Kära vänner, känner ni er vilse när ni står inför olika Loading Control och Epitope Tagging Antikroppar under proteinimmunoblotting? Laddningskontroll proteiner kodas av hushållningsgener i organismer och uttrycks stabilt i flera vävnader. De används för att verifiera om immunologiska experiment fortskrider normalt och som en semikvantitativ detektionsstandard för proteinuttryck. Så, hur väljer du korrekt laddningskontrollantikroppar? Du kan hänvisa till följande punkter.

I. Prov Art Ursprung

1. För prover från däggdjursvävnader eller celler, välj i allmänhet β-aktin, α-tubulin, GAPDH, Lamin-B, Histone H3, Na+/K+-ATPas.
2. För växthärledda prover, välj i allmänhet växtaktin, Rubisco, etc.
3. För andra prover med mindre forskning, välj lämpligt protein som en intern referens genom att konsultera relevant litteratur eller databaser.

Se till att molekylvikten för målproteinet skiljer sig från belastningskontrollens med mer än 5KDa för att förhindra störningar under detektering. Till exempel, om målproteinet är 40KDa, är det inte lämpligt att välja β-aktin (42KDa) som en laddningskontroll. Överväg att använda GAPDH (36KDa) eller β-tubulin (55KDa) som laddningskontroll.

III. Expressionsplats för det interna referensproteinet

Märkantikroppar fungerar bättre när de används tillsammans

I experiment som studerar proteininteraktioner, såsom pull-down, kan epitoptaggar fusioneras till N- eller C-terminalen av målproteinet genom molekylärbiologiska metoder. Vanligt använda epitoptaggar inkluderar His, HA, Myc och GST. Dessa epitoptaggar påverkar vanligtvis inte den biologiska aktiviteten och intracellulära lokaliseringen av målproteinet. Uppkomsten av epitoptaggar har tillhandahållit bekvämlighet för vetenskaplig forskning och industriell produktion.

Produktinformation