Kapitel 1: PCR-teknik
1.1 Principer för PCR
PCR (Polymerase Chain Reaction), eller polymeraskedjereaktion, hänvisar till DNA-polymeraset katalyserad av modersträngen av DNA som en mall, med en specifik primer för förlängning av utgångspunkten, tillägg av dNTP, Mg2+ och förlängningsfaktorer, förstärkning faktorer. Genom denaturerings-, glödgnings- och förlängningssteg, in vitro-replikationen av dottersträngen är komplementär till modersträngens mall-DNA, som snabbt och specifikt kan amplifiera vilket mål-DNA som helst in vitro.
1.2 Klassificering av DNA-polymeraser
DNA pol är en viktigt enzym för cellulär replikering av DNA. Enligt termisk stabilitet, syntesförmåga, hastighet, trohet och specificitet, kan det klassificeras som Taq DNA-polymeras, högtroget DNA-polymeras, hot-start DNA-polymeras, direktexpansions-DNA-polymeras, långfragmenterat DNA-polymeras enzym, snabbt DNA-polymeras, multipelt DNA-polymeras och så vidare.
Den vanligaste av dessa är Taq DNA-polymeras, som har polymerasaktivitet vid 5'→3'-änden och exonukleasaktivitet vid 5'→3'-änden, men nej 3'→5' slutkorrigeringsaktivitet. Den viktigaste egenskapen hos Taq är dess goda värmebeständighet, som tål den termiska denatureringen steg av PCR, vilket gör det onödigt att tillsätta mer enzym halvvägs genom processen. Taq har dock låg trohet eftersom det inte har någon korrekturläsning. Dess trohet uppnås huvudsakligen genom koncentrationen och förhållandet mellan magnesiumjoner och dNTP.
High-fidelity DNA-polymeras innehåller ett polymerisationscentrum och ett klyvningscentrum, polymerisationscentret har en 5'→3' DNA-polymerasaktivitet, som kan katalysera syntesen av DNA i riktning mot 5'→3'; klyvningscentret har en 3'→5' exonukleasaktivitet, som kan utföra reparation av basfelparningar. Därför, förutom egenskaperna hos Taq DNA-polymeras, har high-fidelity DNA-polymeras också korrigerande aktivitet, ansvarig för excising det oöverensstämmande nukleotider, vilket säkerställer produktens noggrannhet.
Diagrammet ovan visar hur DNA-polymeras fungerar [1].
Direkt PCR (Direct PCR) är en reaktion på det använder orenade prover för PCR-amplifiering och djur eller växtvävnader för direkt amplifiering. För närvarande, Yeasen Direkt PCR-kit kan användas för PCR-amplifiering av råprover som växter, djurvävnader, blod etc. utan behov av nukleinsyrarening, vilket avsevärt förenklar processen för PCR-experiment.
Ovanstående figur visar Direct PCR-tekniken.
A. Direkt metod: ta en liten mängd prov och lägg till det direkt till PCR Master Mix för PCR-identifiering;
B. Lyseringsmetod: efter att provet tagits, tillsätt det till lyseringslösningen för att frigöra genomet, ta en liten mängd av lyssupernatanten och tillsätt den till PCR Master Mix för PCR-identifiering.
