Hifair™ AdvanceFast 1st Strand cDNA Synthesis Kit (No Dye) — это набор для быстрого обратного транскрипционного синтеза, разработанный на основе Hifair™. III 1st Strand cDNA Synthesis Kit (No Dye), подходит для ПЦР-амплификации и ОТ-кПЦР экспериментов. По сравнению с Hifair™ III Набор для синтеза первой цепи ДНК (без красителя) обеспечивает стабильные показатели обнаружения, специфичность и гарантированный выход, при этом общее время обратной транскрипции может быть сокращено до менее чем 6 минут, что значительно сокращает продолжительность эксперимента.

В комплект входит смесь gDNA Digester Mix, которая может устранить геномную ДНК-контаминацию, оставшуюся в РНК-матрице, гарантируя более надежные последующие результаты. В комплект входят два типа праймеров синтеза cDNA: случайные праймеры N6 и олиго (dT)₁₈. Пользователи могут выбирать между случайными праймерами N6, Oligo (dT)₁₈, или Gene Specific Primers как праймеры обратной транскрипции в соответствии с их потребностями. Синтезированный одноцепочечный продукт кДНК может быть напрямую использован для последующих реакций ПЦР или кПЦР.

Технические характеристики

Компоненты

Хранилище

Этот продукт следует хранить при температуре от -25 до -15℃. 1 год.

Инструкции

1. Если эксперимент требует удаления остаточной геномной ДНК

1) Расщепление геномной ДНК

В центрифужной пробирке без РНКазы приготовьте следующую смесь и аккуратно пипетируйте, чтобы хорошо перемешать. Инкубируйте при температуре 42℃ в течение 2 минут.

* Рекомендуется, чтобы вводимое количество общей РНК не превышало 2 мкг. Если уровень экспрессии целевого гена низкий, вводимое количество может быть увеличено до максимум 5 мкг общей РНК.

2) Подготовка системы реакции обратной транскрипции (система объемом 20 мкл)

* Количество праймеров можно регулировать в соответствии с количеством введенного шаблона. Если продукт обратной транскрипции используется для экспериментов qPCR, случайные праймеры можно добавлять в систему в соответствии с рекомендуемым количеством.

** Рекомендуется сначала добавить 4× Hifair™AdvanceFast SuperMix (без красителя), хорошо перемешать, а затем добавить праймер обратной транскрипции, чтобы гарантировать, что на праймер не повлияет геномный ДНК-дигестер.

3) Настройки процедуры обратной транскрипции

* Для шаблонов с высоким содержанием ГЦ или сложных шаблонов температуру обратной транскрипции можно увеличить до 60℃.

** Этот продукт может синтезировать последовательности кДНК ниже 14 кб. Если вам нужны более длинные продукты кДНК, вы можете соответствующим образом увеличить время обратной транскрипции.

2. Если эксперимент не требует удаления геномной ДНК

1) Подготовка системы реакции обратной транскрипции (система объемом 20 мкл)

* Рекомендуется, чтобы вводимое количество общей РНК не превышало 2 мкг. Если уровень экспрессии целевого гена низкий, вводимое количество может быть увеличено до максимум 5 мкг общей РНК.

** Количество праймеров можно регулировать в соответствии с количеством введенного шаблона. Если продукт обратной транскрипции используется для экспериментов qPCR, случайные праймеры можно добавлять в систему в соответствии с рекомендуемым количеством.

2) Настройки процедуры обратной транскрипции

* Для шаблонов с высоким содержанием ГЦ или сложных шаблонов температуру обратной транскрипции можно увеличить до 60℃.

** Этот продукт может синтезировать последовательности кДНК ниже 14 кб. Если вам нужны более длинные продукты кДНК, вы можете соответствующим образом увеличить время обратной транскрипции.

Примечания

1. Все операции следует проводить на льду и таким образом, чтобы избежать загрязнения РНКазой.
2. Данный продукт предназначен только для исследовательских целей.
3. Для вашей безопасности работайте в лабораторных халатах и ​​одноразовых перчатках.

Документы: