Описание
Универсальный реагент для трансфекции Hieff Trans™ — многоцелевой, удобный и эффективный реагент для липосомальной трансфекции, разработанный на основе новейших нанотехнологий. Подходит для трансфекции ДНК, РНК и олигонуклеотидов, включая первичные клетки. Трудно трансфицируемые клетки, включая нейроны, обладают высокой эффективностью трансфекции. Его уникальная формула позволяет добавлять его непосредственно в среду, а присутствие сыворотки не влияет на эффективность трансфекции, что снижает повреждение клеток, вызванное удалением сыворотки. Нет необходимости удалять комплекс нуклеиновой кислоты и реагента для трансфекции или заменять его свежей средой после трансфекции, а свежую среду также можно заменить через 4-6 часов в зависимости от питательного статуса клеток.
Компоненты продукта
| Номер компонента | Компоненты | Номер кат./Размер | ||
| 40808ES02 | 40808ES03 | 40808ES03 | ||
| 40808-А | Универсал-А | 0,5 мл | 1 мл | 5×1 мл |
| 40808-Б | Универсал-Б | 0,5 мл | 1 мл | 5×1 мл |
Доставка и хранение
Продукт поставляется с пакетами со льдом и может храниться при температуре 2-8℃ в течение одного года. Не замораживать!
Предостережения
1) Во время операции трансфекции желательно, чтобы слияние клеток достигало 70–90 %, а удельная плотность посева определялась в зависимости от положения клеток.
2) Приготовление трансфекционных комплексов требует разбавления ДНК и трансфекционных реагентов в бессывороточной среде.
3) Антибиотики нельзя добавлять в среду во время трансфекции.
4) Использование высокоочищенной ДНК или РНК помогает добиться более высокой эффективности трансфекции, а эндотоксин в плазмидах является врагом трансфекции.
5) Хранить при температуре 2–8ºC, не открывать крышку слишком часто в течение длительного времени.
6) Концентрация нуклеиновой кислоты и объем реагента должны быть оптимизированы для первого использования, чтобы получить максимальную эффективность трансфекции.
7) Данный продукт предназначен только для научных исследований!
Инструкции
Трансфекция ДНК
[Примечание] Количество используемого трансфекционного реагента зависит от типа клеток и других экспериментальных условий. Рекомендуется установить градиент для оптимизации оптимального количества использования в первый раз.
1) Клетки высеваются, и к моменту трансфекции степень слияния клеток должна составлять 70–90%.
2) Разбавьте раствор Universal-B средой Opti-MEM в соответствии с таблицей ниже и осторожно перемешайте.
3) Разбавьте ДНК средой Opti-MEM для получения премикса ДНК, затем добавьте раствор Universal-A и осторожно перемешайте для получения разбавленной ДНК.
4) Добавьте разбавленную ДНК к разбавленному раствору Universal-B (соотношение 1:1).
5) Инкубируйте при комнатной температуре в течение 5 минут.
6) Добавьте комплекс ДНК-липосомы к клеткам по каплям и осторожно перемешайте.
7) Инкубируйте при температуре 37°C, 5% CO2 в инкубаторе в течение 48–96 часов до анализа экспрессии генов.
Трансфекция siRNA
Процедура трансфекции siRNA такая же, как и для трансфекции ДНК, за исключением того, что раствор Universal-A (шаг 3) не нужно добавлять при разбавлении siRNA.
