Набор оснащен мощным лизирующим буфером, который может быстро лизировать образцы (например, клетки, мышиный хвост, мышиное ухо, мышиный палец, мышцу и т. д.) для высвобождения геномной ДНК, а лизат можно напрямую добавлять в систему реакции ПЦР без очистки, что удобно для работы. Кроме того, этот набор требует небольшого количества вводимого образца, для экспериментов можно использовать 5 мг мышиной ткани или 1-5 мм мышиного хвоста.

Компоненты

Хранилище

19697-А (Лизирующий раствор) следует хранить при температуре 2~8℃ для 1 годы. При многократном использовании заморозьте в отдельных упаковках, чтобы избежать перекрестного заражения. 19687-B (Стоп-решение) следует хранить в -25~-16℃ для 1 годы.

Инструкции

Выделение геномной ДНК мыши

1. Поместите 5–10 мг ткани животного или 1–5 мм хвоста мыши в центрифужную пробирку объемом 1,5 мл*.
2. Добавьте 90 мкл буфера ML в указанную выше центрифужную пробирку, осторожно встряхните, чтобы полностью пропитать образец лизатом, и кратковременно центрифугируйте.
3. Инкубируйте при температуре 95°C в течение 15 минут в термостатическом инкубаторе**.
4. Добавьте 10 мкл буфера MT, перемешайте и остановите лизис.
5. Дополнительный этап: центрифугирование при 12000 об/мин в течение 2 мин.
6. Перенесите супернатант в новую центрифужную пробирку и храните при температуре 4°C или -20°C или возьмите супернатант непосредственно для последующей ПЦР-амплификации.

* Ткань следует измельчать как можно больше, чтобы реакция лизиса протекала более гладко.

**Инкубация при 95°C в течение 15 мин обычно достаточна для большинства нужд ПЦР. Если требуется большее количество ДНК или образец трудно лизировать, время можно увеличить до 30 мин. Блок ткани не обязательно должен быть полностью лизирован, а остаток можно удалить на последующем этапе центрифугирования.

Выделение геномной ДНК клетки

После культивирования трансфицированных клеток в 48-луночном планшете в течение 3 дней и достижения плотности клеток около 70 000 клеток/лунку удалите среду как можно полнее. Затем добавьте 90 мкл буфера ML непосредственно в лунку и пипетируйте каждую лунку. Перенесите все в 96-луночный планшет для ПЦР. После обработки в машине для ПЦР при 95 °C в течение 5-15 минут и охлаждения добавьте 10 мкл буфера MT и равномерно и тщательно продуйте. Используя фермент высокой точности (кат. № 10164) или фермент Taq, добавьте 0,5-2 мкл клеточного лизата на каждые 50 мкл системы реакции ПЦР и проведите ПЦР.

Рисунок 1. Прямая ПЦР с клеточный лизат, обработанный 19697.

Примечания

1. Данный продукт предназначен только для исследовательских целей.
2. Для вашей безопасности работайте в защитных очках, лабораторных халатах и ​​одноразовых перчатках.
3. Чтобы избежать перекрестного загрязнения между образцами, необходимо после каждого отбора проб погружать край устройства для отбора проб или часть, непосредственно контактирующую с образцом, в 2% раствор гипохлорита натрия, промывать его несколько раз, а затем вытирать оставшуюся жидкость чистым бумажным полотенцем перед повторным использованием.Для удобства проведения испытания можно подготовить и единообразно очистить несколько устройств для отбора проб после использования, чтобы гарантировать, что каждый отдельный образец отбирается с помощью устройства для отбора проб, не содержащего загрязнений.
4. Рекомендуется использовать свежевзятые ткани животных. В случае длительно замороженных тканей следует по возможности избегать повторного замораживания и оттаивания, в противном случае это приведет к деградации матрицы и повлияет на эффективность ПЦР.

Документы:

Руководства