Описание
Хайфф NGSТМ Набор для подготовки библиотеки ДНК — это набор для создания библиотеки нового поколения, специально разработанный и предназначенный для Иллюмина® &МГИ® платформа для секвенирования. На основе предыдущего поколения набора для создания библиотек этот продукт демонстрирует более высокую эффективность в восстановлении концов, dA-хвосте и лигировании адаптеров, чем предыдущие версии. Высокоточный фермент значительно улучшает однородность и точность амплификации. Набор совместим с большинством типов образцов ДНК, включая стандартную геномную ДНК животных/растений/микроорганизмов, образцы FFPE, cfDNA и ChIP DNA.
Технические характеристики
| Кат.Nо. | 12927ES08 / 12927ES24 / 12927ЭС96 |
| Размер | 8 рхн / 24 рхн / 96 рхн |
Компоненты
| Номер компонента | Имя | 12927ES08 | 12927ES24 | 12927ES96 |
| 12927-А | 56 мкл | 168 мкл | 672 мкл | |
| 12927-Б | Эндпреп Фермент | 24 мкл | 72 мкл | 288 мкл |
| 12927-С | Усилитель лигирования | 240 мкл | 720 мкл | 3×960 мкл |
| 12927-Д | Стремительный ДНК-лигаза Т4 | 80 мкл | 240 мкл | 2×480 мкл |
| 12927-Э | КанасТМ Профессиональный микс усиления | 200 мкл | 600 мкл | 3×800 мкл |
Хранилище
Этот продукт следует хранить при температуре от -25 до -15℃. 1 год.
Примечания
1. О ходе операции
1. Для вашей безопасности работайте в лабораторных халатах и одноразовых перчатках.
2. Разморозьте компоненты при комнатной температуре. После размораживания, тщательно перемешайте встряхиванием, быстро поверните пробирку в центрифуге и поместите ее на лед для дальнейшего использования.
3. При приготовлении реакционного раствора на каждом этапе рекомендуется использовать пипетку для тщательного перемешивания или осторожного встряхивания. Интенсивное встряхивание может привести к снижению выхода библиотеки.
4. Настоятельно рекомендуется использовать фильтрованные наконечники пипеток, чтобы избежать перекрестного загрязнения. Обязательно меняйте наконечники пипеток при обработке разных образцов.
5. Неправильные операции с большой вероятностью могут привести к аэрозольным загрязнениям, что повлияет на точность результата. Рекомендуется обязательная физическая изоляция областей смешивания реакции ПЦР и областей анализа очистки продукта ПЦР. Оснащен оборудованием, таким как специализированные пипетки для создания библиотеки.Выполняйте обычную уборку каждой зоны, протирая поверхности 0,5% раствором гипохлорита натрия или 10% отбеливателем.
6. Этот продукт предназначен только для исследовательских целей.
2. Фрагментация ДНК
1. Этот набор совместим как с механически фрагментированной ДНК, так и с ферментативно фрагментированной ДНК.
2. Набор совместим с 100 пг - 1000 нг входной ДНК. Настоятельно рекомендуется использовать высококачественную входную ДНК с A260/A280 = 1,8-2,0. В таблице 1 указано рекомендуемое количество входной ДНК.
Таблица 1 Рекомендуемое количество вводимой ДНК
| Приложение | Типы образцов | Ввод ДНК |
| РГС | Сложный геном | 50 нг-1000 нг |
| Целенаправленное секвенирование захвата | Сложный геном | 10 нг-1000 нг |
| WGS, целевое секвенирование | ФФПЭ ДНК | 50 нг-1000 нг |
| Целевое секвенирование | cfDNA/ctDNA | ≥500 пг |
| РГС | микробные геномы | ≥1 нг |
| WGS (без ПЦР) | Высококачественная входная ДНК | ≥50 нг |
Примечание: Если входная ДНК имеет низкое качество или требуется выбор размера ДНК, количество входной ДНК следует соответственно увеличить.
