Хайфайр^™ Advanced One Step RT-qPCR Kit — это набор для флуоресцентной количественной оценки на основе красителя SYBR Green I. Используя геноспецифичные праймеры, обратная транскрипция и реакции qPCR выполняются в одной пробирке, что исключает необходимость повторных операций по открыванию колпачка и пипетированию, что значительно повышает эффективность анализа и снижает риск загрязнения. Для образцов РНК в наборе используется термостойкий Hifair^™ V Обратная транскриптаза для эффективного синтеза кДНК и UNICON^™ HotStart Taq DNA Polymerase для количественной амплификации. При оптимизированной буферной системе чувствительность набора может достигать 0,1 пг для высокоэкспрессированных мишеней и 1 пг для умеренно экспрессированных мишеней, и набор также подходит для амплификации и количественной оценки образцов ДНК. Набор подходит для амплификации и количественной оценки образцов ДНК. Он обеспечивает чувствительное обнаружение и количественную оценку нуклеиновых кислот из различных растительных и животных образцов, клеток и микроорганизмов.

Технические характеристики

Компоненты

Хранилище

Данный продукт следует хранить при температуре от -25 до -15℃. прочь от свет для 1 год.

Инструкции

1. Реакция система конфигурация*****

* Модели с низким Rox и модели без коррекции Rox готовятся напрямую в соответствии с указанной выше системой реакций. При использовании модели с высоким Rox добавьте Hieff™ SP High Rox к 2 x Hifair™ Advanced SG Buffer в соотношении 1:250 об./об., хорошо перемешайте и центрифугируйте. 2× Hifair^™ Расширенный буфер SG с Hieff™ SP High Rox не влияет на использование моделей коррекции Low Rox и No Rox.

** Конечная концентрация праймера составила 0,2 мкмоль/л, при необходимости ее можно было отрегулировать в диапазоне от 0,1 до 1 мкмоль/л.

*** Реагент чрезвычайно чувствителен, общая РНК находится в диапазоне 1 пг-1 мкг, а тестирование образцов человека показало оптимальный ввод 1 пг-100 нг, контролируя общее значение Ct в диапазоне 15-30 по мере необходимости.

**** Рекомендуется использовать 20 мкл или 50 мкл для обеспечения достоверности и воспроизводимости амплификации целевого гена.

***** Пожалуйста, готовьте в ультрачистом настольном помещении и используйте наконечники и реакционные пробирки без остатков нуклеазы; рекомендуются наконечники с фильтрующими картриджами. Избегайте перекрестного загрязнения и аэрозольного загрязнения.

2) Программа реакции

*Температура обратной транскрипции может быть выбрана в диапазоне 50-55°C в соответствии с экспериментальными потребностями. Для образцов ДНК процесс обратной транскрипции может быть опущен.

** В особых случаях температуру отжига/расширения можно регулировать в соответствии со значением Tm праймера, рекомендуется 60°C.

3) Применимая модель

Модели приборов, не требующие калибровки Rox:

Био-Рад: CFX96, CFX384, iCycler iQ, iQ5, MyiQ, MiniOpticon, Opticon, Opticon 2, Chromo4;

Eppendorf: Mastercycler ep realplex, realplex 2 s;

Qiagen: Corbett Rotor-Gene Q, Rotor-Gene 3000, Rotor-Gene 6000;

Roche Applied Science: LightCycler 480, LightCycler2.0, Светоциклер 96;

Thermo Scientific: PikoReal Cycler; Cepheid: SmartCycler; Illumina: Eco qPCR;

Применимые модели Low Rox:

ABI 7500, 7500 Fast, ViiA7, QuantStudio 3 и 5, QuantStudio 6, 7, 12k Flex;

Стратаген MX3000P, MX3005P, MX4000P;

Применимые модели High Rox*:

ABI 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Fast, StepOne, StepOne Plus.

* Для моделей High Rox обратите внимание, что Hieff™ SP High Rox следует добавлять пропорционально 2 x Hifair^™ Перед использованием проведите очистку буфера Advanced SG.

Примечания

1. Данный продукт предназначен только для исследовательских целей.
2. Для вашей безопасности работайте в лабораторных халатах и ​​одноразовых перчатках.

Документы:

Паспорт безопасности

11175ES-A-MSDS-HB230927.PDF

11175ES-B-MSDS-HB230927.PDF

11175ES-С-MSDS-HB230927.PDF

Руководства