Описание
Набор для обнаружения Mycoplasma qPCR Detection Kit MycAway™ — это продукт, разработанный для качественного обнаружения заражения микоплазмой в различных источниках, включая сырье, банки клеток, вирусные семена, вирусные или клеточные растворы для сбора и клетки, используемые в клиническом лечении, и т. д. В этом наборе используются флуоресцентные зонды Taqman (FAM и VIC) и применяются методы множественной полимеразной цепной реакции (ПЦР) для отдельного обнаружения мишени и внутреннего контроля. Он был проверен на специфичность, предел обнаружения и надежность в соответствии со стандартами EP <2.6.7>, продемонстрировав высокую чувствительность, специфичность, эффективность и безопасность. Предел обнаружения равен или ниже 10 КОЕ/мл.
Для извлечения нуклеиновых кислот этот продукт можно использовать в сочетании с набором MolPure® Magnetic Residual DNA Sample Preparation Kit (Cat#18461), который использует ручные методы извлечения. В качестве альтернативы нуклеиновые кислоты из образцов можно автоматически извлекать с помощью автоматического экстрактора нуклеиновых кислот AutoPure 32A (Cat#80501) и набора MolPure® Mag32 Residual DNA Sample Preparation Kit FA (Cat#18462). Важно отметить, что наборы, содержащие Cat#18461 и Cat#40619, прошли комплексную проверку; для получения подробной информации о проверке обратитесь в нашу техническую поддержку. После предварительной обработки образцов для удаления мешающих примесей и получения очищенных нуклеиновых кислот проводится реакция qPCR с использованием усилителя Real-Time PCR, а сигнал флуоресценции от зонда собирается и анализируется.
| Кат.№ | 40619ES25 / 40619ES60 |
| Размер | 25 Т/100 Т |
| Обнаружение Предел | 10 КОЕ/мл |
| Обнаружить метод | кПЦР метод (Такман) флуоресцентный) |
| Продолжительность | 4 часы |
| Флуоресцентный зонд | ФАМ (Цель канал)；ВИК (Внутренний канал) |
| Покрытый микоплазма | ≥ 100 |
| Проверка | Проверено согласно к ЭП <2.6.7> |
Компоненты
| Номер компонента | Имя | 40619ES25 | 40619ES60 |
| 40619-А | 4×Реакционный буфер MyqPCR | 250 мкл | 1 мл |
| 40619-Б | Мой праймер и зонд СМЕШИВАНИЕ | 25 мкл | 100 мкл |
| 40619-С* | Внутренний контроль (ВК) | 25 мкл | 100 мкл |
| 40619-Д** | Положительный контроль (ПК) | 500 мкл | 2 мл |
| 40619-Е*** | Разбавление ДНК буфер | 1 мл | 4×1 мл |
| 40619-Ф**** | Сверхчистая вода | 500 мкл | 2×1 мл |
*ИС: Внутренний контроль;
**PCS: Положительный контроль решение ， концентрация является 1000 копий/мкл.
***ДНК Разбавление буфер: используется для IC разбавление и шаблон из НТК и НКС.
****Сверхчистый вода: использованная для подготовка из кПЦР Смешивание.
Хранилище
Данный продукт следует хранить при температуре от -25 до -15℃ в течение 2 лет.
*После получения комплекта проверьте комплектность всех компонентов и немедленно поместите его на хранение при температуре от -25 до -15℃. состояние если нет выполните анализ немедленно. Обратите внимание 40619-B следует хранить в защищенном от света месте.
Инструкции
- Подготовка к эксперименту
1) Подготовьте необходимые реагенты и материалы, которые будут использоваться в эксперименте.
