Molekylär diagnostisk teknologi skiljer sig från olika detektionsmetoder på grund av sin exceptionella känslighet och specificitet. Konventionella flytande diagnostiska reagens lider emellertid av nackdelar såsom höga transportkostnader och begränsad hållbarhet, vilket begränsar deras användbarhet. Som svar på förändrade marknadsbehov och tekniska framsteg har lyofiliserade reagenser för molekylär diagnostisk testning dykt upp. Frystorkade produkter erbjuder flera fördelar jämfört med traditionella flytande testreagenser, inklusive:
- Stabil i rumstemperatur - den tredimensionella strukturen är fixerad, vilket kan säkerställa stabiliteten hos enzymet och reaktionssystemet vid rumstemperatur. Inget behov av kylkedjetransport och förvaring i kylskåp eller kylförvaring, vilket kan förlänga produkternas hållbarhet.
- Lätt att använda- Inget behov av upprepad frysning och upptining, vätskedosering etc.
- Minskad kostnad- Inget behov av kylkedjetransport och frysförvaring, vilket effektivt minskar transport- och lagringskostnaderna.
- Hög precision- En frystorkad mikrokärna används i en reaktion för att minska sammansättningsfelet under reagensberedning, förkorta drifttiden, förhindra förlust av biologisk aktivitet under flytande beredning och i grunden förbättra precisionen.
- Flexibel användning- Inte begränsat av provnummer, ett prov kan också laddas.
Konventionella molekylära enzymer eller förblandningar innehåller ofta höga koncentrationer av glycerin som ett kryoskyddande medel och stabilisator. Däremot kan närvaron av glycerin i reagenset störa vattnets strukturella integritet, vilket gör det svårt att eliminera vatten effektivt. Detta har i sin tur en skadlig inverkan på strukturen och stabiliteten hos den frystorkade produkten. När du väljer frystorkning är det därför lämpligt att välja glycerolfria reagenser.
Vidare, i applikationer som är särskilt känsliga för reagenssammansättning, såsom digital PCR, kan användningen av högkoncentrerade glycerinfria enzymer ytterligare mildra påverkan av glycerol på den digitala PCR-reaktionen. Detta tillvägagångssätt minimerar inte bara störningar utan breddar också potentialen för att optimera det digitala PCR-detektionsreagenssystemet.
YEASEN Glycerolfri molekylär enzymlösning
YEASEN har etablerat en omfattande FoU- och produktionsplattform för icke-glycerinmolekylärt enzym och har uppnått storskalig produktion av flera glycerolfria molekylära enzymer genom materialval, miljökontroll, processoptimering och kvalitetssäkring.
- Test av dialysprocess
Optimera dialysprocessen för en fast volym glycerinenzym:
- Screening för den optimala dialysbufferten för olika molekylära enzymer;
- Screening för stabila lagringslösningar för olika molekylära enzymer för att möjliggöra långtidslagring vid 4 ℃ eller -20 ℃.
- Tangentiellt flödesfiltreringsprocessförstärkning
Baserat på dialysprocessscreeningen kan de optimala dialysbuffertkomponenterna och deras optimala lagringslösningar bestämmas. Därefter kan tangentiell flödesfiltrering (även känd som UFDF) användas för ersättning av lösningsbuffert.
De avgörande faktorerna i utvecklingen av den tangentiella flödesfiltreringsprocessen kretsar kring valet av lagringslösningsformel, tvätt- och filtreringslösningsformel, såväl som transmembrantrycket och flödeshastigheten som tillämpas under filtreringen. YEASEN har etablerat ett standardiserat tillvägagångssätt för tangentiell flödesfiltrering, vilket möjliggör snabb bestämning av tvätt- och filtreringsvolymer och tidsparametrar baserat på det önskade glycerininnehållet i det molekylära målenzymet. Detta tillvägagångssätt hjälper till att spara på både material och tid.