3.Термин «входная ДНК» конкретно относится к образцам ДНК, готовым к восстановлению концов/dA-хвоста.
4. Шаг очистки гранул/выбора размера рекомендуется после фрагментации, если входной образец ДНК содержит высокие концентрации солей, таких как металл-хелатирующий агент. Соли могут повлиять на эффективность следующих реакций, включая репарацию концов и dA-хвост. Пожалуйста, элюируйте образцы ДНК в буфере TE вместо стерилизованной сверхчистой воды для фрагментации, если используется метод механической фрагментации. Если используется метод ферментативной фрагментации без выполнения очистки гранул или выбора размера перед переходом к подготовке библиотеки, пожалуйста, убедитесь, что используемый стоп-буфер не содержит избыточного количества металл-хелатирующего агента. В противном случае, пожалуйста, очистите или выберите размер фрагментированных образцов и элюируйте их в буфере TE или стерилизованной сверхчистой воде (≤50 мкл) перед переходом к подготовке библиотеки.
3. Лигирование адаптера
1. Клиентам доступны комплекты длинных адаптеров (адаптеров со штрих-кодом) Illumina или MGI, а также комплекты коротких адаптеров, которые они могут выбрать в соответствии со своими экспериментальными требованиями.
2. Рекомендуется выбирать высококачественные коммерческие адаптеры. Если вы выбираете адаптеры собственного производства, пожалуйста, доверьте это компании с опытом в синтезе праймеров NGS и отметьте необходимость строгого контроля загрязнения. Кроме того, рекомендуется готовить раствор для отжига ДНК в чистом помещении и использовать только один тип адаптера каждый раз, чтобы предотвратить перекрестное загрязнение..
3. Размораживайте адаптеры на льду или при температуре 4°C; при работе при комнатной температуре температура в лаборатории не должна превышать 25°C, чтобы предотвратить денатурацию адаптеров.
4. Качество и концентрация адаптеров напрямую влияют на эффективность лигирования и выход библиотеки. Слишком высокая концентрация адаптеров способствует образованию димера адаптера, в то время как слишком низкая концентрация адаптера снижает скорость лигирования и выход библиотеки. Соответствующие разбавления с буфером TE в соответствии с количеством входной ДНК при использовании адаптера.Таблица 2 -5 перечислены рекомендуемые методы разбавления адаптера для различных количеств входной ДНК с использованием этого набора.
Стол 2 Рекомендуемая IlluminaТМ количество адаптеров для разных входов ДНК
| Вход ДНК | Разбавление адаптера (объем адаптера : общий объем) | Концентрация |
| 0,1нг ~ 1 нг | 150-кратный (1 : 150) | 0,1 мкМ |
| 1 нг ~ 10 нг | 75-кратный (1 : 75) | 0,2 мкМ |
| 10 нг ~ 25 нг | 15-кратный (1 : 15) | 1 мкМ |
| 25 нг ~ 100 нг | 7,5-кратный (1 : 7.5) | 2 мкМ |
| 100 нг ~ 1000 нг | 3-кратный (1 : 3) | 5 мкМ |
Стол 3 Рекомендуемый MGIТМ количество адаптеров для разных входов ДНК
| Вход ДНК | Разбавление адаптера (объем адаптера : общий объем) | Концентрация |
| 0,1нг ~ 1 нг | 100-кратный (1 : 1)00) | 0,1 мкМ |
| 1 нг ~ 10 нг | 50-Сложить (1 : 50) | 0.2 мкМ |
| 10 нг ~ 25 нг | 10-Сложите (1 : 1)0) | 1 мкМ |
| 25 нг ~ 100 нг | 5-кратный (1 : 5) | 2 мкМ |
| 100 нг ~ 1000 нг | 2-Сложить (1 : 2) | 5 мкМ |
Стол 4 Рекомендуемая IlluminaТМ УМИ количество адаптеров для разных входов ДНК
| Вход ДНК | Разбавление адаптера (объем адаптера : общий объем) | Концентрация |
