Mykoplasma upptäckt, förebyggande och avlägsnande - allt i ett steg!
Mykoplasma
Mykoplasma, även känd som mykoplasma, är den minsta och enklaste prokaryoten som hittills upptäckts, med en diameter på 0,1 till 0,3 μm. Den kan passera genom filter och uppvisar hög pleomorfism, uppträder i olika former som sfärisk, stavformad, filamentös och grenad. I laboratorier och biofarmaceutisk produktion är cellkulturer utsatta för mykoplasmakontamination. Enligt litteraturen är förekomsten av mykoplasmakontamination i lagrade cellinjer cirka 15%-35%, och inom den biofarmaceutiska industrin varierar den från 0,44%-6,70%. [1].
Figur 1: Morfologi av mykoplasma
Effekten av mykoplasmakontamination
Bakterie- och svampkontamination är relativt lätt att upptäcka, förhindra och ta bort, men mykoplasmakontamination är svår att upptäcka. Även vid tillväxttätheter så höga som 10^7-10^9 CFU/ml kan det inte finnas några tydliga tecken på kontaminering (som grumlighet eller pH-förändringar). Mykoplasmakontamination kan leda till olika förändringar i celler (se figur 2).
Figur 2: Förändringar i celltillstånd efter mykoplasmakontamination
Applikationsscenarier för mykoplasmadetektion
Typiska källor till mykoplasmakontamination
- Korskontaminering mellan celler;
- Kontaminering av arbetsmiljön eller experimentell utrustning;
- Dålig aseptisk teknik av försöksledaren;
- Kontaminering av odlingsmedier eller andra reagens;
- Kontaminering av den ursprungliga vävnaden eller organet som används för cellberedning.
Vad man ska göra när cellkulturer stöter på mykoplasmakontamination
Figur 3: Totallösning för mykoplasmakontamination
Tre-i-ett-lösning för mykoplasmakontamination i celler
1. Mykoplasma-detektion
Enstegs isotermisk mykoplasma-detektion:
Yeasens enstegs isotermiska mykoplasma-detektionsreagens använder unik isotermisk amplifieringsteknologi, som erbjuder starkare färgskillnad – från blålila (negativ) till himmelsblå (positiv) – vilket gör det lättare för visuell identifiering. Den innehåller antikontamineringskomponenter för att eliminera falska positiva.
Figur 4: Operationsprocess för enstegsmykoplasmadetektion
PCR-baserad mykoplasmadetektion:
Yeasens PCR-mykoplasmadetektionsmetod skiljer sig från konventionell enstegs-PCR genom att använda tre par primrar istället för en, som riktar in sig på de 16S- och 23S-konserverade regionerna i mykoplasman för kapslad PCR-amplifiering. Detta förbättrar avsevärt känsligheten samtidigt som den minskar ospecificiteten, detekterar så lite som en enda kopia av mykoplasma.
Figur 5: Gelelektroforesbild av PCR-amplifiering av prover med olika mykoplasmakoncentrationer
Figur 6: Gelelektroforesbild av PCR-amplifiering av prover med olika mykoplasmakoncentrationer
Tabell 1: Typer av mykoplasma som kan detekteras av Yeasens enstegs isotermiska mykoplasma-detektionsreagens
Obs: Den blå sektionen indikerar mykoplasmatyper som kan detekteras med både enstegs isotermisk detektion och PCR-metoder.
2. MycAway Mycoplasma Elimination Reagens (1000×)
MycAway Mycoplasma Elimination Reagent (1000×) är en blandad formulering som effektivt eliminerar mykoplasma genom att hämma DNA och essentiell proteinsyntes som krävs för mykoplasmatillväxt, utan att skada cellerna. Det räddar maximalt dina celler och minskar förluster på grund av mykoplasmakontamination.
Figur 7: Demonstration av cellelimineringseffekt
Egenskaper hos Mycoplasma Elimination Reagens:
- Låg toxicitet: Minimal cytotoxicitet, påverkar inte efterföljande cellexperiment såsom cellviabilitetstestning och transfektion;
- Hög stabilitet: Kan förvaras vid -20°C under längre perioder med bibehållen effekt;
- Lätt att använda: Lägg bara till produkten till det mykoplasma-kontaminerade odlingsmediet och inkubera;
- Snabbverkande: Synliga resultat på så lite som 3 dagar;
- Brett spektrum: Effektiv mot de flesta typer av laboratoriemykoplasma.
Figur 8: Cytotoxicitetstestdiagram för mykoplasma-elimineringsreagens
3. Förebyggande av mykoplasma
Produkt Information
| kategori | Produktnamn | Katt nr. | Specifikationer |
|
Upptäckt | 40612ES25/60 | 25/100 T | |
| MycAway™ Mycoplasma qPCR-detektionssats i realtid Hot | 40618ES25/60 | 25/100 T | |
| 40601ES10/20 | 10/20 analyser | ||
|
Borttagning | MycAway™ Spray (färdig att använda) | 40605ES02/03 | 1/2×500 ml |
| 40607ES03/08 | 1/5×1 ml | ||
|
Förebyggande | MycAway™ Profylaktiskt (2000×)-mykoplasmaförebyggande reagens | 40608ES03/08 | 1/5×1 ml |
| 40609ES60 | 100 ml | ||
| 40610ES60 | 100 ml |