Описание продукта

Hieff NGS™ mRNA Isolation Master Kit — это набор магнитных шариков, специально предназначенный для очистки мРНК. Шарики mRNA Capture представляют собой парамагнитные микросферы микрометрового размера, соединенные с хвостами Oligo dT (поли А), которые можно использовать для выделения мРНК от 10 нг до 4 мкг полной РНК путем связывания с мРНК с поли А хвостами.

Технические характеристики

Компоненты

Хранилище

Продукт следует хранить при температуре 2–8 ℃ в течение одного года, избегая замораживания.

Инструкции

1. Необходимые материалы не включены

Магнитный штатив, пробирки для ПЦР без нуклеазы

2. Операция

1) Уравновесьте гранулы захвата мРНК при комнатной температуре (~ 30 мин).

2) Разведите 10 нг – 4 мкг общей РНК до 50 мкл водой, не содержащей нуклеазы, в пробирке для ПЦР, не содержащей нуклеазы, поместите ее на лед.

3) Смешайте магнитные бусины, перевернув их вверх дном или встряхнув. Добавьте 50 мкл магнитных бус в 50 мкл образца общей РНК и пипетируйте 6 раз, чтобы хорошо перемешать. Быстро опустите центрифугированием на дно пробирки.

4) Инкубируйте смесь магнитных частиц и РНК в термоциклере и запустите следующую программу: 65°C, 5 мин; 25°C, 5 мин; 25°C, выдержка.

5) Поместите трубку на магнитную подставку. стойка в течение 5 минут, чтобы отделить мРНК от общей РНК. Осторожно удалите супернатант.

6) Снимите трубку с магнита. стойка и ресуспендируйте магнитные бусины с 200 мкл буфера для промывки бус. Пипеткой перенесите весь объем вверх и вниз 6 раз, чтобы тщательно перемешать. Поместите пробирку на магнитную стойка в течение 5 минут и осторожно удалите надосадочную жидкость.

7) Повторите шаг 6.

8) Снимите трубку с магнита. стойка. Добавьте 50 мкл Трис-буфера для ресуспендирования магнитных частиц и пипетируйте 6 раз, чтобы тщательно перемешать.

9) Поместите образец в термоциклер и запустите следующую программу для элюирования мРНК: 80°C, 2 мин; 25°C, выдержка.

10) Извлеките образец из термоциклера. Добавьте 50 мкл буфера для связывания бусин и пипетируйте 6 раз, чтобы тщательно перемешать.

11) Инкубируйте при комнатной температуре в течение 5 минут, чтобы мРНК связалась с магнитными частицами.

12) Поместите трубку на магнитную Оставьте на 5 минут и осторожно удалите надосадочную жидкость.

[Примечание]: Для аспирации оставшейся жидкости необходима пипетка объемом 10 мкл.

13) Снимите трубку с магнита. стойка, ресуспендируйте магнитные бусины с 200 мкл буфера для промывки бусинок, пипетируйте 6 раз, чтобы тщательно перемешать. Поместите пробирку на магнитную стойка при комнатной температуре в течение 5 минут. Удалите и выбросьте всю надосадочную жидкость.

14) окончательное элюирование мРНК

Схема А: Для резервной реакции транскрипции

Удалить трубку от магнитного стойка. Добавьте 12 мкл воды, свободной от нуклеазы. и пипетируйте 6 раз, чтобы тщательно перемешать. Поместите пробирку в термоциклер, запустите следующую программу: 80°C, 2 мин. Затем поместите трубку на магнитную стойка немедленно выдержать при комнатной температуре в течение 5 мин. После того, как раствор осветлится, осторожно аспирировать 10 мкл супернатанта в другую новую пробирку для ПЦР без нуклеазы.

Схема Б: Для РНК подготовка библиотеки

Добавьте соответствующий объем буфера Frag/Primer Buffer согласно соответствующим инструкциям набора для создания библиотеки.

Примечание

1. Для вашей безопасности и здоровья, пожалуйста, надевайте лабораторный халат и одноразовые перчатки во время работы.
2. Только для исследовательских целей.
3. Перед использованием магнитных частиц обязательно прогрейте их до комнатной температуры и тщательно перемешайте, в противном случае может пострадать эффективность извлечения образцов.
4. Операция должна быть полностью свободна от загрязнения РНКазой и нуклеиновыми кислотами.
5. При использовании данного продукта с другими реагентами следуйте конкретным экспериментальным инструкциям по эксплуатации.
6. Для получения хороших результатов очистки необходимо обеспечить хорошую целостность общей РНК и гарантировать значение RIN >7,0.