Hieff Clone™ Universal II One Step Cloning Kit — это новый усовершенствованный набор для клонирования.

Тщательно оптимизированный 2-й клон Hieff Clone™ второго поколения Универсальный ферментный премикс II объединяет рекомбинантный фермент и буфер, необходимый для рекомбинантной реакции, с добавлением уникального рекомбинантного усилителя для значительного повышения эффективности рекомбинантного клонирования.

Набор может быть направлен на клонирование продуктов ПЦР в любой сайт любого вектора, совместим с неочищенными продуктами ПЦР, напрямую восстановленными продуктами ПЦР, низкой концентрацией восстановленных продуктов резины, этот продукт может повторно собирать гомологичное плечо GC содержание 30% -70% от фрагмента соединения. Вектор был полностью линеаризован, и гомологичные последовательности конца линеаризованного вектора 15-25 п.н. были введены в 5' конец положительного и обратного праймеров ПЦР вставленного фрагмента, так что 5' и 3' концы продуктов ПЦР вставленного фрагмента имели точно такую ​​же последовательность, соответствующую двум концам линеаризованного вектора, соответственно. Под действием рекомбинантного фермента рекомбинантная реакция продукта ПЦР и линеаризованного вектора может быть завершена всего за 5 мин при 50℃. Положительная скорость клонирования может достигать более 95%.

Функции

Просто: клонируйте до шести фрагментов ДНК за одну реакцию.

Гибкость: рекомендации по проектированию позволяют производить сборку в любом векторе по вашему выбору.

Эффективно: эффективно для лигирования от одного до семи фрагментов.

Приложения

Стремительный Клонирование: позволяет бесшовно связать несколько перекрывающихся фрагментов ДНК в ходе одноэтапной изотермической реакции, длящейся 5–50 минут.

Направленное клонирование; Сайт-направленный мутагенез.

Технические характеристики

Компоненты

Хранилище

Этот продукт следует хранить при температуре от -25 до -15℃ в течение 1 годы.

Цифры

Фрисунок 1. 10 нг отдельных фрагментов с низким входным уровнем были соединены в нереанимационном рецептивном состоянии малой системы объемом 6 мкл. Результаты показали, что 10923ES показал лучшую производительность, чем конкурирующие продукты, с высокой эффективностью соединения, большим количеством колоний и положительным показателем 100%. AB: Клонирующая пластина. Молярное соотношение носителя (10 кб) к фрагменту вставки (1 кб) составило 1:2. C: Карта электрофореза, идентифицированная с помощью ПЦР фрагмента вставки, M: YEASEN 10505ES.

Рисунок 2. Шесть фрагментов (общая длина 7,6 кб) были клонированы в плазмиду размером 11,6 кб. Результаты показали, что 10923ES показал лучшую производительность, чем конкурирующие продукты, с большим количеством колоний и положительным показателем 100%. AB: Колониальная пластина. Молярное соотношение носителя (11,6 кб) к фрагментам вставки составило 1:2. C: Электрофоретический анализ фрагмента вставки, M: YEASEN 10505ES. Ввод плазмиды：200 нг/20 мкл, 50°С, 50 мин.

Связанные цитаты и ссылки:

[1] Чжан Х., Шао С., Цзэн И. и др. Обратимое фазовое разделение HSF1 необходимо для острого транскрипционного ответа во время теплового шока. Нат Клеточная Биология. 2022;24(3):340-352. (IF:28.824)

[2] Сюй И., Ю Цюй, Ван П. и др. Селективный низкомолекулярный деградатор c-Myc эффективно регрессирует летальные опухоли с повышенной экспрессией c-Myc. Adv Sci (Вайн). 2022;9(8):e2104344. (IF:16.806)

[3] Guan B, Jiang YT, Lin DL, Lin WH, Xue HW. Фосфатидовая кислота подавляет аутофагию посредством конкурентного ингибирования путем связывания белков GAPC (глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназа) и PGK (фосфоглицераткиназа) [опубликовано онлайн до выхода в печать, 15 марта 2022 г.]. Аутофагия. 2022;1-15. (IF:16.016)

[4] He X, Li Y, Chen Q и др. O-GlcNAcylation и стабилизация SIRT7 способствуют прогрессированию рака поджелудочной железы, блокируя взаимодействие SIRT7-REGγ [опубликовано онлайн до выхода в печать, 14 апреля 2022 г.]. Смерть клеток отличается. 2022;10.1038/s41418-022-00984-3.(IF:15.828)

[5] Чжоу Т., Чжу Х., Йе З. и др. Вариант риска энхансера волчанки вызывает нарушение регуляции IRF8 посредством кооперативного механизма метилирования lncRNA и ДНК. Нац. Коммун. 2022;13(1):1855. Опубликовано 6 апреля 2022 г. (IF:14.919)

[6] Ли Т., Чэнь Х., Цянь И. и др. Синтетическое оптогенетическое устройство на основе BRET для пульсирующей экспрессии трансгена, обеспечивающей гомеостаз глюкозы у мышей. Нац. Коммун. 2021;12(1):615. Опубликовано 27 января 2021 г. (IF:14.919)

[7] Ву П., Чжан Т., Лю Б. и др. Механорегуляция конформаций пептидов MHC класса I определяет распознавание антигенов TCR. Мол. Ячейка. 2019;73(5):1015-1027.e7. (IF:14.548)

[8] Сюн Л., Лю С., Чэнь С. и др. Новый тип антивирусной системы на основе фосфоротиоирования ДНК у архей. Нац. Коммун. 2019;10(1):1688. Опубликовано 11 апреля 2019 г. (IF:11.878)

[9] Цзян Л., Ван И., Ся А. и др. Природный вариант полиморфизма одного нуклеотида в сульфитредуктазе влияет на усвоение серы в кукурузе. Новый Фитол. 2021;232(2):692-704. (IF:10.152)