Описание
Hifair™ V Мультиплексный одношаговый набор зондов ОТ-ПЦР (УДГ Плюс) представляет собой набор для мультиплексной количественной ПЦР на основе РНК в качестве матрицы. В процессе эксперимента обратная транскрипция и количественная ПЦР проводились в одной и той же пробирке, что упростило экспериментальную операцию и снизило риск контаминации.
В этом наборе первая цепь ДНК была эффективно синтезирована с помощью термостойкого HifairТМ V Обратная транскриптаза и количественно амплифицированная с помощью UNICONТМ HotStart Taq ДНК-полимераза. В состав набора в основном входит оптимизированный буфер MP, смесь ферментов и т. д. Буферный раствор уже содержит Mg2+ и dNTP. Кроме того, добавлены факторы, которые могут эффективно ингибировать неспецифическую амплификацию ПЦР и повышать эффективность амплификации множественных реакций qPCR, что может обеспечить эффективность амплификации и проводить до множественной реакции амплификации. Система dUTP/UDG была добавлена для эффективного предотвращения риска аэрозольного загрязнения.
Функции
Высокая чувствительность：Тщательно оптимизированная буферная система повышает чувствительность обнаружения шаблонов с низкой концентрацией до 250 копий/мл.；
Суперстабильность: продукт прошел испытания на стабильность в режиме реального времени в течение 18 месяцев.
Система защиты от загрязнения dUP/UDG：Внедрена система защиты от загрязнения dUTP/UDG для эффективного снижения аэрозольного загрязнения продукции, снижения ложных срабатываний и обеспечения достоверных результатов.；
Поддержка быстрой программы: совместима с быстрой программой, 40 минут могут дать результаты;
Компоненты
| Номер компонента | Имя | 13650ЭС50 (50 Т) | 13650ES60 (100 Т) | 13650ES80 (1000 Т) | 13650ES92 (10,000 Т) |
| 13650-А | 2×HifairТМ V MP-буфер | 750 мкл | 1.5 мл | 15 мл | 150 мл |
| 13650-Б | ХайфайрТМ V-ферментная смесь | 60 мкл | 120 мкл | 1,2 мл | 12 мл |
Примечание: 1) 2×HifairТМ V MP-буфер это аббревиатура от ХайфайрТМ V Мультиплексный одношаговый буфер зонда ОТ-ПЦР в режиме реального времени, который включает в себя dNTPs, dUTP, Mg2+, стабилизаторы, усилители и многое другое.
2) ХайфайрТМ V-ферментная смесь в основном содержит термостойкий HifairТМ V обратная транскриптаза, UNICONТМ HotStart Taq ДНК-полимеры и УДГаза.
Хранилище
Тон продукт должен быть хранится в -25°С~-15°С для 18 месяцев.
Инструкции
Реакционный состав
| Компоненты | Объем (мкл) | Конечная концентрация |
| 2×HifairТМ V MP-буфер | 15 | 1× |
| ХайфайрТМ V Ферментная смесь | 1.2 | - |
| Праймер / Зонд Микс (2.5 мкМ) | 3 | 0.25 мкМ |
| Шаблон РНК | 1-10 | - |
| Свободная от РНКазы H2О | до 30 | - |
Примечание：Перед использованием обязательно тщательно перемешайте, избегайте образования избыточных пузырьков из-за сильной вибрации.
а) Грунтовка/Зонд концентрация: Праймер смесь, включающая мультиплексную грунтовку, В зависимости от ситуации оптимальная концентрация праймера может составлять от 0,1 до 1,0 мкМ.Смесь зондов, включающая мультиплексную маркировку зондов, различающуюся флуоресцентной группой, в зависимости от ситуации оптимальная концентрация зонда может составлять от 0,05 до 0.5 мкМ.
c) Разбавление шаблона: qPCR очень чувствителен, и рекомендуется разбавлять шаблон. Контрольное значение Ct подходит между 20 и 35.
г) Подготовка системы: снимите головку с фильтрующего элемента. Избегайте перекрестного загрязнения и аэрозольного загрязнения.
Оптимизированный протокол велоспорта
|
| Стадия реакции | Температура | Время | Цикл |
| 1 | Обратная транскрипция | 50°Са | 10 мин. | 1 |
| 2 | Начальная денатурация | 95°С | 5 мин. | 1 |
| 3 | Реакция амплификации | 95°С |
| 45 циклов |
| 60°Сб | 30 сек.с |
Примечание：а) Робратная транскрипция: Температуру можно выбрать 42°С или 50°С на 10-15 минут.
б) Реакция амплификации: Температура регулируется в соответствии со значением Tm разработанных праймеров.
