Hieff Trans™ Реагент для липосомальной трансфекции Часто задаваемые вопросы

(1) В: Может ли присутствовать сыворотка при приготовлении комплекса реагентов для трансфекции нуклеиновых кислот?

A: Наличие сыворотки повлияет на формирование липосом. Рекомендуется использовать среду без сыворотки (обычно среду MEM) при приготовлении комплексов реагентов для трансфекции нуклеиновых кислот.

(2) В: Можно ли замораживать реагент для трансфекции?

A: Нет. Этот реагент необходимо хранить при температуре 2–8 ℃, и следует соблюдать осторожность, чтобы не открывать крышку повторно в течение длительного времени, поскольку длительное открытие крышки вызовет окисление липосом и повлияет на эффективность трансфекции.

(3) В: На что следует обратить внимание при использовании реагента для трансфекции липосомальных нуклеиновых кислот Hieff Trans™?

A: 1) Во время операции трансфекции желательно, чтобы слияние клеток достигало 80% -95%, а удельная плотность посева определялась в зависимости от положения клеток;

2) Использование высокоочищенной ДНК помогает добиться более высокой эффективности трансфекции;

3) ДНК и реагенты для трансфекции необходимо разбавлять бессывороточной средой при приготовлении трансфекционных комплексов;

4) Антибиотики нельзя добавлять в среду во время трансфекции;

5) Концентрация ДНК и количество катионного липосомального реагента должны быть оптимизированы для первого использования, чтобы получить максимальную эффективность трансфекции. Соотношение ДНК к трансфекционному реагенту составляет обычно рекомендуется соотношение 1:2–1:3.

(4) В: Нужно ли прекращать трансфекцию после трансфекции?

A: Нет необходимости. Липосомальные комплексы стабильны в течение 6 часов. Если клеточная среда не была изменена перед трансфекцией, для обеспечения питательных веществ, необходимых для нормального роста клеток, необходимо сменить среду на новую через 4–6 часов. Однако, если среда была изменена перед трансфекцией, нет необходимости менять среду после липосомальной трансфекции.

(5) В: На что следует обратить внимание, если я хочу повысить эффективность трансфекции?

A: a: Плотность клеток на момент трансфекции составляет 90%-95%.

б: Во время трансфекции используйте среду MEM без сыворотки для разбавления нуклеиновых кислот и липосом.

в: Среду можно менять через 4–6 часов после трансфекции.

(6) В: Можно ли проводить котрансфекцию ДНК и siRNA? Каков эффект?

A: Котрансфекцию можно проводить, но рекомендуется проводить раздельную трансфекцию, а трансфекцию ДНК следует проводить через 6 часов после siRNA. Если они будут работать вместе, эффективность трансфекции siRNA будет хуже.

(7) В: Можно ли использовать реагент для трансфекции для упаковки лентивирусов?

A: Упаковка лентивирусов возможна, но эффективность упаковки лентивирусов не обязательно связана с эффективностью трансфекции, но также связана с выбором упаковочных плазмид и соотношением между плазмидами.

(8) В: Можно ли использовать реагент для трансфекции липосомальных нуклеиновых кислот Hieff Trans™ для трансфекции суспензионных клеток?

A: Реагент трансфекции нуклеиновых кислот липосом Hieff Trans™ может использоваться для трансфекции суспензионных клеток, подробности см. в Протоколе. Кроме того, мы также запустили реагент трансфекции специально для суспензионных клеток (кат. № 40805, Реагент трансфекции нуклеиновых кислот липосом для суспензионных клеток).