| 0,1нг ~ 1 нг | 150-кратный (1 : 150) | 0,1 мкМ |
| 1 нг ~ 10 нг | 75-кратный (1 : 75) | 0,2 мкМ |
| 10 нг ~ 25 нг | 15-кратный (1 : 15) | 1 мкМ |
| 25 нг ~ 100 нг | 7,5-кратный (1 : 7.5) | 2 мкМ |
| 100 нг ~ 1000 нг | 3-кратный (1 : 3) | 5 мкМ |
Стол 5 Рекомендуемый MGIТМ УМИ адаптер амколичество для разных входных данных ДНК
| Вход ДНК | Разбавление адаптера (объем адаптера : общий объем) | Концентрация |
| 5 нг ~ 25 нг | 50-кратный (1 : 50) | 0.2 мкМ |
| 25 нг ~ 100 нг | 10-Сложить (1 : 10) | 1 мкМ |
| 100 нг ~ 1000 нг | 4-Сложить (1 : 4) | 2.5 мкМ |
4. Очистка ДНК с помощью гранул и выбор размера
1. Выбор размера ДНК может быть выполнен до репарации концов/добавления dA, после лигирования адаптера или после амплификации.
2. Рекомендуется проводить выбор размера сразу после лигирования адаптера, если количество вводимой ДНК превышает 50 нг.; в противном случае, пожалуйста, выполните выбор размера после усиления.
3. Ligation Enhancer содержит высокую концентрацию ПЭГ, что может оказать существенное влияние на точность выбора размера. Таким образом, если выбор размера должен быть выполнен сразу после лигирования адаптера, настоятельно рекомендуется добавить этап очистки бусин перед выбором размера. Этап выбора размера может быть выполнен напрямую, если он выполняется до окончания ремонта/dA-tailing или после усиление библиотеки.
4. Перед использованием магнитные шарики следует выдержать при комнатной температуре, в противном случае выход снизится и повлияет на эффект выбора размера.
5. Перед использованием магнитные частицы следует тщательно перемешать с помощью вортекса или пипетки.
6. Не аспирируйте частицы при переносе супернатанта, даже следовые количества частиц могут повлиять на последующие реакции.
7. 80%-ный этанол должен быть свежеприготовленным, в противном случае это повлияет на эффективность восстановления.
8. Для точного подбора размера рекомендуется начинать с объема более 100 мкл. Если меньше, рекомендуется довести объем до 100 мкл сверхчистой водой.
9. Магнитные бусины следует высушить при комнатной температуре перед элюированием продукта. Недостаточная сухость легко может привести к тому, что остаточный этанол повлияет на последующие реакции; чрезмерная сухость приведет к растрескиванию магнитных бусинок и снижению выхода очистки. Обычно сушки при комнатной температуре в течение 3-5 минут достаточно, чтобы бусины полностью высохли.
10. При необходимости очищенные или отобранные по размеру образцы ДНК элюируются в 0.1× Буфер TE можно хранить при температуре 4°C в течение 1-2 недель или при температуре -20°C в течение месяца.
5. Усиление библиотеки
1. Проводить или нет амплификацию библиотеки зависит от количества входной ДНК, типов адаптеров, приложений данных секвенирования и т. д. Этап амплификации требуется при использовании частичных адаптеров. При использовании полноразмерных адаптеров, если входная ДНК < 200 нг, рекомендуется проводить амплификацию; в противном случае амплификация не требуется.
2. Число циклов амплификации должно строго контролироваться. Недостаточная амплификация может привести к низкому выходу библиотеки; Чрезмерная амплификация может привести к увеличению смещения, ошибок, дублированного чтения и химерных продуктов. Таблица 6 перечислены рекомендуемые числа циклов, ориентированные на выход библиотеки 1 мкг.