2) Подтвердите пригодность инструмент ПЦР
Этот комплект можно использовать с приборами для количественной ПЦР, указанными ниже:
- Био-Рад: CFX96
- Thermo Scientific: система ПЦР в реальном времени 7500; QuantStudio™5;
- Метод эксперимента
1) Извлечение ДНК
Мы рекомендуем использовать ' Набор для подготовки образцов остаточной магнитной ДНК (Кат. № 18461ES для ручное извлечение и Кат.№18462ES для автоматическое извлечение) для Извлечение ДНК, ты может посещать ' http:/www.yeasenbiotech.com ' для
подробная информация и покупка.
Набор (Cat#40619ES) содержит внутренний контроль (IC). Если добавить IC к образцам до выделения ДНК, он может проверить весь процесс (включая выделение ДНК и реакцию qPCR). Если добавить IC к мастер-миксу qPCR
напрямую, ИК будет действовать только как контроль ПЦР.
2) Подготовка смеси для ПЦР
- В зависимости от количества образца, включающего положительный контроль (PCS), контроль без шаблона (NTC), отрицательный Контрольный раствор (NCS) и тестовый образец (TS) для расчета количества реакций. Подготовьте 2 реакции параллельно для
каждый образец в целом.
* ПКС: Положительный контроль решение；NTC：Нет шаблон контроль；NCS：Отрицательный контроль решение；TS：Тест образец. Там является нет нуждаться к выполнять
образец извлечение для ПКС и НТК, но НКС и ТС являются нужный.
Реакционные лунки (M1)=(1×NCS + Н×ТС) ×2
Реакционные лунки (M2)=(1×PCS + 1×NTC) ×2
Реакционные лунки (M3)=(1×PCS + 1×NTC+ N×TS) ×2
- Предварительно разморозьте необходимое количество реагентов на льду в соответствии с планом эксперимента и таблицами ниже.
- Рассчитайте количество смеси для ПЦР в соответствии с числом реакций. Обратите внимание, если набор будет использоваться для мероприятий GMP, таких как выпуск продукции, мы рекомендуем использовать Таблицу 1 и 2 для подготовки; Если комплект будет только используется для исследования и нет необходимости добавлять ИК перед экстракцией после оценки, затем следуйте Таблице 3 для
подготовка. Обратите внимание, что не все M1, M2 и M3 являются нужно было быть подготовить.
| Компонент | Объем (1×40 мкл Реакции) | Объем (м1×40 мкл) |
| 4× Буфер реакции MyqPCR | 10 мкл | (М1+2) ×10 мкл |
| Мой праймер и зонд СМЕШИВАНИЕ | 1 мкл | (М1+2) ×1 мкл |
| РОКС | 0,8 мкл /0 мкл** | (М1+2) ×0,8 мкл /0 мкл |
| Очищенная вода | До 20 мкл | До (М1+2) ×20 мкл |
| Общий | 20 мкл | (М1+2) ×20 мкл |
Таблица 1 Система qPCR Mix для M1
* конфигурация система в Стол 1 есть основанный на на предпосылка что IC является добавлен до извлечение для оба НКС и ТС, так что это является нет необходимый
к добавлять IC когда кПЦР Смешивание подготовка. МК добавление метод до извлечение: Во-первых, разбавьте IC к 20 раз с ДНК разбавитель и добавлять 1мкл
разбавленный IC в каждый 100мкл тест образец для дальше извлечение.
**Этот набор делает нет содержать РОКС Ссылка Краситель. Если РОКС ссылка краситель является нужный для Настоящий Время ПЦР усилители что ты являются в настоящее время с использованием, 50×РОКС Ссылка Краситель (Кат. № 10200ES) рекомендуется для использовать. В этот случай, добавлен объем является 0,8 мкл, как показано в Стол 1. Если с использованием другой
бренды из РОКС продукты, пожалуйста ссылаться к их инструкции для РОКС добавление.Если нет РОКС ссылка краситель является требуется, добавлен объем является 0 мкл.
