Полиакриламидный гель (PAGE gel) часто используется для электрофореза белков с целью разделения белков. Этот тип геля обычно состоит из концентрированного геля и разделительного геля. Первый играет роль концентрирования образцов белков, в то время как последний разделяет белки разных размеров в зависимости от концентрации мономера акриламида и сшивающего агента N,N-метиленбисакриламида (метиленакриламида), используемых в геле.

Этот набор предоставляет разнообразные реагенты, необходимые для быстрого приготовления геля PAGE. Пользователям нужно только подготовить собственное оборудование для приготовления геля, что значительно упрощает процесс приготовления геля. Гель, приготовленный этим набором, может использоваться только для денатурирующего электрофореза в геле PAGE. Эта спецификация позволяет приготовить около 125 кусочков мини-геля (в расчете на гель толщиной 0,75 мм).

Технические характеристики

Компоненты

Доставка и хранение

Продукт поставляется с пакетом льда и может храниться при температуре 2℃~8℃ на 1 год.

Инструкции: Рекомендуется не наносить слишком много кусков геля за один раз, чтобы избежать слишком позднего добавления верхнего раствора (рекомендуется максимум 2-3 куска).

1.Выберите соответствующую концентрацию геля в соответствии с молекулярной массой целевого белка (см. таблицу 1)

2.Процесс изготовления геля (возьмем в качестве примера кусочек мини-геля 0,75/1,0/1,5 мм)

2.1 Возьмите равный объем буфера разделительного геля и раствора разделительного геля и смешайте их, т.е. возьмите 2,0/2,7/4,0 мл двух растворов соответственно.

2.2 Взвесьте 0,1 г персульфата аммония и растворите его в 1 мл деионизированной воды. Клиент должен приобрести персульфат аммония самостоятельно.

2.3 Добавьте 35/45/70 мкл APS к смешанному раствору на шаге 1 (количество используемого APS можно уменьшить вдвое, если затвердевание происходит слишком быстро) и тщательно перемешайте.

2.4 Впрысните раствор на шаге 2 в стеклянную пластину для приготовления геля. Обратите внимание, что концентрированный гель должен быть впрыснут в форму для геля в течение 2 минут после добавления разделительного геля, а заливка концентрированного геля должна быть медленной, чтобы предотвратить смешивание концентрированного геля и разделительного геля. Если человеку сложно настроить, его также можно адаптировать для настройки концентрированного геля после герметизации этанолом.

2.5 Приготовление концентрированного геля: возьмите равный объем концентрированного гелевого буфера и концентрированного гелевого раствора, т.е. возьмите 0,5/0,75/1,0 мл двух растворов соответственно, а затем добавьте 10/13/18 мкл APS и хорошо перемешайте.

2.6 Введите его в стеклянную пластину для приготовления геля и вставьте зубцы расчески (не прикладывайте чрезмерных усилий, вставляйте зубцы расчески осторожно).

2.7 После того, как концентрированный гель затвердеет в течение 15 минут, зубцы гребенки можно удалить и использовать для электрофореза. Примечание: пожалуйста, попробуйте использовать свежеприготовленный буфер для электрофореза.

Примечания

1. Предполагается, что напряжение при электрофорезе должно быть в пределах 100–120 В. При необходимости увеличения скорости электрофореза его можно увеличить до 150 В.

2. Перед заполнением гелем обязательно доведите гелевый раствор до комнатной температуры (например, выдержите его в течение нескольких минут), чтобы эффективно избежать образования пузырьков в геле.

3. Клиент должен приобрести персульфат аммония самостоятельно. Мы рекомендуем использовать продукт с кат. номером A3678 от Sigma.

4. Количество раствора персульфата аммония указано только для справки, а фактическое количество может быть увеличено или уменьшено в соответствии с личными экспериментальными привычками и опытом. Добавление большего количества персульфата аммония может ускорить скорость геля, и наоборот. Скорость коагуляции геля PAGE тесно связана с температурой и количеством персульфата аммония.

5. В этот продукт добавлено соответствующее количество заменителей TEMED. Если необходимо еще больше ускорить скорость геля, можно добавить соответствующее количество TEMED по мере необходимости перед дозированием.

6. Существует значительная положительная корреляция между затвердеванием геля и температурой. При одинаковых условиях, чем выше температура, тем выше скорость затвердевания.

7.Концентрированный цветной гель может давать небольшое количество осадка во время хранения, что является нормальным явлением. Пожалуйста, не стесняйтесь использовать его.

8. АПС хранился при температуре -20℃. Для удобства открытый и используемый APS можно сохранить в 4℃.

9. Пожалуйста, надевайте необходимые СИЗ, такие как лабораторный халат и перчатки, для обеспечения вашего здоровья и безопасности.！

10. Только для исследовательских целей!

Таблица 1 Диапазон референсного разделения геля SDS-PAGE с различной концентрацией

Документы:

Паспорт безопасности

20324-A-MSDS-CN20250110

20324-B-MSDS-CN20250110

20324-С-MSDS-CN20250110

20324-Д-MSDS-CN20250110

Руководства

20324_Руководство_HB230113_RU

Цитаты и ссылки:

[1] Чэнь Х, Чжан Д, Су Н и др. Визуализация динамики РНК в живых клетках с помощью ярких и стабильных флуоресцентных РНК. Nat Biotechnol. 2019;37(11):1287-1293. doi:10.1038/s41587-019-0249-1(ЕСЛИ:31.864)