ArCas12a, полученный из системы CRISPR Агатобактер ректалис бактерии, также известные как Cpf1, представляют собой мономерный белок, состоящий из 1263 аминокислот. Как член класса II (тип V) системы CRISPR/Cas, ArCas12a функционирует исключительно через один эффекторный белок и демонстрирует значительные отличия от Cas9, такие как нацеливание на мотивы, богатые T, отсутствие необходимости в трансактивирующей crRNA, образование липких концов при разрывах двухцепочечной ДНК, участие в процессинге РНК и наличие активности ДНК-нуклеазы.

ArCas12a не имеет домена HNH и может независимо использовать свой домен RuvC для распознавания области PAM, богатой тимином (T) на 5'-конце целевой нуклеиновой кислоты под руководством CRISPR РНК (crRNA), инициируя расщепление целевой ДНК. Он успешно использовался для редактирования генома у многих млекопитающих и растений. Кроме того, ArCas12a проявляет активность транс-расщепления, способную без разбора разрезать нецелевую одноцепочечную ДНК (ssDNA) в реакционной системе.

По сравнению с другими LbCas12a/AsCas12a, ArCas12a демонстрирует более высокую температурную адаптивность (25-55^оС), что делает его пригодным для приложений редактирования генома и обнаружения нуклеиновых кислот.

Функции

Широкий диапазон температур реакции: Проявляет расщепляющую активность в диапазоне температур 25-55^оС

Низкий остаток нуклеазы: Отсутствие остаточной экзонуклеазы, никазы или РНКазы

Активность цис-расщепления: Высокоэффективное расщепление двухцепочечной ДНК in vitro

Активность транс-расщепления: Высокая активность трансрасщепления, подходит для обнаружения нуклеиновых кислот

Приложения

Редактирование генов CRISPR/Cas

Диагностика и обнаружение на основе системы CRISPR/Cas

Другие приложения для обнаружения в сочетании с технологиями изотермической амплификации нуклеиновых кислот (RPA и LAMP) и т. д.

Технические характеристики

Компоненты

Доставка и хранение

Этот продукт следует хранить при температуре от -25 до -15.^оС на 2 года.

Цифры

Фигура 1. Тест активности цис-расщепления ArCas12a: M: Маркер; C: Матрица двухцепочечной ДНК (dsDNA)

Примечание: Под руководством crRNA он может эффективно расщеплять dsDNA (600 п.н.) с образованием двух фрагментов (200 п.н. + 400 п.н.).

Фигура 2. Результаты теста активности транс-расщепления ArCas12a

Примечание: Используя dsDNA в качестве мишени, ArCas12a, crRNA и репортерный зонд ssDNA (содержащий флуоресцентную репортерную группу) были добавлены для расщепления in vitro. Как только ArCas12a образует комплекс с crRNA и целевой ДНК, он активирует транс-расщепление, разрезая репортерный зонд ssDNA, тем самым испуская флуоресценцию.

Документы:

Паспорт безопасности

14702_Паспорт безопасности_Вер.EN20241205.pdf

Руководства

14702_Руководство_Ver.EN20241205.pdf