Нуклеаза AapCas12b (также известная как C2c1) — это ДНК-эндонуклеаза, опосредованная tracrRNA:crRNA (или sgRNA), полученная из термофильной бактерии Ацидофильные бактерии. При наличии последовательности PAM (TTN) в целевой двухцепочечной ДНК (dsDNA) он специфически расщепляет целевую dsDNA, вызывая двухцепочечные разрывы и создавая липкие концы. AapCas12b может специфически расщеплять одноцепочечные ДНК-мишени независимо от последовательности PAM. Как двухцепочечные, так и одноцепочечные ДНК-мишени могут активировать транс-расщепленную активность AapCas12b. Когда фермент AapCas12b образует тройной комплекс с sgRNA и целевой ДНК, он активируется для неспецифической транс-расщепленной активности ssDNA, разрезая любую произвольную последовательность ssDNA в системе. Оптимальная температура реакции расщепления для AapCas12b составляет 60^оС, что делает его более термостойким, чем AacCas12b, и более подходящим для использования с LAMP для разработки систем изотермической амплификации/детекции CRISPR-Cas.

Функции

Широкий диапазон температур реакции: Проявляет активность расщепления в диапазоне температур 37~65^оС

Низкий остаток нуклеазы: Отсутствие остаточной экзонуклеазы, никазы или РНКазы

Активность цис-расщепления: Высокоэффективное расщепление двухцепочечной ДНК in vitro

Активность транс-расщепления: Высокая активность трансрасщепления, подходит для обнаружения нуклеиновых кислот

Приложения

Редактирование генов CRISPR/Cas

Диагностика и обнаружение на основе системы CRISPR/Cas

Другие приложения для обнаружения в сочетании с технологиями изотермической амплификации нуклеиновых кислот (RPA и LAMP) и т. д.

Технические характеристики

Компоненты

Корабльпинг и хранение

Этот продукт следует хранить при температуре от -25 до -15.^оС на 2 года.

Цифры

Фигура 1. Проверка активности цис-расщепления нуклеазы AapCas12b

Примечание: В 20 μL-реакционная система, содержащая целевую dsDNA с последовательностью PAM, sgRNA, Cas12b и 1×Реакционный буфер, смесь инкубировали при 60^оС в течение 30 минут, а затем инактивируется при 85^оС в течение 5 минут. Результаты электрофореза в агарозном геле показали, что все три партии нуклеазы AapCas12b были способны эффективно расщеплять двухцепочечную ДНК, причем эффективность расщепления была сопоставима с эффективностью импортной марки T*.

Фигура 2. Результаты теста на активность транс-расщепления нуклеазы AapCas12b

Примечание: В 20 μL-реакционная система, содержащая целевую двуцепочечную ДНК с последовательностью PAM, одноцепочечную РНК, Cas12b, флуоресцентный зонд одноцепочечной ДНК и 1×Реакционный буфер, смесь инкубировали при 60^оС в течение 1 часа, и сигнал флуоресценции собирался каждые 30 секунд. Результаты показали, что в присутствии Target DNA, sgRNA и Cas12b вместе, флуоресцентный зонд Report ssDNA мог быть расщеплен, тем самым высвобождая сигнал флуоресценции.

Документы:

Паспорт безопасности

14808_Паспорт безопасности_Вер.EN20241209.pdf

Руководства

14808_Руководство_Ver.EN20241209.pdf