Introduktion
Luciferase reporter gen Assay Kits, som ett oumbärligt kärnverktyg i läkemedelsutveckling, spelar en avgörande roll i nyckelprocesser som screening med hög genomströmning, effektivitetsutvärdering och målvalidering på grund av deras förmåga att övervaka genuttryck och signaltransduktion i realtid. Tillämpningen av denna teknologi har avsevärt förbättrat effektiviteten av läkemedelsscreening och utvärdering, och påskyndat upptäckten och utvecklingen av nya läkemedel.
Luciferase Reporter-gendetektionsprincip
Teknik för detektion av luciferasreportergen möjliggör kvantitativ analys av eldflugas luciferasaktivitet genom att katalysera oxidationen av luciferin till oxyluciferin och generera bioluminescens. Denna teknologi har ett betydande tillämpningsvärde inom områdena miRNA-målgenvalidering och reglering av promotortranskriptionell aktivitet. Genom att infoga regulatoriska element av målgenen uppströms och nedströms om luciferasgenen för att konstruera en luciferasreporterplasmid, kan celler transfekteras och utsättas för motsvarande stimulering eller behandling. Därefter, genom att lysera celler och mäta luciferasaktivitet, kan aktivitetsförändringarna av regulatoriska element under olika stimuleringsförhållanden bedömas, och därigenom få en djupare förståelse för genens regleringsmekanismer. uttryck.
Skillnaderna mellan enkla och dubbla luciferasdetekteringsapplikationer
Reportergenanalyser är primärt uppdelade i enkelluciferasreportergenanalyser och dubbelluciferasreportergenanalyser. I specifika tillämpningar, hur kan du avgöra om experimentet använder ett system för detektering av singelluciferas eller dubbelluciferas? Låt oss ta en titt på skillnaderna.
Single Luciferase Reporter Assay System
Antal reportergener: En enda eldfluga luciferasreportergen;
Transfektionstyp: En enda reportergenplasmid, efter transfektion, läkemedelselektion används för att konstruera en stabil reportergencellinje som uttrycker luciferas;
Detekteringsprocess: Endast eldflugans luciferassignal behöver detekteras, enkel operation, kort detektionsperiod, lämplig för screening av läkemedel med hög genomströmning;
Applikationsscenarioanalys: Det är vanligtvis genom konstruktionen av en stabil överuttryckande monoklonal cellinje, eftersom uttrycksnivån för dessa cellinjer är relativt stabil och enhetlig, utan påverkan av experimentella variationer på grund av transfektionseffektivitet och cellviabilitet. Operationen är enkel, och eftersom endast eldflugans luciferassignal detekteras är dataanalys mer bekvämt. Tillsammans med fördelarna med kort detektionstid är det särskilt lämpligt för läkemedelsscreening med hög genomströmning och uppfyller behoven för storskalig provdetektion.
Dual-Luciferase Reporter-gendetektionssystem
Rapporterad genmängd: Dubbla reportergener av eldfluga-luciferas och Renilla-luciferas;
Transfektionstyp: Samtransfektion av två reportergenplasmider, huvudsakligen genom transient transfektion;
Detekteringsprocess: Det är nödvändigt att först detektera firefly-signalen och sedan Renilla-signalen, och förhållandet mellan de två (Firefly/Renilla) används för den slutliga databeräkningen;
Applikationsscenarioanalys: Det är i allmänhet genom transient transfektion, med samtransfektion av en plasmid som innehåller Renilla luciferasgenen som en intern referens, vilket utgör ett riktmärke för experimentet, och därigenom minskar interferensen av externa faktorer såsom cellviabilitet och transfektionseffektivitet. Genom kvotberäkning är det möjligt att korrigera för variationer i cellantal, transfektionseffektivitet och cellaktivitet, vilket förbättrar noggrannheten hos experimentella resultat. Det är ett viktigt verktyg inom områdena genuttrycksreglering, signaltransduktionsvägar och läkemedelsscreening.
produktserie
Yeasen Luciferase Reporter Gene Detection produktserie ger en bekväm och effektiv kvantitativ detektionslösning. Enkomponentsdesignen förenklar användningsprocessen och den perfekta kombinationen av hög känslighet med en superlång signalhalveringstid på 5 timmar möter behoven av storskalig läkemedelsscreening. Vi erbjuder tre produkter: Bio-One Step, Steady-One Step och Bright-One Step, för att anpassa sig till olika känslighets- och stabilitetskrav.
