Ultra-Clean UCF.ME ™ Termostable RNase H: Exakt skärning för effektivare experiment!

Idealisk för rRNA-borttagning och mRNA-kapsling effektivitetsdetektering!

Termostabil RNase H, med sin exceptionella värmebeständighet, överträffar vanlig RNase H i både specificitet och effektivitet!

Introduktion till RNase H

E. coli RNase H (E. coli Ribonuclease H) är ett enzym som specifikt bryter ned RNA-komponenten i RNA-DNA-hybridsträngar. Den spelar en viktig roll i processer som DNA-replikation, reparation och transkription genom att klyva RNA-strängen för att upprätthålla integriteten och stabiliteten hos DNA-mallen. Detta gör den allmänt använd i molekylärbiologiska experiment, inklusive cDNA-syntes, rRNA-borttagning och RNA-interferensstudier. E. coli RNase H har dock några begränsningar:

• Det kan orsaka ospecifik klyvning av enkelsträngat RNA eller DNA, vilket minskar exaktheten i experimentella resultat.
• Dess dåliga termiska stabilitet hindrar den från att upprätthålla aktivitet vid höga temperaturer, vilket gör den olämplig för experiment som högtemperaturomvänd transkription eller PCR som kräver förhöjda temperaturer.

Dessa brister har drivit forskare att utveckla termostabilt RNase H för att bredda dess tillämpningar och förbättra experimentell effektivitet.

Figur 1: RNase H-mekanism

Termostabil RNase H från Thermus thermophilus

Termostabilt RNas H, härlett från Thermus thermophilus, är en homolog av E. coli RNas H och delar liknande ribonukleasfunktioner. Den identifierar och klyver effektivt fosfodiesterbindningarna i RNA-strängen i RNA:DNA-hybrider samtidigt som den bevarar DNA-strängens integritet. En djupgående strukturell analys avslöjar att även om dess totala stabilitetsfördelning liknar den för E. coli RNase H, uppvisar T. thermophilus RNase H signifikanta förbättringar i både total stabilitet och lokal reststabilitet.

Med en optimal aktivitetstemperatur över 65°C ger termostabilt RNase H förbättrad specificitet och effektivitet vid högre reaktionstemperaturer, vilket minimerar ospecifik klyvning. Den här egenskapen frigör sin stora potential i molekylärbiologiska experiment, inklusive:

• rRNA-borttagning
• Detektion av mRNA-täckningshastighet
• Avlägsnande av mRNA poly(A) hybridiserad till poly(dT)
• Avlägsnande av mRNA under cDNA andra-strängsyntes
• Förbättrad amplifieringseffektivitet i högtemperaturomvänd transkription, isotermisk amplifiering och PCR-experiment

Figur 2: Tredimensionell strukturjämförelse av termostabilt RNas H och E. coli RNas H ^[1]

UCF.ME™Termostabil RNase H (Cat14545)

Termostabilt RNase H används ofta i patogendetektionsexperiment, såsom rRNA-borttagning vid metagenomisk sekvensering (mNGS) och patogenriktad sekvensering (tNGS). Kvarvarande värd- eller bakgrundsbakteriella nukleinsyror i enzymet kan avsevärt äventyra detektionsnoggrannheten. För att ta itu med detta, Yeasen Biotech introducerar UCF.ME™ Termostabil RNase H (Cat14545), utvecklad med sin egenutvecklade UCF.ME™ ultraren processteknik. Producerad på UCF.ME™ ultraren molekylär enzymanläggning genomgår denna produkt rigorös kvalitetskontroll – från materialval och miljöledning till processoptimering och testning – vilket säkerställer minimalt med bakteriellt gDNA och nukleasrester i bakgrunden.Detta garanterar exakta, tillförlitliga och reproducerbara experimentella resultat.

Produktfördelar:

• Hög aktivitet och utmärkt konsistens från batch-till-batch
• Extremt låg värd-gDNA-rest: <0,02 kopior/U
• Inga exonukleas-, endonukleas- eller RNas-rester
• Enastående stabilitet: Ingen signifikant förlust av enzymaktivitet efter 32 dagar vid 4°C, 16 dagar vid 25°C eller 7 dagar vid 37°C

Performance Showcase av UCF.ME™ Termostabil RNase H (Cat14545)

1. Hög aktivitet och batchkonsistens

Tre partier av UCF.ME™ Termostabilt RNas H inkuberades med RNA:DNA-substrat och bandförändringar analyserades via agarosgelelektrofores. Resultaten visar att bara 0,05 U av detta enzym effektivt klyver RNA:t i 20 pmol RNA:DNA-substrat, med utmärkt sats-till-sats-konsistens, vilket framhäver dess stabilitet och tillförlitlighet.

Figur 3: Aktivitetsdetekteringsresultat av UCF.ME™ Termostabil RNase H

Notera: Reaktionsförhållanden: 50°C i 20 minuter; RNA:DNA-substrat – 20 pmol

2. Låg värd-gDNA-rest: <0,02 kopior/U

Värd (E. coli) gDNA-restertestning över flera satser visar att alla tre satser av UCF.ME™ Termostabilt RNase H har resthalter långt under 0,02 kopior/U, vilket säkerställer hög renhet och experimentell tillförlitlighet.

Figur 4: Värd gDNA-restresultat av UCF.ME™ Termostabil RNase H

3. Inga exonukleas-, endonukleas- eller RNas-rester

25 U av UCF.ME ™ Termostabilt RNas H inkuberades med nukleinsyrasubstrat och bandförändringar bedömdes genom agarosgelelektrofores. Inga exonukleas-, endonukleas- eller RNas-rester upptäcktes i någon av de tre batcherna, vilket ger en stark garanti för resultatnoggrannhet och tillförlitlighet.

Figur 5: Detektionsresultat av exonukleas-, endonukleas- och RNas-rester i UCF.ME™ Termostabil RNase H

4. Utmärkt stabilitet

UCF.ME™ Termostabilt RNas H utsattes för stabilitetstester: 32 dagar vid 4°C, 16 dagar vid 25°C och 7 dagar vid 37°C. Enzymaktivitetsmätningar visade ingen signifikant minskning, vilket bevisade dess exceptionella stabilitet över ett brett temperaturområde och dess lämplighet för långtidslagring och olika experimentella förhållanden.

Figur 6: Accelererade stabilitetsresultat av UCF.ME™ Termostabil RNase H

Rekommenderade relaterade produkter

Källa	Produktnamn	Katt No.
T. thermophilus	UCF.ME™ Termostabil RNase H	14545ES
E.coli	RNase H	12906ES

Referenser

1. Hollien J, Marqusee S. Strukturell fördelning av stabilitet i ett termofilt enzym [J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 1999, 96(24): 13674-13678.

2. Wolf EJ, Dai N, Chan SH. Selektiv karakterisering av mRNA 5'End-Capping genom DNA-sondsriktad anrikning med platsspecifika endoribonukleaser [J]. [2025-03-03].

3. Gu H, Sun YH, Li XZ. Nya rRNA-utarmningsmetoder för total RNA-sekvensering och ribosomprofilering utvecklade för fågelarter [J]. Poultry Science, 2021, 100(7): 101321. DOI:10.1016/j.psj.2021.101321.