Набор Enhanced ECL Chemiluminescent Substrate Kit предназначен для обнаружения антител и связанных антигенов, напрямую или косвенно меченых пероксидазой хрена (HRP). Принцип набора Enhanced ECL Chemiluminescent Substrate Kit заключается в том, что белки или нуклеиновые кислоты переносятся на импринтированную мембрану после электрофореза, а целевые белки на мембране связываются первичными антителами и вторичными антителами, мечеными HRP, или нуклеиновые кислоты на мембране связываются напрямую или косвенно зондами, мечеными HRP. После промывки мембраны рабочий раствор ECL, приготовленный продуктом, используется для инкубации мембраны при комнатной температуре в течение нескольких минут. Импринтированная мембрана оборачивается пластиковой пленкой и фиксируется на кассете рентгеновской экспозиции. Затем рентгеновская пленка прижимается к мембране в темной комнате и экспонируется в течение нескольких секунд или нескольких часов. После проявления и фиксации полосы белка или нуклеиновой кислоты могут быть четко отображены на рентгеновской пленке.

Этот набор имеет уникальную систему люминесцентного субстрата, снижающую фон экспозиции, в то время как введение нового окислителя значительно повышает стабильность набора, позволяя ему оставаться стабильным при комнатной температуре до одного года. В дополнение к рентгеновскому излучению, флуоресцентное сканирование CCD также может быть напрямую использовано в основном для обнаружения WB и хемилюминесцентной системы иммунного обнаружения.

Функции

Высокая чувствительность и высокое отношение сигнал/шум позволяют обнаруживать антигены средней чувствительности.

Светятся быстро и ярко, отпечатанную полосу пленки можно наблюдать под люминесцентной лампой.

Особенно подходит для обнаружения более высокой целевой распространенности обычных образцов белка.

Новый окислитель, стабильный при комнатной температуре до одного года.

Приложения

Хемилюминесцентный ИФА

Вестерн-блот

Дот-блот-ДНК/РНК

Саузерн-блот-ДНК

Норзерн-блот-РНК

Технические характеристики

Компоненты

Доставка и хранение

Продукт поставляется при комнатной температуре и может храниться при комнатной температуре в течение одного года. Если продукт не используется в течение длительного времени, рекомендуется хранить при температуре 2℃~8℃ продлить срок действия.

Примечания: 36222-A следует хранить в защищенном от света месте!

Инструкции (например, рентгеновская пленка)

1. Обычный электрофорез, мембранный перенос, антитело, меченное HRP, или зонд нуклеиновой кислоты, меченный HRP, инкубация и промывание мембраны.

Примечания: Люминесцентный раствор ECL является цветным субстратом HRP, поэтому система обнаружения должна быть основана на антителе, меченом ферментом HRP, или зонде нуклеиновой кислоты.

2. Во время последней промывки мембраны готовят свежий рабочий люминесцентный раствор (100-200 мкл рабочего люминесцентного раствора/см2 мембраны): берут одинаковый объем реагента А и реагента В, тщательно перемешивают для последующего использования.

Примечания: Возьмите Реагент А и Реагент В, используйте разные наконечники. Рекомендуется использовать рабочую жидкость немедленно. Ее все еще можно использовать через несколько часов при комнатной температуре, но чувствительность немного снижается.

3.Используйте плоский пинцет, чтобы вынуть мембрану, положите ее на фильтровальную бумагу, чтобы слить лосьон, не допускайте полного высыхания мембраны. Полностью погрузите мембрану в люминесцентный рабочий раствор, достаточный контакт с люминесцентной рабочей жидкостью. Инкубируйте при комнатной температуре в течение 1-2 минут и немедленно подготовьте для экспозиции планшета.

4. Поднимите мембрану пинцетом и положите ее на фильтровальную бумагу, чтобы слить рабочую люминесцентную жидкость. Но не смывайте люминесцентную жидкость.

5. Положите кусок пластиковой пленки большего размера, чем мембрана, на внутреннюю поверхность рентгеновской пленки-обскуры. Прикрепите отпечатанную мембрану к пластиковой пленке, полностью сложите пластиковую пленку вокруг отпечатанной мембраны, удалите пузырь газа и сложите, можно отрезать край лишней пластиковой пленки. Используйте фильтровальную бумагу, чтобы всосать избыток светящейся рабочей жидкости. Закрепите пластиковую пленку, покрывающую отпечатанную мембрану в обскуре, клейкой лентой, белковой полосой вверх.

6. Кусок рентгеновской пленки был взят из темной комнаты и помещен на обернутую мембрану. Пленка была прижата и экспонирована в течение 30 секунд - 2 минут. Затем пленка была проявлена ​​и зафиксирована.

Примечания: Время воздействия следует корректировать в соответствии с интенсивностью воздействия.Если фон слишком высокий, используйте две рентгеновские пленки одновременно.

Другие методы воздействия

Если используется фотография ПЗС: мембрану можно поместить в рабочую жидкость, после загрузки согласно инструкции по использованию, снять пленку, сделать фотографии. Кроме того, параметры измерения машины можно отрегулировать в соответствии с ситуацией, чтобы улучшить соотношение сигнал/шум.

Примечания

1. Следует избегать образования пузырьков при переносе мембраны, герметизации и инкубации. Кроме того, ношение перчаток позволит избежать отпечатков пальцев на мембране и сохранить ее чистой.

