The Магнитный Остаточный ДНК Образец Подготовительный комплект является подходящий для  предварительная обработка из остаточный ДНК в различный биологический образцов. Он может максимизировать разделение и очистку следовых количеств остаточной ДНК клетки-хозяина в образцах с помощью уникальных магнитных шариков и тщательно оптимизированная буферная система.

Магнитный Набор для подготовки образцов остаточной ДНК может использоваться с различными остаточными ДНК клеток-хозяев наборы для обнаружения, включая набор для обнаружения остатков ДНК клеток-хозяев CHO (Кат. № 41301ES), набор для обнаружения остатков ДНК в клетках-хозяевах HEK293 (Кат. № 41302ES), набор для обнаружения остатков ДНК в клетках-хозяевах Vero (Кат. № 41303ES), и набор для обнаружения остатков ДНК клетки-хозяина E.coli (Кат. № 41304ES).

Компоненты продукта

Доставка и хранение

1. Часть I поставляется с пакетом со льдом, 4°C в течение 1 года или -20°C для длительного хранения.

2. Часть II транспортируется при комнатной температуре и хранится в течение 1 года при комнатной температуре.

3. Часть III транспортируется на сухом льду и хранится при температуре -20°C. на 1 год.

4. После получения товара проверьте, пожалуйста, комплектность трех компонентов: Части I, Части II и Части III, и немедленно поместите их на хранение при соответствующей температуре.

Предостережения

1. Перед использованием внимательно прочтите инструкцию и действуйте в строгом соответствии с ней. Обработку образцов рекомендуется проводить на чистом столе или в боксе биологической безопасности.

2. Обратите внимание на наличие осадка или помутнения раствора, хранящегося при комнатной температуре (особенно если температура в помещении низкая, например, зимой). Вы можете подержать раствор в водяной бане при температуре 37 °C до тех пор, пока он не станет прозрачным, чтобы не повлиять на эффективность использования.

3. Во время элюирования могут оставаться остаточные магнитные частицы, поэтому старайтесь избегать аспирации магнитных частиц при отборе образцов.

4. Пожалуйста, чаще меняйте насадки, чтобы избежать перекрестного заражения при работе с данным продуктом.

5. Для вашей безопасности и здоровья при работе с данным продуктом надевайте средства индивидуальной защиты (СИЗ), такие как лабораторные халаты и одноразовые перчатки.

6. Данный продукт предназначен ТОЛЬКО для исследовательских целей!

Предварительная подготовка

1. Оборудование, предоставляемое самостоятельно: вихревой шейкер, водяная или металлическая баня, центрифуга, магнитная сепарационная стойка, автоматический экстрактор нуклеиновых кислот Hangzhou Aosheng Auto-Pure32A или полностью автоматические экстракторы нуклеиновых кислот других марок.

2. Расходные материалы, предоставляемые самостоятельно: 10 мкл-1000 мкл Наконечники для фильтров с низкой адсорбцией, центрифужные пробирки с низкой адсорбцией объемом 1,5 мл, пробирки для ПЦР или 96-луночные планшеты и соответствующие крышки для пробирок или мембраны.

3. Самостоятельно приготовленные реагенты: абсолютный этанол (чда), буфер 1×PBS (pH 7,4, без ионов Mg и Ca), сверхчистая вода.

4. При первом использовании добавьте в бутылки с моющим раствором A* и моющим раствором B* безводный этанол в объеме, указанном на этикетке или в инструкции. Тщательно перемешайте перед использованием и хорошо пометьте их. Плотно закройте бутылку после использования, чтобы сохранить уровень этанола в бутылке.

Ручное извлечение остаточной ДНК

1. Обработка образцов

1.1 Если образец содержит относительно высокое количество ДНК, например, вакцину, разбавьте его в соответствующей пропорции 1×PBS-буфером (pH 7.4, без ионов Mg и Ca) и затем извлечь (разбавление образца необходимо для того, чтобы значение обнаружения находилось в линейном диапазоне стандартной кривой, а затем обеспечить точность обнаружения. Обычно можно рассмотреть 100-кратное разбавление).

