определено как одна единица (U).

Предостережения

1. Если при плавлении буфера выпадает небольшое количество осадка, переверните его и тщательно перемешайте перед использованием;

2. В целях вашей безопасности и здоровья, пожалуйста, надевайте лабораторный халат и одноразовые перчатки во время работы.

3. Данный продукт предназначен ТОЛЬКО для исследовательских целей!

Инструкции

1. Текущие основные наборы для создания библиотек ДНК обычно не очищаются после восстановления концов и обработки A-Tailing, а непосредственно выполняют лигирование адаптеров. Пожалуйста, ознакомьтесь со следующей подготовкой для реакционной системы. Тщательно встряхните, быстро отцентрифугируйте и инкубируйте в течение 15 мин при 20°C.

[Примечание]: *50% ПЭГ 6000 не входит в комплект, его необходимо приготовить самостоятельно.

**Количество адаптеров см. в следующей таблице.

***Количество используемой ДНК-лигазы Quick T4 можно добавлять по мере необходимости в размере 1–5 мкл.

2. Качество и концентрация используемых адаптеров напрямую влияют на эффективность лигирования и выход библиотеки. Слишком большое использование адаптера может привести к образованию большего количества димеров адаптера, в то время как меньшее использование может повлиять на эффективность лигирования и выход библиотеки. В следующей таблице перечислено рекомендуемое количество адаптеров, используемых в различных ситуациях с вводом ДНК с использованием этого набора.

[Примечание]: Моль входной ДНК (пмоль) ≈ Входная ДНК (нг)/ [0,66 × Средняя длина входной ДНК (пн)].

Пример расчета лигирования адаптера: какое количество адаптера следует добавить, если входная ДНК составляет 100 нг, а длина — 300 п.н.?

Шаг 1: Рассчитайте количество молей входной ДНК. Формула: Моль входной ДНК (пмоль) ≈ Входная ДНК (нг)/ [0,66 × Средняя длина входной ДНК (пн)]; Моль входной ДНК (пмоль) = 100 ÷ (0,66 × 300) = 0,5 пмоль;

Шаг 2: Согласно приведенной выше таблице, рассчитайте количество молей добавленного адаптера. Если входная ДНК составляет 100 нг, молярное соотношение адаптеров: входная ДНК составляет 100:1, а количество добавленных молей адаптеров = 100×0,5 пмоль = 50 пмоль;

Шаг 3: Рассчитайте объем добавляемого адаптера. Концентрация адаптера = 15 мкмоль/л (если вы используете адаптер другой компании, вам необходимо определить его концентрацию в соответствии с ее инструкциями); Объем добавленного адаптера = моли добавленного адаптера (50 пмоль) ÷ концентрация адаптера (15 мкмоль/л) = 3,34 мкл (Примечание: 15 мкмоль/л = 15 пмоль/мкл);

В целом объем, к которому можно добавить адаптер, составляет 3,4 мкл. (Примечание: максимальный объем добавления адаптера не превышает 5 мкл).