[1] Liu R, Yang J, Yao J, Zhao Z, He W, Su N, Zhang Z, Zhang C, Zhang Z, Cai H, Zhu L, Zhao Y, Quan S, Chen X, Yang Y. Оптогенетический контроль функции и метаболизма РНК с использованием сконструированных светопереключаемых РНК-связывающих белков. Nat Biotechnol. 2022 3 января. doi: 10.1038/s41587-021-01112-1. Epub перед печатью. PMID: 34980910. (IF:54.908)

[2] Zhou J, Chen P, Wang H, Liu H, Li Y, Zhang Y, Wu Y, Paek C, Sun Z, Lei J, Yin L. Варианты Cas12a, разработанные для снижения нецелевого эффекта по всему геному посредством строгого распознавания PAM. Mol Ther. 2022 5 января;30(1):244-255. doi: 10.1016/j.ymthe.2021.10.010. Epub 20 октября 2021 г. PMID: 34687846; PMCID: PMC8753454. (IF:11.454)

[3] Чэнь С., Цао Х., Чжан Дж., У В., Чжан Б., Чжао Ф.circVAMP3 управляет разделением фаз CAPRIN1 и ингибирует гепатоцеллюлярную карциному, подавляя трансляцию c-Myc. Adv Sci (Weinh). 2022 март;9(8):e2103817. doi: 10.1002/advs.202103817. Epub 2022 янв. 24. PMID: 35072355; PMCID: PMC8922094. (IF:16.808)

[4] Zhang Y, Yu X, Sun R, Min J, Tang X, Lin Z, Xie S, Li X, Lu S, Tian Z, Gu C, Teng L, Yang Y. Фактор сплайсинга аргинин/серин-богатый 8 способствует злокачественности множественной миеломы и поражению костей посредством альтернативного сплайсинга CACYBP и клеточной коммуникации на основе экзосом. Clin Transl Med. 2022 февраль;12(2):e684. doi: 10.1002/ctm2.684. PMID: 35184390. (IF:11.492)

[5] Тан X, Дэн З, Дин П, Цян В, Лу Ю, Гао С, Ху Ю, Ян Ю, Ду Дж, Гу С. Новый белок, кодируемый circHNRNPU, способствует прогрессированию множественной миеломы путем регулирования микроокружения костного мозга и альтернативного сплайсинга. J Exp Clin Cancer Res. 2022, 8 марта;41(1):85. дои: 10.1186/s13046-022-02276-7. PMID: 35260179. (ЕСЛИ: 11.161)

[6] Hua Z, Wei R, Guo M, Lin Z, Yu X, Li X, Gu C, Yang Y. YTHDF2 способствует пролиферации клеток множественной миеломы через ось STAT5A/MAP2K2/p-ERK. Онкоген. 2022 март;41(10):1482-1491. doi: 10.1038/s41388-022-02191-3. Epub 2022 янв. 24. PMID: 35075244. (IF:9.867)

[7] Liang Y, Lu Q, Li W, Zhang D, Zhang F, Zou Q, Chen L, Tong Y, Liu M, Wang S, Li W, Ren X, Xu P, Yang Z, Dong S, Zhang B, Huang Y, Li D, Wang H, Yu W. Реактивация супрессора опухоли при раке груди путем переключения энхансера через сеть NamiRNA. Nucleic Acids Res. 2021 7 сентября;49(15):8556-8572. doi: 10.1093/nar/gkab626. PMID: 34329471; PMCID: PMC8421228. (IF:16.9)

[8] Dai L, Dai Y, Han J, Huang Y, Wang L, Huang J, Zhou Z. Структурное понимание рекрутирования комплекса BRCA1-BARD1 в поврежденный хроматин. Mol Cell. 2021 1 июля;81(13):2765-2777.e6. doi: 10.1016/j.molcel.2021.05.010. Epub 2021 7 июня. PMID: 34102105. (IF:17.97)

[9] Чжан К., Ван А., Чжун К., Ци С., Вэй Ч., Шу Х., Ту В.Й., Сюй В., Ся С., Сяо И., Чэнь А., Бай Л., Чжан Дж., Ло Б., Ван В., Шэнь Ч. Ось UBQLN2-HSP70 уменьшает агрегаты поли-Гли-Ала и устраняет поведенческие дефекты в модели животных C9ORF72. Нейрон. 16 июня 2021 г.;109(12):1949-1962.e6. doi: 10.1016/j.neuron.2021.04.023. Epub 14 мая 2021 г. PMID: 33991504. (IF:17.17)