1.3 Vanliga frågor och lösningar
| Problem | Resonera | Lösning |
| Utan förstärkta band | Problem med elektroforessystemet | Felsök nukleinsyrafärgämne, gelkoncentration och elektroforesbuffert. |
| Felaktig denatureringstemperatur | Stämmer den indikerade temperaturen för PCR-instrumentet överens med den faktiska temperaturen? Om temperaturen är för hög är enzymet snabbt under de första cyklerna; om den är för låg är malldenatureringen inte fullständig. | |
| Kontaminering av proteas och nukleas i reaktionssystemet | Reaktionssystemet bör värmas vid 95°C i 5-10 minuter före tillsats av Taq-enzym. | |
| Primer fel | Kontrollera primerspecificiteten eller designa om primers med BLAST. | |
| Mallen innehåller föroreningar | I synnerhet innehåller formaldehydfixerade och paraffininbäddade vävnader ofta myrsyra, vilket orsakar DNA-depurinering och påverkar PCR-resultaten. | |
| Primer försämring och misslyckande | Bekräfta att de syntetiska primrarna är korrekta, renade eller inaktiverade på grund av felaktiga lagringsförhållanden. | |
| Mindre mängd PCR-produkt | Olämplig glödgningstemperatur | En gradient PCR-reaktion utformades för att optimera glödgningstemperaturen med en gradient på 2 grader. |
| Förekomst av inhibitorer i DNA-mallen | Se till att DNA-mallen är ren. | |
| Långvarig denaturering | Långvarig denaturering leder till inaktivering av DNA-polymeras. | |
| Förlängningen är för kort | Förlängningstiden är för kort. Ställ in förlängningstiden på principen 1kb/min. | |
| Mängden DNA-mall för låg | Öka mängden DNA-mall. | |
| Otillräcklig mängd primers | Öka primerinnehållet i systemet. | |
| Otillräckligt antal PCR-cykler | Öka antalet reaktionscykler. | |
| Flera band | Dålig primerspecificitet | Primerdesignprogramvara såsom BLAST och Primer användes för att kontrollera primerspecificitet eller redesigna primers. |
| För stort antal slingor | Öka mängden mall på lämpligt sätt och minska antalet cykler. | |
| Exogen DNA-kontamination | Säkerställ ren drift. | |
| Överdriven mängd mallar | Mängden plasmid-DNA bör vara <50 ng, medan genomiskt DNA bör vara <200 ng. | |
| För mycket primer | Minska mängden primers i reaktionssystemet. | |
| Reaktionslösningen är inte väl blandad | Se till att reaktionsbufferten är helt smält och noggrant blandad. | |
| Mg Hög koncentration | Justera koncentrationen av Mg som används på lämpligt sätt. | |
| Hög enzymdos eller dålig enzymkvalitet | Minska mängden enzym eller ersätt det med en annan källa. | |
| Låg glödgningstemperatur, lång glödgning och förlängningstid | Öka glödgningstemperaturen för att minska denaturerings- och förlängningstiden, eller utforma en gradient PCR-reaktion för att optimera glödgningstemperaturen. | |
| Problem med själva PCR-blandningen | Om det är PCR-premix kan det vara kvaliteten på själva reagenset, det rekommenderas att byta batch eller andra märken. | |
| Fel storlek | Contaminering | Rengör bänken med nya reagenser och spetsar. |
| Felaktig användning av mallar eller primers | Byt ut primers och mallar. | |
| Genotyp | Sekvensanalys och BLAST-studier utfördes på de studerade generna. |
Kapitel 2: Nukleinsyraelektrofores
2.1 Principer för nukleinsyraelektrofores
Rörelsen av laddade partiklar under inverkan av ett elektriskt fält mot en elektrod som är motsatt deras elektriska egenskaper kallas elektrofores. Använda de laddade partiklarna i det elektriska fältet röra sig i olika hastigheter och uppnå separation av tekniken kallas elektrofores. Nukleinsyraelektrofores är en viktigt verktyg för nukleinsyraforskning och är en integrerad del av tekniker som t.ex nukleinsyrasonder, nukleinsyraamplifiering och sekvensanalys. Nukleinsyraelektrofores är vanligtvis genomförs i agaros eller polyakrylamidgeler. Olika koncentrationer av agaros och polyakrylamid kan bilda geler med olika molekylsiktsmaskstorlekar, som kan användas för att separera nukleinsyrafragment med olika molekylvikter.
2.2 Agarosgelelektrofores
Agaros är en linjär polymer extraherad från tång. Agaros värms upp i en buffertlösning och smälts till en klar, genomskinlig sol, som sedan hälls i en gelatinform och stelnar till en fast matris känd som en gel, vars densitet beror på koncentrationen av agaros.
Agaros gelelektrofores är en typ av elektroforesmetod som använder agaros som stödmedium, och den största skillnaden mellan analytisk princip och annan stödelektrofores är att den har dubbel roll av "molekylsikt" och "elektrofores". De gel placeras i elektriskt fält, under handlingen av elektriskt fält, det laddade nukleinsyror migrerar till positiv stolpe genom nätet av de gel. De takt av migrationen påverkas av storleken på nukleinsyramolekyler, agaroskoncentration, pålagd spänning, elektriskt fält, elektroforesbuffert och mängden inbäddat färgämne. Efter lämplig tid för elektroforsär under olika förutsättningar, kommer nukleinsyrafragment med olika storlekar och konformationer att vara i olika positioner på gelén, vilket således uppnår syftet med separation.Separationen av agarosgel har ett brett sortiment, som vanligtvis används vid återvinning av DNA-skärande gel, DNA-isolering och används för att stödja om DNA:t är rekombinant, plasmid, etc. Oavsett om plasmiden skärs eller inte, olika koncentrationer av agarosgel kan separeras från längden på 200 bp till 50 kb av DNA fragment.