Стол 6 Рекомендуемое количество циклов для генерации 1000 нг выхода библиотеки
| Ввод ДНК | Количество циклов, необходимое для получения 1 мкг библиотеки |
| 1000 нг | 2 - 4 |
| 500 нг | 2 - 4 |
| 250 нг | 4 - 6 |
| 100 нг | 5 - 7 |
| 50 нг | 7 - 9 |
| 10 нг | 9 - 11 |
| 5 нг | 10 - 12 |
| 1 нг | 12 - 15 |
| 100 стр. | 16 - 18 |
Примечание：
1.Стол 6 показывает количество параметров цикла с использованием высококачественных тестов входной ДНК размером около 200 п.н. Качество ДНК FFPE сильно варьируется, и если качество ДНК плохое или длина библиотеки большая, количество циклов необходимо соответствующим образом увеличить для получения достаточного количества библиотек.
2.яЕсли в процессе построения библиотеки требуется выбор размера, рекомендуется использовать большее количество циклов для усиления библиотеки; в противном случае рекомендуется меньшее количество циклов.
3.яЕсли используются неполные адаптеры, необходимо провести амплификацию не менее 2 циклов для формирования полного адаптера.
6. Анализ качества библиотеки
1. Качество созданных библиотек обычно анализируется путем измерения концентраций и распределений размеров.
2. Библиотеки'Концентрации можно измерить с помощью флуоресцентных методов, таких как Qubit и PicoGreen, или количественной ПЦР.
3.НЕ рекомендуется использовать методы количественной оценки, основанные на поглощении, такие как NanoDrop.
4. Рекомендуется использовать метод qPCR для количественной оценки библиотеки: флуоресцентные методы, такие как Qubit и PicoGreen, не могут дифференцировать неполные структуры dsDNA (вставки без адаптера или только с одним из концов, лигированным с адаптером) от полных библиотек. Метод qPCR будет амплифицировать и измерять только полные библиотеки с обоими концами, лигированными с адаптерами (секвенируемые библиотеки), тем самым обеспечивая более точное измерение для загрузки.
5. Распределение размеров библиотек можно проанализировать с помощью Agilent Bioanalyzer или других устройств, основанных на принципах капиллярного электрофореза или микрофлюидики.
7. Другие материалы
1. Магнитные шарики для очистки ДНК: Hieff NGSТМ Бусины для отбора ДНК (Yeasen Cat#12601) или AMPure® XP Beads (A63880) или другие эквивалентные продукты.
2. Адаптеры: Полный адаптер для Illumina: Йесен Кот#13519-13520; 384 Двойных праймера CDI: Йесен Кот#12412~Кот#12413; 384 уникальных праймера с двойным индексом (UDI): Йесен Кат#12312~Кот#12315; UMI UDI-адаптеры: Йесен Кот#13370~Кот#13371; Полный адаптер для MGI: Yeasen Cat#13360-13362. Смесь ДНК-праймеров:Кот#12190 или Кот#12191.
3. Анализ качества библиотеки: чип Agilent 2100 Bioanalyzer DNA 1000/чип высокой чувствительности или другие эквивалентные продукты; количественные реагенты библиотеки.
4. Другие материалы: абсолютный этанол, стерильная сверхчистая вода, наконечники для пипеток с низкой степенью удержания, пробирки для ПЦР, магнитные стойки, термоциклер и т. д.
Инструкции
Шаг 1. Конец ремонта/dA-Taling
1. Оттепель реагенты, указанные в таблице 7 . Переверните, чтобы тщательно перемешать реагенты, и поместите их на лед для дальнейшего использования.
2. Соберите реагенты согласно таблице. 7 на льду.
Стол 7 Система реакции End Repair/dA-Tailing
| Компоненты | Объем (мкл) |
| Фрагментированная ДНК | х |
| Конечный буфер подготовки | 7 |
| Эндпреп Фермент | 3 |
| ддх2О | До 60 |
3. Аккуратно перемешайте пипеткой или встряхиванием. Немного отцентрифугируйте, чтобы раствор осел.