[10] Liang Y, Lu Q, Li W, Zhang D, Zhang F, Zou Q, Chen L, Tong Y, Liu M, Wang S, Li W, Ren X, Xu P, Yang Z, Dong S, Zhang B, Huang Y, Li D, Wang H, Yu W. Реактивация супрессора опухоли при раке груди путем переключения энхансера через сеть NamiRNA. Nucleic Acids Res. 2021 7 сентября;49(15):8556-8572. doi: 10.1093/nar/gkab626. PMID: 34329471; PMCID: PMC8421228. (IF:16.9)

[11] Li T, Chen X, Qian Y, Shao J, Li X, Liu S, Zhu L, Zhao Y, Ye H, Yang Y. Синтетическое оптогенетическое устройство на основе BRET для пульсирующей экспрессии трансгена, обеспечивающее гомеостаз глюкозы у мышей. Nat Commun. 2021 27 января;12(1):615. doi: 10.1038/s41467-021-20913-1. PMID: 33504786; PMCID: PMC7840992. (IF:14.92)

[12] Pan Y, He X, Li C, Li Y, Li W, Zhang H, Wang Y, Zhou G, Yang J, Li J, Qu J, Wang H, Gao Z, Shen Y, Li T, Hu H, Ma H. Нейрональная активность задействует ось CRTC1/CREB для управления транскрипционно-зависимой аутофагией для поддержания поздней фазы LTD. Cell Rep. 2021 20 июля;36(3):109398. doi: 10.1016/j.celrep.2021.109398. PMID: 34289350. (IF:9.42)

[13] Лю Х., Син Р., Оу З., Чжао Дж., Хун Г., Чжао Т.Дж., Хань И., Чэнь И. Рецептор, связанный с G-белком, GPR17 ингибирует развитие глиомы, увеличивая продукцию ROS, опосредованную поликомбным репрессивным комплексом 1. Cell Death Dis. 2021 12 июня;12(6):610. doi: 10.1038/s41419-021-03897-0. PMID: 34120140; PMCID: PMC8197764. (IF:8.463)

[14] Фань Ю, Ван Дж, Цзинь В, Сунь Ю, Сюй Ю, Ван Ю, Лян Икс, Су Д.CircNR3C2 способствует подавлению опухолей, опосредованному HRD1, посредством губчатого воздействия на miR-513a-3p при тройном негативном раке молочной железы. Mol Cancer. 2021 2 февраля;20(1):25. doi: 10.1186/s12943-021-01321-x. PMID: 33530981; PMCID: PMC7851937. (IF:27.403)

[15] Gu C, Wang Y, Zhang L, Qiao L, Sun S, Shao M, Tang X, Ding P, Tang C, Cao Y, Zhou Y, Guo M, Wei R, Li N, Xiao Y, Duan J, Yang Y. AHSA1 является перспективной терапевтической мишенью для клеточной пролиферации и устойчивости к ингибиторам протеасом при множественной миеломе. J Exp Clin Cancer Res. 2022 6 января;41(1):11. doi: 10.1186/s13046-021-02220-1. PMID: 34991674; PMCID: PMC8734095. (IF:11.161)

[16] Luo Q, Wu X, Zhao P, Nan Y, Chang W, Zhu X, Su D, Liu Z. OTUD1 активирует апоптоз, независимый от каспазы и зависимый от каспазы, способствуя ядерной транслокации AIF и деградации MCL1. Adv Sci (Weinh). 8 февраля 2021 г.;8(8):2002874. doi: 10.1002/advs.202002874. PMID: 33898171; PMCID: PMC8061361. (IF:15.84)

