Är du fortfarande störd av den låga effektiviteten av homolog rekombination av multifragment eller superlångt fragment och det lilla antalet kolonier?

Fortfarande för bäraren eller fragment är mer värdefull, låg avkastning, för att spara råvaror, användningen av små system låg koncentration ligering, men ligering effektiviteten är låg och störd?

YEASEN produkt: Betydligt förbättrad, låg koncentration, litet system och ultralånga fragment av ligeringseffektiviteten, hög positiv kloningshastighet, hjälper dig att enkelt slutföra ligering.

Jämförelse av enstegskloning med traditionella enzymbegränsande kloningsmetoder

Produktfördel

Orientering: 1-7 DNA-fragment enstegskloning.

Enkelt: Flera fragment kan ligeras i ett rör.

Snabb: Snabbaste ligering på 5 min.

Hög effektivitet: Hög positiv kloningshastighet.

Litet system: Det totala ligeringssystemet kan vara så lågt som 6 μL.

Överlängd: Över 25 kb (bärare+fragmentlängd) för ligering.

Prestanda Visa

• Effektiv rekombination av ett enda fragment 6 μL litet system

Fig. 1 10 ng enstaka fragment med låg ingång ligerades i tillståndet för icke-återupplivning mottagliga celler i det 6 μL lilla systemet.Resultaten visade att 10923ES hade bättre prestanda än konkurrerande produkter, med hög ligeringseffektivitet, fler kolonier och en positiv frekvens på 100 %. AB: Rekonstituerad omvandlingsplatta. Molförhållandet mellan bärare (10 kb) och insatt fragment (1 kb) var 1:2. C: PCR-identifiering av insatt fragment. M: YEASEN 10505ES. Bärarvolym: 40 ng/6 μL Reaktionssystem, reaktionsförhållanden: 50 ℃, 15 min.

• Flerfragment effektiv rekombination

Fig. 2 Sex fragment (7,6 kb) ligerades. Resultaten visade att 10923ES hade bättre prestanda än konkurrerande produkter, med fler kolonier och en positiv frekvens på 100%. AB: Rekonstituerad omvandlingsplatta. Molförhållandet mellan bärare (11,6 kb) och insatt fragment (7,6 kb) var 1:2. C: PCR-identifiering av insatt fragment. M: YEASEN 10505ES, PCR-längd 2,6 kb. Bärarvolym: 200 ng/20 μL Reaktionssystem, reaktionsförhållanden: 50 ℃, 50 min.

• Lågkoncentration multifragment effektiv rekombination

Fig. 3 Ligera de fem och sex fragmenten med låg koncentration separat. Resultaten visade att 10923ES uppvisade stabil anslutning vid låga koncentrationer, med ett högt bakterieantal och en 100 % positivitet. AB: Rekombinant konverteringsplatta. CD: Insättningsfragment PCR-identifieringselektroforesbild, M: YEASEN 10505ES, PCR-längd 2,6 kb.

• Reagensstabilitet

Fig. 4 Efter att ha placerats vid 37 ℃ i 7 dagar visade resultaten att 10923ES förblev stabil när det gäller att länka de fem och sex fragmenten vid låga koncentrationer. AF: Rekombinant konverteringsplatta. GH: Insättningsfragment PCR-identifieringselektroforesbild, M: YEASEN 10505ES, PCR-längd 2,6 kb.

Kundcase

• Effektiv omorganisation av små system

Fig. 5 10923ES ligerades till ett enda fragment i en 10 μL litet reaktionssystem, med en positiv andel på 100 %. S: Rekonstituerad omvandlingsplatta. B: PCR-identifiering av insatt fragment. Bärarstorlek: 5 631 bp; Målfragmentstorlek: 1 384 bp.

Fig. 6 10 μL Enkelt fragment-övergångs- och punktmutationsklon för litet system, 100 % positiv frekvens. A & C: Rekombinationstransformationsplattor. B: PCR-identifiering av insatta fragment, spår 1-5 är koloni 1, koloni 2, negativ kontroll, positiv kontroll (genom som mall), positiv kontroll (PCR-renat fragment som mall). D: Elektroforegram av PCR-identifiering av insatta fragment.

• Effektiv rekombination av korta fragment med låg koncentration

Fig. 7 10923ES som ansluter lågkoncentrationsfragment. Jämfört med konkurrerande produkter var antalet kolonier högt och den positiva andelen (10/11) var > 90,9 %. AB: Rekonstituerad omvandlingsplatta. C: PCR-identifiering av insatt fragment. Bärarstorlek: 3 000 bp; målfragmentstorlek: 441 bp.

• Effektiv och snabb ligering med flera segment

Fikon.8 10923ES fyrsegmentsligering, hög GC och kort segmentkombination, jämfört med S-märket, har ett högre bakterieantal på 10923ES och en positiv frekvens på 100 %. D: Rekombinant konverteringstablett. E: Infoga identifieringskarta för fragmentsekvensering. F: Sanger-sekvensering bekräftade den framgångsrika kopplingen mellan vektor och fragment, och sekvenseringen på anslutningsplatsen var korrekt.

Strength Star Produktrekommendation

10923ES Beställningskanal

Produktorientering	Name	Art.nr	Sspecifikationer
1 – 7 fragment sammanfogades i ett steg och rekombinationsreaktionen fullbordades inom de snabbaste 5 minuterna	Hieff CloneTM Universal II One Step Cloning Kit	10923ES20/50	20 T/50 T

Rupprymd Pprodukter

Produktorientering	Name	Art.nr	Sspecifikationer
High-fidelity PCR	2× Hieff CanaceTM AdvanceFast PCR Master Mix (med färg)	10164ES03/08	1 ml/5×1 ml
Snabb PCR-uppgradering, kan vara koloni-PCR och lämplig för komplex mallförstärkning	2×HieffTM Ultra-Rapid II HotStart PCR Master Mix	10167ES03/08	1 ml/5×1 ml