Гранулы конканавалина А (ConA) представляют собой суперпарамагнитные полимерные микросферы, ковалентно связанные с конканавалином А. (растительный маннозо/глюкозосвязывающий лектин, выделенный из семян злаковых растений) на их поверхности. Эти бусины обладают несколькими примечательные характеристики, включая монодисперсность и сильную магнитную реактивность. Когда Ca²⁺ и Мг²⁺ При наличии ионов магнитные частицы ConA могут эффективно и быстро разделять и очищать различные биомолекулы, такие как полисахариды, гликопротеины и гликолипиды, используя сродство между глобулином A ConA и концевыми группами α-D-маннозы и α-D-глюкозы.

Магнитные бусины ConA предлагают удобный метод разделения или фиксации клеток, гарантируя минимальную потерю клеток во время последующих этапов промывки. Кроме того, их можно использовать для сбора и фиксации ядер. Более того, эти бусины находят применение в инновационных методах, таких как CUT & Run и CUT & Tag, которые являются революционными подходами, используемыми в экспериментах ChIP-seq.

Подводя итог, можно сказать, что магнитные шарики ConA являются мощными инструментами для эффективной очистки биомолекул, удобного разделения и фиксации клеток, сбора ядер и применения в передовых экспериментальных технологиях.

Технические характеристики

Характеристики

Рисунки и таблицы

Таблица 1. Бусины Yeasen ConA имеют высокую скорость захвата. Количество конканавалина A (ConA), используемого пропорционально микросферам, было проверено для обеспечения максимальной связывающей способности при предотвращении чрезмерной агрегации магнитных бусин после связывания клеток в экспериментах CUT&Tag. Например, использование 10 мкл бусин, покрытых ConA, может связать количество клеток, эквивалентное уровням E7, с эффективностью связывания, превышающей 98%.

Рисунок 1. Бусины Yeasen ConA демонстрируют высокую дисперсность. В процессе маркировки бусин был выбран небиологический герметик, чтобы обеспечить эффективное закрытие без влияния различий между партиями. Это гарантирует отличную герметизацию магнитных бусин, сохраняя их высокую монодисперсность во время хранения бусин, покрытых ConA, что полезно для эффективного связывания с молекулами углеводов в последующих экспериментах.

Рисунок 2. Распределение сигнала хроматина CUT&Tag с использованием шариков Yeasen Con A.

Хранилище

Данный продукт следует хранить при температуре 2~8℃ в течение 2 лет.

Инструкции

В качестве примера ниже приведены операции по очистке гликопротеинов или выделению клеток. CUT&TAG эксперименты , см. протокол Yeasen Cat# 12598ES.

1. Приготовление буферов

1) Поставляется заказчиком

1. Необходимые материалы, не входящие в комплект: магнитная стойка, пробирки Эппендорфа, пробирки для ПЦР, магнитные стойки, термоциклеры. и т. д.
2. Уравновесить Бусины при комнатной температуре в течение как минимум 30 мин. Тщательно ресуспендируйте гранулы, встряхивая или встряхивая бутылку.

1. Обработка образцов（ Взяв в качестве примера клетки млекопитающих ）

1. Подготовьте клетки млекопитающих (1,0×10 ⁴~1.0×10 ⁵ клетки), центрифугируют (4℃，600×g, 3~5 мин) и осторожно отказаться супернатант.
2. Добавьте 140 мкл буфера для связывания, тщательно перемешайте и ресуспендируйте клетки, центрифугируйте и соберите (4℃, 600×g, 3~5 мин), осторожно. отказаться супернатант.
3. Добавьте 90 мкл связывающего буфера, тщательно перемешайте и ресуспендируйте клетки.
   Внимание: Плотно прилипшие клетки млекопитающих могут быть получены путем частичного переваривания с использованием фермента, такого как трипсин. Для тканей животных, растительных клеток или клеток грибов получение диспергированных клеток или протопластов часто требует специальной обработки, адаптированной к их конкретным характеристикам.

1. Подготовьте бусины ConA

1. Аккуратно пипетируйте гранулы ConA до полной суспензии, поместите 10 мкл суспензии гранул в новую центрифужную пробирку объемом 200 мкл.
2. Добавьте 40 мкл буфера для связывания, тщательно перемешайте и оставьте на магнитной подставке на 1 минуту. После того как магнитные частицы адсорбируются на боковой стенке центрифужной пробирки, слейте супернатант.
3. Добавьте 10 мкл буфера для связывания, тщательно перемешайте и ресуспендируйте гранулы ConA.

1. Образец переплета

1. Добавьте подготовленный образец клеток к предварительно обработанным гранулам, аккуратно пипетируйте ресуспендированные гранулы, затем инкубируйте на перевернутом миксере (комнатная температура в течение 30 минут или 4℃ в течение ночи).
2. Поставьте на магнитный штатив на 1 минуту, подождите, пока магнитные частицы адсорбируются на боковой стенке центрифужной пробирки, осторожно слейте надосадочную жидкость.
3. Добавлять 500 мкл буфера для элюирования комплекса клетка-бусины ConA и Аккуратно пипетируйте, чтобы ресуспендируйте бусины, затем Поставьте на магнитный штатив на 1 минуту, подождите, пока магнитные частицы адсорбируются на боковой стенке центрифужной пробирки, осторожно слейте надосадочную жидкость.
4. Повторите шаг 3) еще три или четыре раза.

1. Элюция

1. Для гликопротеинов добавьте 50~250 мкл буфера элюирования, аккуратно пипетируйте ресуспендированные гранулы, затем инкубируйте на перевернутом миксере (комнатная температура в течение 10~30 мин). После переворачивания смеси поставьте ее на магнитный штатив на 1 мин, соберите супернатант в новую пробирку объемом 1,5 мл для проведения SDS-PAGE или вестерн-блоттинга.
2. Для клеток нет необходимости в элюировании.

Примечания

1. Уравновесить КонА бусины при комнатной температуре перед использованием.
2. Избегайте замораживания, в противном случае произойдет деградация материала гранул или потеря активности.
3. Для активности ConA необходимо присутствие ионов Ca2+ и Mn2+, поэтому во время эксперимента следует избегать использования реагентов, содержащих ЭДТА или другие хелаторы ионов металлов.
4. При инкубации с клетками частицы ConA могут агрегировать, что является нормальным и не влияет на нормальное использование магнитных частиц.
5. Данный продукт предназначен только для исследовательских целей.
6. Для вашей безопасности работайте в лабораторных халатах и ​​одноразовых перчатках.

Руководство