[17] Luo Q, Wu X, Nan Y, Chang W, Zhao P, Zhang Y, Su D, Liu Z. TRIM32/USP11 уравновешивает стабильность ARID1A и онкогенный/опухолеподавляющий статус плоскоклеточной карциномы. Cell Rep. 2020 7 января;30(1):98-111.e5. doi: 10.1016/j.celrep.2019.12.017. PMID: 31914402. (IF:9.42)

[18] Сунь X, Пэн X, Цао Y, Чжоу Y, Сунь Y. ADNP способствует нейронной дифференцировке путем модуляции передачи сигналов Wnt/β-catenin. Нац Коммун. 12 июня 2020 г.; 11 (1): 2984. дои: 10.1038/s41467-020-16799-0. PMID: 32533114; PMCID: PMC7293280. (ЕСЛИ: 14.911)

[19] Yang X, Wang H, Xie E, Tang B, Mu Q, Song Z, Chen J, Wang F, Min J. Перестройка сигналов ERBB3 и ERK придает устойчивость к ингибированию FGFR1 при раке желудочно-кишечного тракта с мутацией ERBB3-E928G. Protein Cell. 2020 г., декабрь; 11(12): 915-920. doi: 10.1007/s13238-020-00749-z. PMID: 32632529; PMCID: PMC7719122. (IF: 14.872)

[20] Чен, Т., Чен, И., Чен, Х. и др. Двойной ферментный наномашинный аппарат для перемещения по несвязанной ДНК для внутриклеточной визуализации низкоэкспрессируемых микроРНК. Nano Res. 12, 1055–1060 (2019). https://doi.org/10.1007/s12274-019-2344-5 (IF:8.21)

[21] Чжан X, Ци Z, Инь H, Ян G. Взаимодействие между сигналами p53 и Ras контролирует устойчивость к цисплатину посредством регуляции апоптоза и аутофагии, опосредованной HDAC4 и HIF-1α. Theranostics. 30 января 2019 г.;9(4):1096-1114. doi: 10.7150/thno.29673. PMID: 30867818; PMCID: PMC6401400. (IF:8.12)

[22] Zou Y, Wang A, Shi M, Chen X, Liu R, Li T, Zhang C, Zhang Z, Zhu L, Ju Z, Loscalzo J, Yang Y, Zhao Y. Анализ окислительно-восстановительных ландшафтов и динамики в живых клетках и in vivo с использованием генетически кодируемых флуоресцентных сенсоров. Nat Protoc. 2018 Oct;13(10):2362-2386. doi: 10.1038/s41596-018-0042-5. PMID: 30258175; PMCID: PMC6714056. (IF:13.49)

[23] Zhang K, Zhao X, Chen X, Wei Y, Du W, Wang Y, Liu L, Zhao W, Han Z, Kong D, Zhao Q, Guo Z, Han Z, Liu N, Ma F, Li Z. Улучшенные терапевтические эффекты экзосом, полученных из мезенхимальных стволовых клеток, с инъекционным гидрогелем для лечения ишемии задних конечностей. ACS Appl Mater Interfaces. 12 сентября 2018 г.;10(36):30081-30091. doi: 10.1021/acsami.8b08449. Epub 29 августа 2018 г. PMID: 30118197. (IF:8.09)

[24] Хао Х., Ху С., Чэнь Х., Бу Д., Чжу Л., Сюй Ц., Чу Ф., Хуо Х., Тан И., Сан Х., Дин Б. С., Лю Д. П., Ху С., Ван М. Потеря эндотелиального CXCR7 нарушает сосудистый гомеостаз и ремоделирование сердца после инфаркта миокарда: последствия для открытия сердечно-сосудистых препаратов. Циркуляция. 28 марта 2017 г.;135(13):1253-1264. doi: 10.1161/CIRCULATIONAHA.116.023027. Epub 2 февраля 2017 г. PMID: 28154007. (IF:18.881)