| Компонент | Объем (1×40 мкл Реакции) | Объем (м2×40 мкл) |
| 4× Буфер реакции MyqPCR | 10 мкл | (М2+2) ×10 мкл |
| Мой праймер и зонд СМЕШИВАНИЕ | 1 мкл | (М2+2) ×1 мкл |
| Внутренний контроль (ВК) | 1 мкл* | (М2+2) ×1 мкл /0 мкл |
| РОКС | 0,8 мкл /0 мкл** | (М2+2) ×0,8 мкл /0 мкл |
| Очищенный вода | До 20 мкл | До (М2+2) ×20 мкл |
| Общий | 20 мкл | (М2+2) ×20 мкл |
Таблица 2 Система qPCR Mix для M2
* конфигурация система в Стол 2 является основанный на на предпосылка что IC является нет добавлен в ПКС и НТК до извлечение, так IC потребности к быть добавлен в течение кПЦР Смешивание подготовка. МК добавление метод после извлечение: Разбавленный IC к 100 раз с ДНК разбавитель и добавлять 1мкл разбавленный IC в
каждый кПЦР Смешивание система.
**Этот набор делает нет содержать РОКС Ссылка Краситель. Если РОКС ссылка краситель является нужный для Настоящий Время ПЦР усилители что ты являются в настоящее время с использованием, 50×РОКС Ссылка Краситель (Кат. № 10200ES) рекомендуется для использовать. В этот случай, добавлен объем является 0,8 мкл, как показано в Стол 1. Если с использованием другой
бренды из РОКС продукты, пожалуйста ссылаться к их инструкции для РОКС дополнение. Если нет РОКС ссылка краситель является требуется, добавлен объем является 0 мкл.
| Компонент | Объем (1×40 мкл Реакции) | Объем (м3×40 мкл) |
| 4× Буфер реакции MyqPCR | 10 мкл | (М3+2) ×10 мкл |
| Мой праймер и зонд СМЕШИВАНИЕ | 1 мкл | (М3+2) ×1 мкл |
| Внутренний контроль (ВК) | 1 мкл* | (М3+2) ×1 мкл /0 мкл |
| РОКС | 0,8 мкл /0 мкл** | (М3+2) ×0,8 мкл /0 мкл |
| Очищенный вода | До 20 мкл | До (М3+2) ×20 мкл |
| Общий | 20 мкл | (М3+2) ×20 мкл |
Таблица 3 Система qPCR Mix для M3
* конфигурация система в Стол 3 это основанный на на предпосылка что IC является нет добавлен к образцы до извлечение, поэтому IC потребности к быть добавлен в течение кПЦР Смешивание подготовка. МК добавление метод после извлечение: Разбавленный IC к 100 раз с ДНК разбавитель и добавлять 1мкл в каждый кПЦР Смешивание
система.
**Этот набор делает нет содержать РОКС Ссылка Краситель. Если РОКС ссылка краситель является нужный для Настоящий Время ПЦР усилители что ты являются в настоящее время с использованием, 50×РОКС Ссылка Краситель (Кат. № 10200ES) рекомендуется для использовать. В этот случай, добавлен объем является 0,8 мкл, как показано в Стол 1. Если с использованием другой
бренды из РОКС продукты, пожалуйста ссылаться к их инструкции для РОКС дополнение. Если нет РОКС ссылка краситель является требуется, добавлен объем является 0 мкл.
3) Добавление шаблонов
- Смешайте смесь для ПЦР, тщательно встряхивая, центрифугируйте на низкой скорости и соберите остаточную жидкость из колпачка.
в конец трубка.
- Добавить 20 мкл смеси qPCR в каждую реакционную пробирку/лунку. Обратите внимание, что в каждую пробирку/лунку добавляется соответствующая смесь qPCR.
пробирки и избегайте дополнительных ошибок.