Таблица 1. Количество трансфекции в различных сосудах для культивирования клеток (только для справки)
| Сосуды для культивирования клеток | 96-луночный | 24-луночный | 6-луночный | |
| Адгезивные клетки | 1-4×104 | 0,5-2×105 | 0,25-1×106 | |
| Разбавьте раствор Universal-B средой Opti-MEM в соответствии с таблицей ниже и осторожно перемешайте. | Среда Opti-MEM | 5 мкл | 25 мкл | 125 мкл |
| Универсал-Б | 0,2 мкл | 1 мкл | 5 мкл | |
| Разбавьте ДНК средой Opti-MEM для получения премикса ДНК, затем добавьте раствор Universal-A и осторожно перемешайте для получения разбавленной ДНК. | Среда Opti-MEM | 5 мкл | 25 мкл | 125 мкл |
| ДНК (0,5–5 мкг/мкл) | 0,1 мкг | 0,5 мкг | 2,5 мкг | |
| Универсал-А (2 мкл/мкг ДНК) | 0,2 мкл | 1 мкл | 5 мкл | |
| Добавьте разбавленную ДНК к разбавленному раствору Universal-B (соотношение 1:1). | Разбавленный раствор ДНК | 5 мкл | 25 мкл | 125 мкл |
| Универсал-Б | 5 мкл | 25 мкл | 125 мкл | |
| Инкубируйте при комнатной температуре в течение 5 минут. | ||||
| ДНК-липосомный комплекс | Компоненты (каждая скважина) | 96-луночный | 24-луночный | 6-луночный |
| Opti-MEM | 10 мкл | 50 мкл | 250 мкл | |
| ДНК(0,5–5 мкг/мкл) | 0,1 мкг | 0.5 мкг | 2,5 мкг | |
| Универсал-Б | 0,2 мкл | 1 мкл | 5 мкл | |
| Универсал-А | 0,2 мкл | 1 мкл | 5 мкл | |
| Добавьте комплекс ДНК-липосомы к клеткам по каплям и осторожно перемешайте. | ДНК-липосомный комплекс | 10 мкл | 50 мкл | 250 мкл |
[Примечание] Количество, указанное в таблице, дано только для справки. Конкретное количество ДНК и раствора Universal-B должно быть оптимизировано в соответствии с типом клеток и другими экспериментальными условиями. Рекомендуется поддерживать соотношение 1:0,5-1:5.
(1) В: Может ли присутствовать сыворотка при приготовлении комплекса реагентов для трансфекции нуклеиновых кислот?
A: Наличие сыворотки повлияет на формирование липосом. Рекомендуется использовать среду без сыворотки (обычно среду MEM) при приготовлении комплексов реагентов для трансфекции нуклеиновых кислот.
(2) В: Можно ли замораживать реагент для трансфекции?
A: Этот реагент необходимо хранить при температуре 2–8 °C, и следует избегать многократного и длительного открывания крышки, поскольку длительное открытие крышки вызовет окисление липосом и повлияет на эффективность трансфекции.
(3) В: На что следует обратить внимание при использовании универсального трансфекционного реагента Hieff Trans™?
A: 1) Во время операции трансфекции желательно, чтобы слияние клеток достигало 70–90 %, а удельная плотность посева определялась в зависимости от положения клеток.
2) Приготовление трансфекционных комплексов требует разбавления ДНК и трансфекционных реагентов в бессывороточной среде.
3) Антибиотики нельзя добавлять в среду во время трансфекции.
4) Использование высокоочищенной ДНК или РНК помогает добиться более высокой эффективности трансфекции, а эндотоксин в плазмидах является врагом трансфекции.
5) Хранить при температуре 2–8ºC, не открывать крышку слишком часто в течение длительного времени.
6) Концентрация нуклеиновой кислоты и объем реагента должны быть оптимизированы для первого использования, чтобы получить наивысшую эффективность трансфекции.
(4) В: Нужно ли прекращать трансфекцию после трансфекции?
A: Нет необходимости. Нет необходимости удалять комплекс реагента нуклеиновой кислоты-трансфекции или заменять его свежей средой после трансфекции, а свежую среду можно заменить через 4-6 часов в зависимости от состояния питательных веществ в клетках.
(5) В: Можно ли использовать реагент для трансфекции для трансфекции упаковки вирусного вектора?
О: Да.Эффективность упаковки вирусного вектора не обязательно связана с эффективностью трансфекции, но также с выбором упаковочных плазмид и соотношением между плазмидами.
Оплата и безопасность
Ваша платежная информация обрабатывается надежно. Мы не храним данные кредитной карты и не имеем доступа к информации вашей кредитной карты.
Расследование
Вам также может понравиться
Часто задаваемые вопросы
Продукт предназначен только для исследовательских целей и не предназначен для терапевтического или диагностического использования на людях или животных. Продукты и содержимое защищены патентами, товарными знаками и авторскими правами, принадлежащими Yeasen Biotechnology. Символы товарных знаков указывают на страну происхождения, а не обязательно на регистрацию во всех регионах.
Для некоторых приложений могут потребоваться дополнительные права интеллектуальной собственности третьих лиц.
Йесен привержен этической науке, полагая, что наши исследования должны затрагивать важнейшие вопросы, обеспечивая при этом безопасность и соблюдение этических стандартов.