Двухцепочечная РНК (dsRNA) возникает как побочный продукт во время транскрипции мРНК in vitro. Этот побочный продукт обладает иммуногенными свойствами в организме человека, способными вызывать иммунный ответ, в результате чего снижается уровень мРНК. Это делает dsRNA проблемной примесью процесса, требующей тщательного устранения и строгого контроля ее остаточного присутствия.

Для решения этой проблемы в наборе для определения двухцепочечной РНК (дцРНК) методом ИФА используются экспериментальные принципы иммуноферментного анализа (ИФА) с двойным сэндвичем с антителами для количественной оценки остаточной дцРНК. Набор можно использовать не только для обнаружения обычных дцРНК, но и для обнаружения пеудо-УТФ, N1-Me-пеудо-УТФ. и модифицированные 5-OMe-UTP дцРНК.

Процедура включает добавление как стандарта, так и тестового образца на ферментную пластину (обозначенную как 36717-A), предварительно покрытую антителами к анти-dsRNA. Затем добавляются биотин-меченые антитела для обнаружения dsRNA (36717-F) в разбавленной форме. Наконец, вводится стрептавидин-HRP (SA-HRP) (36717-G) для создания комплекса, включающего антитела, антигены, биотин и SA-HRP.

После промывки планшета добавление хромогенного раствора TMB (36717-K) инициирует развитие цвета. Под влиянием катализа фермента HRP TMB претерпевает трансформацию из бесцветного в синий, которая затем останавливается путем применения стоп-раствора (36717-L). В конечном итоге эта трансформация приводит к желтому оттенку, интенсивность которого положительно коррелирует с количеством dsRNA, идентифицированным в образце.

Этот комплект выполняет универсальную функцию, позволяя оптимизировать процесс очистки биологического продукта, контролировать примеси на промежуточных этапах и проводить испытания перед выпуском для оценки конечного продукта.

Ппродукт Валидация Отчет

Компоненты

Доставка и хранение

Комплект поставляется с пакетом льда и может храниться при температуре от 2°C до 8°C. Нераспечатанный продукт действителен в течение одного года. После вскрытия реагента он действителен в течение полугода. Никогда не замораживайте этот продукт.

Инструкции

1. Подготовка к эксперименту

1) Экспериментальные материалы, которые не входят в комплект, но необходимы для проведения эксперимента:

а. Наконечники без РНКазы;

б) Центрифужная пробирка без РНКазы;

в) Бумага без пыли;

г. Планшет для предварительной обработки образцов без РНКазы;

е. Деионизированная вода или дважды дистиллированная вода.

2) Необходимые, но не предоставленные инструменты и оборудование:

а. Многофункциональный ридер для микропланшетов (включая режим детектирования с двумя длинами волн, охватывающий 450 нм и 650 нм; способный использовать 450 нм в качестве длины волны детектирования и 650 нм в качестве опорной длины волны);

б) Полностью автоматическая мойка пластин, вихревой смеситель, смеситель постоянной температуры, центрифуга;

в) прецизионные микропипетки и многоканальные микропипетки различных спецификаций;

г. Таймер, холодильник 4℃;

е. Микропланшетный шейкер.

2. Анализ результатов

а) Если значение ОП образца, подлежащего тестированию, превышает значение ОП в самой высокой точке стандартной кривой, образец необходимо разбавить и провести повторное измерение.

б. Процедура разработки кривой: Создайте стандартную кривую, отложив стандартные концентрации на оси x и соответствующие калиброванные стандартные значения поглощения на оси y. Различные графические и статистические программные инструменты могут помочь в создании стандартных кривых и определении неизвестных концентраций образцов. Для этого эксперимента рекомендуется использовать четырехпараметрический или пятипараметрический метод подгонки.В конечном итоге рассчитайте остаточное количество дцРНК в образце, используя стандартную кривую и учитывая коэффициент разбавления образца.

c. Приведенная стандартная кривая является иллюстративным примером (только для справочных целей). Фактическое содержание образца должно быть определено с использованием стандартной кривой, специально созданной для того же экспериментального стандарта.

3. Схема эксперимента

Рисунок 5. Схема эксперимента

4. Эксплуатационные характеристики продукта

Производительность этого комплекта была полностью оценена. Для получения подробной информации свяжитесь с техническим персоналом, чтобы получить соответствующий отчет о проверке производительности.

5. Примечания

1. Перед использованием набора внимательно прочтите данную инструкцию.
2. Пожалуйста, используйте данный продукт в течение срока годности, запрещается смешивать родственные реагенты из разных партий.
3. Перед использованием все реагенты необходимо довести до комнатной температуры.
4. Для вашей безопасности и здоровья, пожалуйста, наденьте лабораторный халат и одноразовые перчатки.
5. Данный продукт предназначен только для научных исследований.
   
   

   Документы:

   Паспорт безопасности

   Руководство