2.3 Experimentella metoder
Tillverkning lim
Ta 1% koncentration som ett exempel: väg 1 g agaros, häll den i en 250 ml konisk kolv, tillsätt 100 ml 0,5×TBE elektroforesbuffert och blanda det väl, koka det i mikrovågsugn och sedan lufttorka den till cirka 60 ℃, tillsätt en lämplig mängd nukleinsyrafärgämne och skaka den väl och häll den sedan i en ren gelplatta som redan har förberetts, ta en kam med båda händerna för att sätt in i gellösning vertikalt och vänta på gel att vara kyls ner naturligt tills den har stelnat helt (25-30min).
Ta bort limframställningskammen
Överför försiktigt gelén till elektroforestanken (antingen med gelbrickan eller bara gelen), placera provbrunnssidan i den negativa polen och tillsätt 0,5× TBE elektroforesbuffert tills gelén är ca 1 mm under.
Tillägga prov
Lägg till 10× laddningsbuffert (laddning buffert) till DNA-proverna, blanda väl och tillsätt sedan långsamt provblandningen till subsammanslagen gel brunnar med en pipettpistol, tillsätt 5-10 μL prov per brunn (högst 40 μL). I allmänhet bör den första brunnen fyllas med DNA-markör, den andra med positiv kontroll (definierad DNA), och den tredje med negativ kontroll (reagens eller vatten), och ordningen på proverna bör registreras.
Elektrofores
Täck över elektroforestank, anslut ledningar, slå på strömmen och ställ in elektroforesspänningen, ström och tid parametrar. I allmänhet spänningen bör inte överstiga 5 v/cm (längden avser avståndet mellan positiva och negativa poler i elektroforestanken), och elektroforestiden är i allmänhet 15-30 min.
Slut på elektrofores
Ta bort de gel (utan gelbricka) och avbilda den under UV-bildsystemet för att få en tydlig elektroforetisk bild, redigera sedan den elektroforetiska bilden med bildredigeringsprogrammet och märk den med exempelinformation, datum och operatör.
2.4 Vanliga frågor och lösningar
| Problem | Resonera | Lösning |
| Målband saknas | Litet DNA tar slut på gel | Förkorta elektroforestiden, minska spänningen, öka gelkoncentrationen. |
| DNA-band med liknande molekylviktsstorlek är inte lätt att särskilja | Öka elektroforestiden för att matcha den optimala gelkoncentrationen. | |
| Målfragmentet är för stort för konventionell elektrofores. | Analyserad på pulsad gelelektrofores. | |
| No Purpose Clip | PCR-processen var felaktig och förstärkte inte målprodukten. | |
| Suddiga DNA-band | Inaktuell elektroforesbuffert | När elektroforesbuffert används många gånger kommer jonstyrkan att minska, PH-värdet stiger långsamt och spolningsförmågan kommer att försvagas, vilket påverkar elektroforeseffekten, så det rekommenderas att byta elektroforesbuffert ofta. |
| DNA-nedbrytning | Undvik nukleaskontamination. | |
| De använda elektroforesbetingelserna är inte lämpliga för elektrofores | elektroforesspänningen bör inte överstiga 20V/cm och temperaturen bör vara <30°C; temperaturen för elektrofores av stora DNA-strängar bör vara <15°C; kontrollera om den använda elektroforesbufferten har tillräcklig buffertkapacitet. | |
| Överdriven DNA-provtagning | Minska mängden DNA uppprovat i gelén. | |
| DNA-prover är för salta | Överskott av salt avlägsnades genom etanolfällning före elektrofores. | |
| proteinförorening | Fenolextraktion före elektrofores tar bort proteiner. | |