2. Длительная экспозиция или избыточное количество белка углубляют фон и делают изменение интенсивности полос нелинейным. Недодержка размывает полосы.

3. Некоторые виды пластиковой пленки могут гасить флуоресценцию при обертывании импринтированной мембраны. Следует выбирать высококачественную пластиковую пленку.

4. Избегайте размещения нескольких мембран в одном промывочном боксе, так как взаимная адсорбция или трение могут привести к возникновению глубокого фона.

5. Положение и размер полос на пленке можно точно определить с помощью видимых предварительно окрашенных белковых маркеров и экспозиционных меток флуоресцентной авторадиографии.

6. Используйте систему биотин-авидин и избегайте использования молочного затвора, который может привести к слишком высокому фону.

7. Частицы оксида металла могут вызвать появление зернистых пятен на мембране. Избегайте использования ржавых ножниц и пинцетов. Используйте пластиковые плоские пинцеты.

8. Азид натрия (NaN3) может ингибировать активность HRP, если при восстановлении зонда или антитела, меченого HRP, следует избегать использования NaN3, при необходимости не более 0,01%.

9. Данный продукт не обладает особой токсичностью в соответствии с общепринятой химической обработкой.

10. Пожалуйста, надевайте необходимые СИЗ, такие как лабораторный халат и перчатки, для обеспечения вашего здоровья и безопасности.！

11. Только для исследовательских целей!

Документы:

Паспорт безопасности

36222-A-MSDS-CN20250110

36222-B-MSDS-CN20250110

Руководства

36222_Руководство_HB221212_RU

Цитаты и ссылки:

[1] He X, Li J, Zhou G и др. Управление ритмами гиппокампа и памятью с помощью синаптической пластичности в тормозных интернейронах. Neuron. 2021;109(6):1013-1028.e9. doi:10.1016/j.neuron.2021.01.014(IF:17.173)

[2] Ван С, Чжан С, Цзинь Д и др. Агонист μ-опиоидных рецепторов способствует образованию циркулирующих опухолевых клеток при раке мочевого пузыря через путь MOR/AKT/Slug: комплексное исследование, включающее рандомизированное контролируемое исследование.Cancer Commun (Лондон). 2023;43(3):365-386. doi:10.1002/cac2.12408(IF:16.2)

[3] Li Y, Zhou S, Song H, Yu T, Zheng X, Chu Q. Наночастицы CaCO3, объединенные с KAE, для обеспечения усиленной терапии рака при перегрузке кальцием. Биоматериалы. 2021;277:121080. doi:10.1016/j.biomaterials.2021.121080(IF:12.479)

[4] Xu Z, Xu J, Sun S и др. Мехелиолид вызывает иммуногенную гибель клеток, опосредованную ROS, при гепатоцеллюлярной карциноме. Redox Biol. 2022;54:102351. doi:10.1016/j.redox.2022.102351(IF:11.799)

[5] Cai Z, Zhang Y, Zhang W и др. Задержка мышьяка в эритроцитах и ​​чрезмерный эритрофагоцитоз связаны с низким статусом селена из-за нарушения окислительно-восстановительного гомеостаза. Redox Biol. 2022;52:102321. doi:10.1016/j.redox.2022.102321(IF:11.799)

[6] Каушик AC, Ву Q, Лин L и др. Профилирование экзосомальных нкРНК микобактериальной инфекции идентифицировало miRNA-185-5p как новый биомаркер туберкулеза. Краткий Bioinform. 2021;22(6):bbab210. doi:10.1093/bib/bbab210(IF:11.622)

[7] Ху П., Ли Х., Сан В. и др. Лизосомальное расстройство, связанное с холестерином, вызывает гибель клеток гематологических злокачественных новообразований: динамический анализ цитотоксических эффектов LW-218. Acta Pharm Sin B. 2021;11(10):3178-3192. doi:10.1016/j.apsb.2021.02.004(IF:11.614)

[8] Ван X, Ни Дж, Ю И и др. Опосредованное SNX10 восприятие ЛПС вызывает дисфункцию кишечного барьера через каскад сигналов, зависимый от каспазы-5. EMBO J. 2021;40(24):e108080. doi:10.15252/embj.2021108080(IF:11.598)

[9] Jiang K, Chen H, Fang Y и др. Экзосомальный ANGPTL1 ослабляет метастазы колоректального рака в печени, регулируя паттерн секреции клеток Купфера и препятствуя проницаемости сосудов, вызванной MMP9. J Exp Clin Cancer Res. 2021;40(1):21. Опубликовано 7 января 2021 г. doi:10.1186/s13046-020-01816-3(IF:11.161)

[10] Zhang S, Yang Z, Bao W и др. SNX10 (сортирующий нексин 10) ингибирует возникновение и прогрессирование колоректального рака, контролируя аутофагическую деградацию SRC. Аутофагия. 2020;16(4):735-749. doi:10.1080/15548627.2019.1632122(IF:11.059)

[11] Лю Л., Лян Л., Ян Ч., Чжоу И., Чэнь И. Внеклеточные везикулы Fusobacterium nucleatum нарушают кишечный барьер, воздействуя на опосредованный RIPK1 путь клеточной смерти. Микробы кишечника. 2021;13(1):1-20. doi:10.1080/19490976.2021.1902718(IF:10.245)