4. Поместите пробирку в термоциклер и установите программу согласно таблице 8.
Стол 8 Конец ремонта/dA-хвост программа реакции
| Температура | Время |
| Нагрейте крышку до 105 °С | На |
| 30 °С | 30 мин. |
| 72 °С | 30 мин. |
| 4 °С | Держать |
Шаг 2. Лигирование адаптера
1. Разбавьте адаптер до необходимой концентрации согласно Таблице 2.-5.
2. Оттепель реагенты, указанные в таблице 9 . Переверните, чтобы тщательно перемешать реагенты, и поместите их на лед для дальнейшего использования.
3. Соберите реагенты согласно таблице. 9 на льду.
Стол 9 Лигирование адаптера повторносистема действий
| Компоненты | Объем (мкл) |
| ДНК с dA-хвостом（Продукт из шага 1） | 60 |
| Усилитель лигирования | 30* |
| ДНК-адаптер | 5** |
| Стремительный ДНК-лигаза Т4 | 10 |
| ддH2O | 5 |
| Общий | 110 |
Примечание: *Ligation Enhancer вязкий. Пожалуйста, тщательно перемешайте переворачиванием или вертексированием и перед использованием немного центрифугировать.
**Первоначальная концентрация ИллюминаТМ Адаптер YEASE составляет 15 мкМ. Разбавьте адаптер в соответствии с количеством ввода. и объем адаптера зафиксируйте на уровне 5 мкл.
**Первоначальная концентрация МГИТМ адаптер YEASE - 10 мкМ. Разбавьте адаптер в соответствии с вводимым количеством. и объем адаптера зафиксируйте на уровне 5 мкл.
4. Тщательно перемешайте, осторожно пипетируя вверх и вниз, и быстро центрифугируйте, чтобы собрать всю жидкость со стенок пробирки..
5. Инкубируйте образец в предварительно нагретом термоциклере, как показано в таблице. 10 и выполнить реакцию подключения адаптера.
Стол 10 Программа реакции лигирования адаптера
| Температура | Время |
| Нагрейте крышку до 105°С | Выключенный |
| 20°С | 15 мин. |
| 4°С | Держать |
Шаг 3. Очистка или выбор размера после лигирования адаптера
Этот шаг заключается в очистке или отборе по размеру продукта на этапе 2 с магнитными шариками. Очистка может удалить остатки адаптеров, адаптерные димеры или другие непригодные продукты.
Клеан из ДНК, лигированной адаптером
1. Подготовка: пройдите тест Hieff NGSТМ Бусины для отбора ДНК из холодильника и дайте им выстояться при комнатной температуре не менее 30 минут. Приготовьте 80% свежего этанола.
2. Тщательно перемешайте бусины переворачиванием или встряхиванием.
3. Добавлять 88 мкл Хайфф NGSТМ Бусины для отбора ДНК (0.8×, Бусины: ДНК = 0.8:1) в пробирку, содержащую продукт, связанный с адаптером, встряхните, тщательно перемешайте и инкубируйте при комнатной температуре в течение 5 минут.
4. Центрифугируйте недолго, чтобы опустить раствор, и поместите центрифужную пробирку на магнитную стойку. После того, как магнитные шарики полностью адсорбируются (примерно через 5 мин), осторожно удалите жидкость.
5. Держите трубку на магнитной подставке, Добавьте непосредственно в пробирку 200 мкл свежеприготовленного 80% этанола. Инкубируйте при комнатной температуре в течение 30 секунд и осторожно удалите жидкость.
6. Повторить шаг 5 еще раз.
7. Поместите пробирку на магнитную подставку, откройте крышку и высушите бусины до тех пор, пока они не потрескаются (не более 5 минут).