| Provkoncentrationen är för hög | Koncentrationen av det övre provet bör vara mindre än 500 ng/brunn, koncentrationen är för hög kommer att påverka hastigheten på elektrofores, löpning, vilket resulterar i dragning och suddighet. | |
| Svaga eller inga band | Otillräcklig provstorlek av DNA | Ökar mängden DNA-upptag |
| DNA-nedbrytning | Undviker nukleaskontamination av DNA | |
| Olämplig ljuskälla för nukleinsyrafärgämnen | Välj lämplig våglängdsljuskälla enligt instruktionerna för nukleinsyrafärgämnet. | |
| Band ej separerade | brist på tid | Öka elektroforestiden |
| Felaktig gelkoncentration | Koncentrationen av lim är för hög, vilket resulterar i för mycket motstånd mot separation. | |
| Koncentrationen av saltjoner i provet är för hög | Hög koncentration av saltjoner ökar elektroforetisk motståndskraft och förhindrar separation av band, t.ex. smälta prover som innehåller endonukleasbuffert. | |
| Ospecifika band | RNA-kontaminering | Omberedning av prover |
| Kontaminering mellan proverna | Byte av spetsen under fyllning; undvika spill av prover med volymer >40 μl. |
2.5 Polyakrylamidgelelektrofores
Polyakrylamidgeler bildas genom den kemiska reaktionen mellan akrylamidmonomer, kedjepolymerisationskatalysatorer N,N,N',N'-tetrametyletylendiamin (TEMED) och ammoniumpersulfat och tvärbindningsmedlet N,N'-metylenbisakrylamid. Akrylamidmonomeren polymeriserar i närvaro av en katalysator för att bilda lång kedjor, som är tvärbunden av ett tvärbindningsmedel för att bilda en gel, vars porstorlek bestäms av kedjelängden och graden av tvärbindning. Porstorleken bestäms av kedjelängden och graden av tvärbindning. Kedjelängden beror på koncentrationen av akrylamid och graden av tvärbindning av polymeren kan ändras genom att justera förhållandet mellan akrylamid och tvärbindningsmedel.
Polyakrylamidgelelektrofores kan användas för att separat prover baserade på skillnader i avgift, molekylstorlek och form av de elektroforerade proverna. Den kombinerar molekylär siktning och elektrostatisk och har en högre upplösningsförmåga än agarosgelelektrofores. DNA-fragment endast skiljer sig åt en nukleotid kan separeras.
Polyakrylamidgelelektrofores används för att analysera och framställa DNA-fragment som är mindre än 1 kb långa. Beroende på storleken på nukleinsyrafragmenten som ska isoleras, geler av olik kan förberedas.
De effektiva separationsintervallen för olika koncentrationer av akrylamid och DNA visas i tabellen nedan:
| Konc. (%) | Effektivt separationsintervall (bp) |
| 3.5 | 100 till 2000 |
| 5 | 80 till 500 |
| 8 | 60 till 400 |
| 12 | 40 till 200 |
| 15 | 25 till 150 |
| 20 | 10 till 100 |
2.4 Riktlinjer för val av relaterade produkter
Konventionell PCR | ||||
| Specifikation | 10167ES | 10102ES | 10103ES | 10108ES |
| Förstärkningslängd | ≤10-15 kb | ≤5 kb | ≤5 kb | ≤4 kb |
| Förlängningstid | 1-10 sek/kb | 30 sek/kb | 30 sek/kb | 30 sek/kb |
| Produktens slutstruktur | 3'-dA | 3'-dA | 3'-dA | 3'-dA |
| Glödgningstemperatur | 60 ℃ | Tm-(2~5)℃ | Tm-(2~5)℃ | Tm-(2~5)℃ |
| GC-kompatibilitetsområde | 30-70 % | 40-70 % | 40-70 % | 30-70 % |
| 5'-3' exonukleasaktivitet | Presentera | Presentera | Presentera | Presentera |
| Koloni PCR | Lämplig | Lämplig | Lämplig | Lämplig |
| Genidentifiering | Lämplig | Lämplig | Lämplig | Lämplig |
| Multiplex PCR | Inte lämplig | Inte lämplig | Inte lämplig | 3-4 plex PCR |