- Добавьте шаблоны в пробирку/лунки, содержащие qPCR Mix. См. Таблицу 4 для добавления шаблонов.
| Тестовые образцы | В каждой трубке или хорошо … |
| ТС | 20 мкл смеси для ПЦР+20 Образцы мкл после экстракции |
| НТК | 20 мкл смеси для ПЦР+20 мкл ДНК Разбавление буфер |
| НКС* | 20 мкл смеси для ПЦР+20 мкл Отрицательный образец после экстракции* |
| ПКС | 20 мкл смеси для ПЦР +20 мкл Положительный контроль |
Стол 4 Шаблона добавление
*Мы рекомендуем использовать буфер для разбавления ДНК (40619-E) в качестве шаблона NCS для выделения ДНК.
** общий реакция объем в каждый трубка/скважина является 40 мкл.
***Крышка трубка крышка или тарелка фильм. Чтобы избегать влияющий флуоресценция сигнал прочтите, пожалуйста брать заботиться нет к отметка трубка крышка или фильм
или даже руб фильм неоднократно с а скребок.
****Центрифуга реакция трубка или тарелка кратко в низкий скорость после шаблоны добавление. После достаточный тряска и смешивание, повторить центрифуга
в низкий скорость к собирать жидкость от крышка или стена к дно. Избегайте пузыри когда Операция. базовый уровень воля быть затронутый если смешивание
является нет смешанный ну, так что этот шаг является очень важный к а хороший эксперимент результат.
4) Настройка программ ПЦР
- Настройки файла программы
Пример (прибор 7500 Real-Time PCR System и программное обеспечение Real-Time PCR v2.4):
Тип прибора: 7500 (96 лунок)
Тип эксперимента: Количественная оценка – Стандартная кривая.
Химия: реагенты Taqman®
Скорость подъема: стандартная (~2 часа для завершения заезда)
- Настройки целевого канала
В "Определять Цели и Образцы" из "Тарелка Настраивать", создавать а Цель 1 канал (ФАМ), выбирать ФАМ как отчетность группа флуоресценции и МГБ или никто как закалка флуоресценция группа. Создавать а Цель 2 канал (Виктория), выбирать отчетность флуоресценция группа как ВИК и закалка флуоресценция группа как никто. В "Назначать Цели и Образцы" из "Тарелка Настраивать", если нет дополнительный РОКС краситель является добавлено, выбрать "никто"; Если дополнительный РОКС является добавлено, выбрать
РОКС.
- Стандартные настройки программы усиления
| Серийный номер | Стадия реакции | Температура | Время | Цикл(ы) |
| 1 | Начальная денатурация | 95℃ | 5 мин | 1 |
| 2 | Денатурация | 95℃ | 15 сек |
45 |
| 3 | Отжиг/Расширение (сбор сигнала флуоресценции) |
62℃ |
30 сек. |
Таблица 5 Стандартные настройки программы усиления
- Настройка базового уровня и порогового значения:
Принцип из базовый уровень корректирование: использовать автоматический базовый уровень в целом. Если нуждаться к регулировать в руководство, выбирать цикл до экспоненциального роста период как начальный цикл, и избегать зоны колебаний исходный флуоресценция Коллекция. Выберите цикл, который находится на 1-2 цикла раньше Ct самого раннего образца экспоненциальной амплификации в качестве
конечная точка.
Принцип из порог настройка: используйте автоматический порог в целом. Если необходимо настроить вручную, порог должен быть набор выше чем Отрицательно образец или базовый уровень шум, его в целом набор порог в поздно
стадия для каждого туннеля требуется экспоненциальное усиление, относительно независимый и подходящий порог.