| produktnamn | Bio-One Step | Steady-One Step | Bright-One Step |
| Produktkod | |||
| Applikationsscenarier och egenskaper | Detta kit uppnår en relativ balans mellan signalintensitet och stabilitet. Den upprätthåller en relativt hög signalintensitet samtidigt som den håller signalintensiteten relativt stabil under en viss tidsperiod. | Halveringstiden kan vara i mer än 5 timmar. Speciellt inom de första 2 timmarna är förändringarna i luminescensvärdet minimala. Den är lämplig för ultrahög genomströmning eller 384-brunnars plattanalyser. | Hög känslighet och hög signalintensitet. Lämplig för experiment som kräver hög känslighet. |
| Signal Half-Life | 60 minuter | 5 h | 30 minuter |
| Operationella egenskaper | Ett steg | Ett steg | Ett steg |
Produktfördelar
Lång signalhalveringstid: Signalhalveringstiden kan nå upp till 5 timmar, vilket möter behoven av experiment med hög genomströmning och undviker signalskillnader orsakade av tidsskillnaden mellan den första och sista brunnen på grund av ett stort antal prover, vilket säkerställer mer stabila och tillförlitliga resultat.
Stark fluorescenssignal: Signalvärdet kan nå 8 storleksordningar, vilket ger ett stort detektionsfönster och starkt datastöd för tidig läkemedelsscreening och effektutvärdering.
Enkel operation: Enstegsoperation undviker komplicerade experimentella procedurer. Tillsätt helt enkelt detektionsreagenset och vänta i 5 minuter innan du startar maskinen för detektering.
Flera val: Enligt olika applikationsscenarier finns det 3 olika produkter tillgängliga, som kan väljas utifrån de experimentella kraven på signalvärde och signalstabilitet.
Produktdata
01 Jämförelse av prestanda för Yeasen Annorlunda reportergen Analyssatser
Verifiering av tre typer av analyskit utfördes på cellinjer som stabilt uttrycker eldflugeluciferas, och resultaten visade att Bright-One Step-produkten har högre signalvärden; Steady-One Step-produkten har en längre signalhalveringstid och stabilare signaler; Bio-One Step-produkten har inte bara höga signalvärden utan bibehåller också en längre signalhalveringstid.
Figur 1. Jämförelse av prestanda för olika Yeasen Reporter-genanalyssatser
02 Yeasen Bio-One Step Luciferase Reporter-gendetektionsreagensjämförelse med konkurrerande produkter
När man använder Yeasen Bio-One Step, konkurrent P och konkurrent V på en cellinje som stabilt överuttrycker eldflugeluciferas, visar resultaten att signalvärdet och signalhalveringstiden för Yeasen Bio-One Step i huvudsak överensstämmer med konkurrenten P, och signalhalveringstiden är överlägsen konkurrent V.
Figur 2. Jämförelse av Yeasen Bio-One Step Luciferase Reporter-gendetektionsreagens med konkurrenter
03 Yeasen Bio-One Step Luciferase Reporter Gendetektionsreagens Frys-Tin stabilitetstest
Yeasen Bio-One Step Luciferase Reporter-gendetektionsreagens har genomgått upprepade frys-upptiningsexperiment, och resultaten visar att även efter 5 frys-upptiningscykler förblir produktens prestanda stabil utan några signifikanta förändringar.
Figur 3.Upprepad frys-upptiningstest av Yeasen Bio-One Step Luciferase Reporter-gendetektionsreagens
Operationell procedur
01 Celltransfektion
Tillsätt reagenset direkt till cellsuspensionen, pipettera sedan upp och ner 5 gånger för att säkerställa noggrann blandning, vänta i 5 minuter för att möjliggöra fullständig cellys.
02 Provladdning
Pipettera 100 μL av blandningen (detektionsreagens + cellodlingsmedium) i varje brunn på detektionsplattan.
03 Fluorescensdetektion
Ställ in parametrarna på plåtläsaren. Placera detekteringsplattan i plattläsaren, vibrera den i några sekunder och fortsätt sedan med detekteringen.
Produktlista
| Produktkategori
| Produktnamn | Produktkod | Produktspecifikationer |
| Luciferase Reporter Gene Assay Kit | 11411ES60/80/81 | 100T/10×100T/1000T | |
| 11413ES60/80/81 | 100T/10×100T/1000T | ||
| 11412ES60/80/81 | 100T/10×100T/1000T | ||
| Dual-Luciferase Reporter Gene Assay Kit
| 11402ES60/80 | 100T/1000T | |
| 11405ES60/80 | 100T/1000T |