Хайфф NGS^ТМ UCF.ME Гранулы для отбора ДНК готовятся на основе принципа SPRI (твердофазной обратной иммобилизации). и применим для очистки ДНК и выбора размера при подготовке библиотек секвенирования следующего поколения (NGS). Hieff NGS^ТМ UCF.ME Бусины для отбора ДНК совместимы с различными наборами для подготовки библиотек ДНК и РНК. Этот продукт производится на сверхчистом предприятии с высоким уровнем чистоты и может использоваться на этапе очистки ДНК во время процессов обнаружения патогенов.

Технические характеристики

Компоненты

Хранилище

Этот продукт следует хранить при температуре 2~8℃ в течение 18 месяцев.

Доставка и хранение

Бусины поставляются с пакетами со льдом и могут храниться при температуре от 2°C до 8°C в течение одного года.

Инструкции

• 1. Подготовка

Перед использованием выдержите селективные шарики при комнатной температуре не менее 30 минут.

• 2. Выбор размера ДНК

Последовательность операций выбора размера показана на рисунке 1, а протокол выглядит следующим образом.

Рисунок 1. Блок-схема выбора размера ДНК

2.1 Перед каждым использованием тщательно перемешивайте гранулы путем встряхивания или пипетирования.
2.2 Добавьте первый раунд отборочных шариков к образцу (см. Таблицу 1). Тщательно перемешайте путем вортексирования или пипетирования вверх и вниз не менее 10 раз.
2.3 Инкубируйте при комнатной температуре в течение 5 мин.
2.4 Быстро опустите пробирку и поместите ее на магнитный штатив. Когда раствор станет прозрачным (примерно через 5 мин), перенесите супернатант в новую пробирку для ПЦР.
2.5 Добавьте вторую порцию отборочных шариков к образцу из шага 2.4 в соответствии с таблицей 1. Тщательно перемешайте путем встряхивания или пипетирования вверх и вниз не менее 10 раз.
2.6 Инкубируйте при комнатной температуре в течение 5 мин.
2.7 Быстро центрифугируйте пробирку и поместите ее на магнитный штатив. Когда раствор станет прозрачным (примерно через 5 мин), аспирируйте надосадочную жидкость и выбросьте ее.
2.8. Держите пробирку в магнитном штативе и добавьте 200 мкл свежеприготовленного 80% этанола, не трогая гранулы, инкубируйте при комнатной температуре в течение 30 сек. Аспирируйте этанол и выбросьте.
2.9 Повторите шаг 2.8 один раз, чтобы выполнить в общей сложности две стирки.
2.10 Удалите остаточный этанол с помощью наконечников пипеток объемом 10 мкл. Держите пробирку в магнитном штативе, высушите на воздухе селективные бусины с открытой крышкой до тех пор, пока не появятся трещины (около 5 мин).
Примечание: Не пересушивайте отборочные бусины. Это может привести к снижению извлечения ДНК-мишени.
2.11 Снимите пробирку с магнитного штатива. Добавьте соответствующее количество ddH2O (≥20 мкл) и тщательно перемешайте путем встряхивания или пипетирования вверх и вниз не менее 10 раз.
2.12 Инкубируйте при комнатной температуре в течение 5 мин.
Быстро опустите пробирку и поместите ее на магнитный штатив. Когда раствор станет прозрачным (примерно через 5 минут), перенесите 20 мкл супернатанта в новую пробирку.

• 3.Рекомендуемые условия для выбора размера ДНК

ДНК тимуса теленка фрагментировали с помощью ультразвука для получения фрагмента размером 100–1000 п.н., и проводили два раунда отбора по размеру в соответствии с таблицей 1. Результаты анализировали с помощью биоанализатора Agilent 2100 (рисунок 2).

Таблица 1. Рекомендуемые условия для выбора размера ДНК

Примечание: «×» в таблице указывает объем образца ДНК. Например, если длина вставки библиотеки составляет 250 п.н., а объем образца ДНК составляет 100 мкл, объем магнитных частиц, используемых в первом раунде сортировки, составляет 0,80×100 мкл=80 мкл; объем магнитных частиц, используемых во втором раунде сортировки, составляет 0,20×100 мкл=20 мкл.

Рисунок 2. Электрофореграмма высокочувствительного ДНК-чипа Agilent 2100