Описание
Hifair™ Super Reverse Transcriptase — это обратная транскриптаза нового поколения., который был енсконструированный из M-MLV. Этот фермент не имеет активности РНКазы H и демонстрирует значительно улучшенную термостабильность, выдерживая температуру реакции до 70°C. Он отлично подходит для эффективной обратной транскрипции РНК-шаблонов со сложными вторичными структурами.
Приложения
Этот продукт подходит для экспериментов по ОТ-ПЦР, ОТ-кПЦР, ОТ-LAMP, РНК-сек и синтезу кДНК. Температура реакции обратной транскрипции может достигать 70°C.
Определение единицы измерения
Одна единица (Е) активности фермента определяется как количество фермента, необходимое для включения 1 нмоль dTTP в кислотонерастворимый материал в течение 10 минут при температуре 37°C, используя Poly(A).Oligo(dT) в качестве шаблона-праймера.
Компонент
| Компонент | Имя | 14612ES92 | 14612ES93 |
| 14612 | Hifair™ Супер обратная транскриптаза (200 ед./мкл) | 50 мкл | 250 мкл |
Условия хранения
Хранить при температуре от -25˚C до -15˚C в течение 18 месяцев.
Инструкция по применению
Процедура синтеза первой цепи ДНК
1. Денатурация РНК (необязательный шаг)
1. Денатурация РНК помогает открыть вторичные структуры, значительно улучшая выход первой цепи кДНК.
| Компонент | Объем |
| ddH2O без РНКазы | до 13 мкл |
| Олиго(dT)18 (50 мкМ) или случайные праймеры (50 мкМ) или ген-специфические праймеры (2 мкМ) | 1 мкл |
| Шаблон РНК | Общая РНК: 10 пг – 5 мкг или мРНК: 10 пг – 500 нг |
· Нагревайте при температуре 65°C в течение 5 минут, затем быстро охладите на льду в течение 2 минут.
· Кратковременно центрифугируйте, чтобы собрать реакционную жидкость, и добавьте смесь для реакции обратной транскрипции, как показано ниже.
2. Установка для реакции обратной транскрипции (система объемом 20 мкл)
| Компонент | Объем |
| Реакционная смесь из предыдущего шага | 13 мкл |
| 5× Реакционный буфер | 4 мкл |
| Смесь dNTP (10 мМ) | 1 мкл |
| Hifair® Super Reverse Transcriptase (200 ед./мкл) | 1 мкл |
| Ингибитор РНКазы (40 ЕД/мкл) | 1 мкл |
3. Настройки программы обратной транскрипции
| Температура | Время |
| 25°С* | 5 мин. |
| 50-70°С | 15-30 мин. |
| 85°С** | 5 мин. |
*При использовании случайных праймеров инкубируйте при 25°C в течение 5 минут. При использовании олиго(dT)18 или геноспецифических праймеров этот шаг можно пропустить.
Нагревание при температуре 85°C в течение 5 минут инактивирует обратную транскриптазу и может быть отрегулировано по мере необходимости.
Продукт обратной транскрипции можно использовать немедленно для последующих реакций ПЦР или количественной ПЦР, хранить кратковременно при температуре -20°C или долговременно при температуре -80°C после аликвотирования, чтобы избежать циклов замораживания-оттаивания.
Меры предосторожности
1. Поддерживайте чистоту лабораторной среды; надевайте чистые перчатки и маски. Убедитесь, что все экспериментальные расходные материалы не содержат РНКазы, чтобы предотвратить загрязнение.
2. Все операции выполняйте на льду, чтобы предотвратить деградацию РНК.
3. Используйте высококачественные образцы РНК для обеспечения эффективности обратной транскрипции.
4. Данный продукт предназначен только для исследовательских целей.
5. Для вашей безопасности и здоровья при работе с продуктом надевайте лабораторный халат и одноразовые перчатки.
Документы:
Оплата и безопасность
Ваша платежная информация обрабатывается надежно. Мы не храним данные кредитной карты и не имеем доступа к информации вашей кредитной карты.
Расследование
Вам также может понравиться
Часто задаваемые вопросы
Продукт предназначен только для исследовательских целей и не предназначен для терапевтического или диагностического использования на людях или животных. Продукты и содержимое защищены патентами, товарными знаками и авторскими правами, принадлежащими Yeasen Biotechnology. Символы товарных знаков указывают на страну происхождения, а не обязательно на регистрацию во всех регионах.
Для некоторых приложений могут потребоваться дополнительные права интеллектуальной собственности третьих лиц.
Йесен привержен этической науке, полагая, что наши исследования должны затрагивать важнейшие вопросы, обеспечивая при этом безопасность и соблюдение этических стандартов.