8. Снимите пробирку с магнитного штатива для элюирования. и элюировать ДНК
1). Если продукт не требует выбора размера, добавьте 21 мкл ddH2O напрямую. Тщательно перемешайте путем вортексирования или пипетирования вверх и вниз 10 раз. Инкубируйте при комнатной температуре в течение 5 мин. Быстро центрифугируйте пробирку и поместите ее на магнитный штатив. Когда раствор станет прозрачным (примерно через 5 мин), осторожно перенесите 20 мкл супернатанта в новую пробирку для ПЦР, не касаясь магнитных шариков.
2). Если необходимо выбрать размер продукта, добавьте 102 мкл ddH.2O напрямую. Тщательно перемешайте путем вортексирования или пипетирования вверх и вниз 10 раз. Инкубируйте при комнатной температуре в течение 5 мин. Быстро центрифугируйте пробирку и поместите ее на магнитный штатив. Когда раствор станет прозрачным (примерно через 5 мин), осторожно перенесите 100 мкл супернатанта в новую пробирку для ПЦР, не касаясь магнитных шариков.
Примечание: Если очищенный продукт необходимо сохранить, его можно элюировать буфером TE.
Выбор размера ДНК, лигированной с адаптером
1.Подготовка: пройдите тест Hieff NGSТМ Бусины для отбора ДНК из холодильника и дайте им выстояться при комнатной температуре не менее 30 минут. Приготовьте 80% свежего этанола.
2. Тщательно перемешайте бусины переворачиванием или встряхиванием.
3. На основе целевых размеров добавьте первую порцию гранул к 100 мкл очищенных ДНК-шаблонов в соответствии с таблицей. 11. Тщательно перемешайте путем встряхивания или пипетирования 10 раз.
Стол 11 Рекомендуемые соотношения бусины:ДНК для выбора размера бусины
| Размер вставленной библиотеки ДНК | 150 - 250 п.н. | 200-300 п.н. | 300-400 п.н. | 400-500 п.н. |
| Окончательный размер библиотеки ДНК | 250-350 п.н. | 350-450 п.н. | 450-550 п.н. | 550-650 п.н. |
| Объемное соотношение в 1 ул круглый (Бусины:ДНК) | 0,80× | 0,70× | 0,60× | 0,55× |
| Объемное соотношение в 2 й круглый (Бусины:ДНК) | 0,20× | 0,20× | 0,20× | 0,15× |
Примечание: "×" в таблице указывает объем образца ДНК. Например, если длина вставки библиотеки составляет 250 п.н., а объем образца ДНК составляет 100 мкл, объем магнитных шариков, используемых в первом раунде сортировки, составляет 0,7×100 мкл=70 мкл; объем магнитных шариков, используемых во втором раунде сортировки, составляет 0,20×100 мкл=20 мкл. Рекомендуемый объем шариков в таблице указан для ДНК, лигированной адаптером. Если процедура выбора размера выполняется до лигирования, см. производственные протоколы Hieff NGSТМ Бусины для отбора ДНК (кат. № 12601).
4. яинкубировать при комнатной температуре в течение 5 минут.
5. Быстро вращайте пробирку и поместите ее на магнитный штатив. Когда раствор станет прозрачным (примерно через 5 мин), перенесите супернатант в новую пробирку для ПЦР.
6. Добавьте вторую серию отборочных бусин к образцу из шага 5. согласно таблице 11.Тщательно перемешайте, встряхивая или пипетируя не менее 10 раз.
7. яинкубировать при комнатной температуре в течение 5 минут.
8. Центрифугируйте недолго, чтобы опустить раствор, и поместите центрифужную пробирку на магнитную стойку. После того, как магнитные шарики полностью адсорбируются (примерно через 5 мин), осторожно удалите жидкость.
9. Держите трубку на магнитной подставке, Добавьте непосредственно в пробирку 200 мкл свежеприготовленного 80% этанола. Инкубируйте при комнатной температуре в течение 30 секунд и осторожно удалите жидкость.