5) Результат Анализ
- Результаты судейства для PCS, NTC и NCS:
Если добавлен ИК: спецификация каждого контрольного образца должна быть удовлетворены в Таблице 6:
| Контрольный образец | ФАМ Сигнал | Сигнал ВИК |
| ПКС | Кт < 40, и имеет очевидную кривую амплификации | Кт < 40 и имеет очевидную кривую амплификации |
| НТК | Кт ≥ 40 или отсутствие очевидной кривой амплификации | Кт < 40 и имеет очевидную кривую амплификации |
| НКС | Кт ≥ 40 или отсутствие очевидной кривой амплификации | Кт < 40 и имеет очевидную кривую амплификации |
Стол 6 Результат суждение из ПКС, НТК и НКС
Если IC не добавлен: каждый образец контроля качества должен соответствовать спецификации столбца сигнала FAM в Таблице 6, и нет
нужно проанализировать Канал ВИК.
- Результат решения для TS
Предварительное условие: Это является необходимо определить, является ли ПКС, НТК и НКС прошел спецификацию в таблице 6 до ТС анализ результатов. Если пройдет, то может перейти к следующий шаг. Если не прошедший, ТС результаты может нет быть надежный, и
необходимо выяснить причину.
Если добавлен IC: найдите соответствующие результаты суждение в соответствии с результатами информации FAM и ВИК в таблице 7:
| ФАМ Сигнал | Сигнал ВИК | Результат суждение |
| Ct<40 и имеет очевидные кривая амплификации | Ct<40 и имеет очевидную кривую амплификации | Положительный |
| Ct≥40 или отсутствие очевидной кривой амплификации | Существует торможение, эксперимент необходимо повторить | |
| Ct≥40 или нет очевидных кривая амплификации | Ct<40 и имеет очевидную кривую амплификации | Отрицательно |
| Ct≥40 или отсутствие очевидной кривой амплификации | Существует торможение, эксперимент необходимо повторить |
Стол 7: Результат суждение из ТС (IC добавлен)
*Если там является торможение для ВИК сигнал,лечение является нужный к устранять ингибиторы или повторить тест.
Если IC не добавлен: найдите соответствующие результаты суждение согласно информация о результатах FAM в таблице 8 , и нет необходимости анализировать Сигнал VIC.
| FAM-сигнал | Результат суждение |
| Ct<40 и имеет очевидную кривую амплификации | Положительный |
| Ct≥40 или отсутствие очевидной кривой амплификации | Отрицательно |
Стол 8: Результат суждение из ТС (IC нет добавлен)
Примечания
- Пожалуйста, внимательно прочтите это руководство перед использованием этого набора. Эксперимент должен проводиться стандартизированным образом, включая обработку образцов, подготовку реакционной системы и добавление образцов.
- По возможности операции по добавлению образцов и приготовлению реагентов следует проводить на льду.
- Перед использованием тщательно перемешайте каждый реагент.
- Пожалуйста, работайте в лабораторных халатах и одноразовых перчатках. Ваша безопасность.
- Данный продукт предназначен только для исследовательских целей.
[1] Чжао Ф., Ван X, Ли Ю, Чэнь X, Гэн Z, Чжан С.Влияние диетического дополнения галлатом эпигаллокатехина на качество мяса и антиоксидантную способность мышц бройлеров, подвергнутых острому тепловому стрессу. Животные (Базель). 2021;11(11):3296. Опубликовано 18 ноября 2021 г. doi:10.3390/ani11113296(IF:2.752)
Оплата и безопасность
Ваша платежная информация обрабатывается надежно. Мы не храним данные кредитной карты и не имеем доступа к информации вашей кредитной карты.
Расследование
Вам также может понравиться
Часто задаваемые вопросы
Продукт предназначен только для исследовательских целей и не предназначен для терапевтического или диагностического использования на людях или животных. Продукты и содержимое защищены патентами, товарными знаками и авторскими правами, принадлежащими Yeasen Biotechnology. Символы товарных знаков указывают на страну происхождения, а не обязательно на регистрацию во всех регионах.
Для некоторых приложений могут потребоваться дополнительные права интеллектуальной собственности третьих лиц.
Йесен привержен этической науке, полагая, что наши исследования должны затрагивать важнейшие вопросы, обеспечивая при этом безопасность и соблюдение этических стандартов.