- Kvalitetskontroll
De olika beredningsprocesserna som beskrivs ovan är utformade för att tillgodose de olika kraven för olika volymer och produkttyper. För att bedöma produktstabilitet över olika satser och inom samma process har YEASEN utvecklat ett omfattande system för karakterisering av prestandaparametrar. Detta system möjliggör en grundlig utvärdering av effekten av glycerolfria åtgärder ur flera perspektiv. Karakteriseringsmetoder omfattar proteinkvantifiering, bedömning av enzymaktivitet (återvinningsgrad), analys av glycerininnehåll, bedömning av innehåll av skyddsmedel och utvärdering av enzymprestanda, bland annat.
YEASEN glycerolfria molekylära enzymprodukter
YEASEN har antagit en glycerolfri molekylär enzymframställningsmetod för att producera enzymer utan glycerininnehåll från de som ursprungligen innehåller glycerin. För närvarande kan vi leverera betydande mängder glycerolfria enzymråvaror som är lämpliga för qPCR/RT-qPCR och LAMP/RT-LAMP applikationer. Dessa råvaror är designade för frystorkning i diagnostiska tester, samtidigt som de bibehåller samma nivå av kvalitet och prestanda som deras flytande motsvarigheter.
Glycerolfria molekylära enzymprodukter
qPCR-förblandningar framställdes med användning av YEASEN 14316ES E-Taq DNA-polymeras och motsvarande glycerolfria enzymer, respektive, och mallen på 105, 104 och 103 kopior/ml amplifierades samtidigt. Resultaten visade att amplifieringseffekten av glycerolfri 14316ES överensstämde med den för glycerininnehållande motsvarighet. Det accelererade stabilitetstestet av 14316ES utfördes vid 37 ℃. Resultaten visade att expansionsprestandan för 14316ES överensstämde med den för oaccelererad kontroll efter 54 dagars accelererad behandling vid 37 ℃. Ovanstående resultat visade att det inte fanns någon skillnad i prestanda för glycerolfritt enzym och glycerininnehållande motsvarighet, och stabiliteten var bra.
- RT-qPCR frystorkade produkter: Accelererade vid 50 ℃ i 25 dagar, frystorkade produkter har stabil morfologi och prestanda
Yeasen 14316ES bereddes till RT-qPCR förblandad lösning, som frystorkades och testades för accelererad stabilitet vid 50 ℃ i 25 dagar. Samtidigt 105, 104 och 103 kopior/ml av den nya coronavirus-pseudovirusmallen amplifierades.Resultaten visade att produktens morfologi, Ct-värde och fluorescensvärde inte hade någon signifikant förändring före och efter frystorkning, och den frystorkande produkten hade god stabilitet.
Figur 4: Accelererade stabilitetstestdata för RT-qPCR frystorkade produkter- RT-LAMP frystorkade produkter: Accelererade vid 45 ℃ i 30 dagar, frystorkade produkter har stabil morfologi och prestanda
RT-LAMP-förblandningen framställdes med YEASEN 14405ES och 11297ES, och prestandatestet utfördes efter frystorkning. Det positiva reaktionshålet var orange och det negativa reaktionshålet var magenta, vilket visade stor kontrast, och resultatet tolkades tydligt. Dessutom förändrades inte morfologin för frystorkade produkter nämnvärt efter 30 dagars acceleration vid 45 ℃. Resultaten visade att den frystorkade produkten var stabil i form och prestanda.
Produktinformation
| Klassificering | Name | Katalog nr. |
| Glycerolfria enzymprodukter för qPCR/RT-qPCR | Hifair™ Lyo Multiplex One Step RT-qPCR Kit -11831ES | 11831ES |
| 14316ES | ||
| 11301ES | ||
| 10707ES | ||
| 10703ES | ||
| Glycerolfria enzymprodukter för RT-LAMP | Hifair® III omvänt transkriptas, 600U/μl, glycerolfri | 11297ES |
| 14405ES |