в) Получение сигнала флуоресценции: Пожалуйста, установите экспериментальную процедуру в соответствии с требованиями руководства по эксплуатации прибора.
3. Приложение оборудование
Оборудование с Rox：ABI 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Fast, StepOne™, StepOne Plus™
Оборудование с Low Rox：ABI 7500, 7500 Fast, ViiA™7, QuantStudio™ 3 и 5, QuantStudio™ 6,7,12k Flex
Stratagene MX3000P™, MX3005P™, MX4000P™
Оборудование без Rox：
Био-Раd CFX96™, CFX384™, iCycler iQ™, iQ™5, MyiQ™, MiniOpticon™, Opticon®, Opticon® 2, Chromo4™
Эппендорф Mastercycler® ep realplex, realplex 2 с; Цягень Корбетт Ротор-Ген® Q, Ротор-Ген® 3000, Ротор-Ген® 6000
Roche Прикладная наука LightCycler® 480, LightCycler® 2.0, Lightcycler® 96
Термо Научный циклер PikoReal; Цефеида SmartCycler®; Иллюмина Эко ПЦР
Примечания
Пожалуйста, надевайте необходимые СИЗ, такие как лабораторный халат и перчатки, для обеспечения вашего здоровья и безопасности.！
Пожалуйста, используйте расходные материалы без RNasefree. для эксперимент.
Тест на чувствительность
13650, хранившиеся при -20°C в течение 18 месяцев (экспериментальная группа), и те, которые находились в пределах срока годности (контрольная группа), были одновременно протестированы на градиентное разбавление (500 копий/мл, 250 копий/мл) псевдовируса SARS-CoV-2, нацеленного на ген ORF и ген N. Восемь повторных лунок были протестированы для каждой концентрации с частотой обнаружения 100%. Более того, не было выявлено существенных различий в формах пиков кривой амплификации и значениях Ct.
| Много | FAM (число положительных результатов) | VIC(число положительных результатов) | ||
| 250копий/мл | 500копий/мл | 250копий/мл | 500копий/мл | |
| экспериментальная группа | 8/8 | 8/8 | 8/8 | 8/8 |
| контрольная группа | 8/8 | 8/8 | 8/8 | 8/8 |
Тест стабильности в реальном времени
13650, хранившиеся при -20°C в течение 18 месяцев, и те, у которых еще не истек срок годности. Обе группы были одновременно протестированы на ген ORF псевдовируса SARS-CoV-2 и ген N в концентрации 1000 копий/мл с 20 повторными лунками. Уровень обнаружения для обоих составил 100%, и не было никаких существенных различий в форме кривых амплификации или значениях Ct.
Рисунок 1. Рред.: 13650 в пределах срока годности；синий：13650 хранить при температуре -20°C в течение 18 месяцев。
Стабильные характеристики после многократных циклов замораживания-оттаивания
Подвергнув реагент 13650 30 и 50 циклам замораживания-оттаивания с использованием сухого льда вместе с реагентами, хранящимися в обычных условиях при температуре -20 °C, и одновременно проверив ген ORF псевдовируса SARS-CoV-2, результаты показали, что эффективность реагента 13650 не изменилась после 50 циклов замораживания-оттаивания.
Рисунок 2. Красный: 13650 хранится при нормальной температуре -20°C; Фиолетовый：13650-30 циклов замораживания-оттаивания；Зеленый：13650–50 циклов замораживания-оттаивания.
Совместимость со стандартными и быстрыми протоколами
Используя 13650ES, ген ORF и ген N псевдовируса SARS-CoV-2 были обнаружены в одной и той же системе реакции как со стандартными, так и с быстрыми протоколами. Результаты показали, что в 4-плексной системе не было никакой разницы в форме пика кривой амплификации и значениях Ct между двумя протоколами.
Документы:
Оплата и безопасность
Ваша платежная информация обрабатывается надежно. Мы не храним данные кредитной карты и не имеем доступа к информации вашей кредитной карты.
Расследование
Вам также может понравиться
Часто задаваемые вопросы
Продукт предназначен только для исследовательских целей и не предназначен для терапевтического или диагностического использования на людях или животных. Продукты и содержимое защищены патентами, товарными знаками и авторскими правами, принадлежащими Yeasen Biotechnology. Символы товарных знаков указывают на страну происхождения, а не обязательно на регистрацию во всех регионах.
Для некоторых приложений могут потребоваться дополнительные права интеллектуальной собственности третьих лиц.
Йесен привержен этической науке, полагая, что наши исследования должны затрагивать важнейшие вопросы, обеспечивая при этом безопасность и соблюдение этических стандартов.