10. Повторить шаг 9 снова.
11. Поместите пробирку на магнитную подставку, откройте крышку и высушите бусины до тех пор, пока они не потрескаются (не более 5 минут).
12. Снимите пробирку с магнитного штатива для элюирования., и непосредственно добавьте 21 мкл ddH2O. Тщательно перемешайте встряхиванием или пипетированием вверх-вниз и инкубируйте при комнатной температуре в течение 5 минут. (Примечание: если необходимо сохранить очищенный продукт, пожалуйста, элюируйте в буфере TE.) Быстро опустите пробирку и поместите ее на магнитный штатив, пока жидкость не станет прозрачной (около 5 минут). Осторожно перенесите 20 мкл супернатанта в новую пробирку для ПЦР, не касаясь гранул.
Шаг 4 Усиление библиотеки
На этом этапе можно обогатить очищенные или отобранные по размеру продукты с помощью ПЦР-амплификации.
1. Разморозить список реагентов в таблице 12, переверните, тщательно перемешайте и поставьте на лед для дальнейшего использования.
2. Проведите следующую реакцию в стерилизованной пробирке для ПЦР.
Стол 12 реакция ПЦР с лигированной ДНК-адаптером система
| Компоненты | Объем (мкл) |
| Адаптер лигированной ДНК | 20 |
| КанасТМ Профессиональный микс усиления | 25 |
| Смесь грунтовки* | 5 |
| Общий | 50 |
[Примечание]: * если использовался полный адаптер, Хайфф NGSТМ Смесь грунтовки (Йесен Кот#12190 или Кат. № 12191) в необходимости; Если используется неполный адаптер (Cat#12412~Cat#12413, Cat#12312~Кот#12315, Кат. № 13370~Кат. № 13371), пожалуйста, ознакомьтесь с инструкцией к набору и используйте для амплификации индексный праймер, входящий в комплект.
3. Аккуратно перемешайте пипеткой или встряхиванием и недолго центрифугируйте, чтобы раствор осел.
4. Поместите пробирку в термоциклер и настройте программу согласно таблице. 13 чтобы начать усиление.
Стол 13 Программа реакции амплификации ПЦР
| Температура | Время | Цикл |
| Нагрейте крышку до 105°С | На | - |
| 98°С | 45 сек | 1 |
| 98°С |
|
См. таблицу 6 |
| 60°С | 30 сек. | |
| 72°С | 30 сек. | |
| 72°С | 1 мин. | 1 |
| 4°С | Держать | - |
Шаг 5 Очистка после амплификации/выбор размера
Чистый вверх шаги относятся к шаг 3. Хайфф NGSТМ Бусины для отбора ДНК (0,9×, Бусины:ДНК=0,9:1) используются для очистки продукта ПЦР. Если требуется выбор размера, см. шаг 3.
Шаг 6 Контроль качества готовых библиотек
Качество построенной библиотеки обычно оценивается путем измерения концентрации и распределения по размерам. Подробности см. в примечании 6.
Оплата и безопасность
Ваша платежная информация обрабатывается надежно. Мы не храним данные кредитной карты и не имеем доступа к информации вашей кредитной карты.
Расследование
Вам также может понравиться
Часто задаваемые вопросы
Продукт предназначен только для исследовательских целей и не предназначен для терапевтического или диагностического использования на людях или животных. Продукты и содержимое защищены патентами, товарными знаками и авторскими правами, принадлежащими Yeasen Biotechnology. Символы товарных знаков указывают на страну происхождения, а не обязательно на регистрацию во всех регионах.
Для некоторых приложений могут потребоваться дополнительные права интеллектуальной собственности третьих лиц.
Йесен привержен этической науке, полагая, что наши исследования должны затрагивать важнейшие вопросы, обеспечивая при этом безопасность и соблюдение этических стандартов.