1.2 Если образец для испытания это сухой порошок, разбавьте его до 10 мг/мл или 100 мг/мл с сверхчистая вода перед использованием.

1.3 Если образец имеет сложную матрицу, следует провести стандартный эксперимент по добавлению и извлечению для определения соответствующего разбавления.

2. Добавьте 100 мкл образца в пробирку объемом 1,5 мл, затем добавьте 100 мкл лизирующего буфера, 10 мкл протеиназы К, встряхните и перемешивайте в течение 10 секунд.

[Примечания]: Добавьте 10 мкл протеиназы К, если концентрация образца белка составляет 0–100 мг/мл, и добавьте 20 мкл протеиназы К, если концентрация образца белка составляет 100–200 мг/мл.

3. Инкубировать при температуре 60°C. в течение 20 мин.

4. Затем добавьте 400 мкл связующего раствора, 9 мкл гликогена и 6 мкл калиевой соли поли А, тщательно перемешайте.

5. Добавьте 20 мкл магнитных шариков, встряхните и хорошо перемешайте, и дайте постоять 10 минут. Пожалуйста, встряхните и перемешайте в течение 10 секунд. каждые 3 минуты.

[Примечания]: Магнитные шарики необходимо встряхнуть перед использованием, чтобы убедиться, что магнитные шарики полностью ресуспендированы. После добавления образцов 4-5 раз за один раз рекомендуется снова перемешать.

7. Центрифугируйте недолго, чтобы опустить раствор, и поместите центрифужную пробирку на магнитную стойку на 1-2 минуты. После того, как магнитные шарики полностью впитаются, осторожно удалите жидкость.

8. Добавьте 500 мкл промывочного раствора A. (перед использованием проверьте, был ли добавлен абсолютный этанол), встряхните или перемешайте на вортексе, чтобы убедиться, что магнитные частицы диспергированы и на стенках центрифужной пробирки не осталось скоплений магнитных частиц.

9. Центрифугируйте недолго и поместите центрифужную пробирку на магнитную стойку на 1-2 минуты. После того, как магнитные шарики полностью впитаются, осторожно удалите жидкость.

10. Добавьте 500 мкл промывочного раствора B. (перед использованием проверьте, был ли добавлен абсолютный этанол), встряхните или перемешайте на вортексе, чтобы гарантировать, что магнитные частицы распределены и не скопились на стенках центрифужной пробирки.

11. Центрифугируйте недолго и поместите центрифужную пробирку на магнитную стойку на 1-2 минуты. После того, как магнитные шарики полностью впитаются, осторожно удалите жидкость.

12. Чтобы обеспечить максимальное удаление остаточной жидкости, центрифугируйте пробирку в течение 10 секунд. быстро поместите его на магнитную подставку и с помощью пипетки объемом 10 мкл отсосите остаточную жидкость.

13. Откройте крышку пробирки и оставьте ее при комнатной температуре на 3 минуты. до полного испарения этанола. Отсутствие отражения или появления трещин на поверхности магнитных шариков свидетельствует о том, что этанол полностью испарился.

14. Снимите пробирку с магнитного штатива, добавьте 50-100 мкл предварительно нагретого до 65°C элюата, встряхните и хорошо перемешайте. Затем недолго центрифугируйте, инкубируйте при 65°C в течение 5 минут, встряхивайте и перемешивайте каждые 2-3 минуты.

15. Снова быстро центрифугируйте, поместите центрифужную пробирку на магнитную стойку на 2 минуты. После того, как магнитные шарики полностью адсорбируются, осторожно перенесите раствор ДНК в новую центрифужную пробирку и храните ее при температуре -20°C или при температуре -80°C для длительного хранения.