| Elektroforesindikator | Lila-röd | Blå | Färglös | Blå |
| Hot Start | Hot Start | Inte Hot Start | Inte Hot Start | Hot Start |
| Förblandning/Kit | Förblandning | Förblandning | Förblandning | Förblandning |
Direkt PCR | ||||
| Specifikation | 10185ES | 10188ES | 10187ES | |
| Produkttyp | Mus direktförstärkning | Direkt blodförstärkning | Plant direktförstärkning | |
| Förstärkningslängd | ≤1 kb | ≤8 kb | ≤1 kb | |
| Förlängningstid | 30 s/kb | 3-5 s/kb för ≤2 kb, | 60 s/kb | |
| 10 s/kb för ≤8 kb | ||||
| Provlyseringstid | 15 min | 0-3 min | 0-10 min | |
| Produktens slutstruktur | Trubbig ände | Trubbig ände | Trubbig ände | |
| Glödgningstemperatur | Tm-(2~5)℃ | Tm-(1~2)℃ | Tm-(2~5)℃ | |
| GC-kompatibilitetsområde | 30-70 % | 30-75 % | 40-65 % | |
| 5'-3' exonukleasaktivitet | √ | √ | √ | |
| Genidentifiering | √ | √ | √ | |
| Multiplex PCR | 3-4 plex | |||
| Direkt provförstärkning | √ | √ | √ | |
| Elektroforesindikator | Blå | Färglös | Blå | |
| Hot Start | √ | √ | √ | |
| Förblandning/Kit | Kit (med mix) | Kit (med mix + buffert) | Kit (med mix) | |
| Lämpliga organismer | Mus, råtta | Människan, mus, get, kyckling, gris, etc. | Ris, majs, tobak, raps, vete, sojabönor, etc. | |
| Lämplig vävnad/material | Svans, öra, tå (med muskler) och andra organ | Färskt blod med EDTA, heparin, citrat, etc., kylt (fryst) blod, kommersiella torra blodfläckar | Unga blad, gamla blad, plantor, unga stjälkar | |
| Provinmatning | Vävnad: 5-10 mg; Svans: 1-5 mm | Helblod: 0,5%-20%, torr blodfläck: 1 mm² | Blad: 1-10 mm, Frö: 1-3 mm | |
High-Fidelity PCR | ||||
| Specifikation | 10164ES | 10153ES | 10154ES | |
| Förstärkningslängd | ≤10 kb gDNA, ≤10 kb cDNA, ≤16 kb λDNA | ≤10 kb gDNA, ≤10 kb cDNA, ≤13 kb λDNA | ≤10 kb gDNA, ≤10 kb cDNA, ≤13 kb λDNA | |
| Förlängningstid | 5 sek/kb | 30 sek/kb | 30 sek/kb | |
| Trohet (Taq) | 83× | 83× | 83× | |
| Produktens slutstruktur | Trubbig ände | Trubbig ände | Trubbig ände | |
| Glödgningstemperatur | 60℃ | 68℃ | 68℃ | |
| GC-kompatibilitetsområde | 20-80 % | 30–60 % | 30–60 % | |
| 5'-3' exonukleasaktivitet | Frånvarande | Frånvarande | Frånvarande | |
| Elektroforesindikator | Blå | Färglös | Blå | |
| Enkelt enzym/förblandning | Förblandning | Enkelt enzym | Förblandning | |
| Tolerans | / | / | Blod, musvävnadslysat | |
Nukleinsyraelektrofores | ||||
| Produktkategori | Katt NR. | Produktnamn | Ansökan | |
| Agaros | 10208ES | Agaros | Rutinmässig nukleinsyraelektrofores | |
| 10221ES | Högsiktande agaros (PCR-kvalitet) | Lämplig för att separera DNA-fragment på 20 bp-800 bp, jämförbar med polyakrylamidgel | ||
| 10226ES | Agarose tabletter (0.5 g/tablett) | Bekvämt för rutinmässiga agarosapplikationer | ||
| Nukleinsyrafärgämne | 10202ES | ÅrRöd nukleinsyragelfläck (10 000× i vatten) | Vattenlöslig, med spektrala egenskaper liknande EB, exciterbar vid 300 nm UV-ljus | |
| DNA-markör | 10510ES | GoldBand 1 kb DNA-stege | 250-12000 bp (13 band) | |
| 10515ES | GoldBand 50 bp DNA-stege | 50-1000 bp (14 band) | ||
| 10507ES | GoldBand 100bp DNA-stege | 100-1500 bp (12 band) | ||
| 10516ES | GoldBand 100 bp plus DNA-stege | 100-3000 bp (14 band) | ||
| 10517ES | GoldBand 200 bp DNA-stege | 200-5000 bp (12 band) | ||
| 10518ES | GoldBand 500 bp DNA-stege | 500-5000 bp (8 band) | ||
| 10501ES | GoldBand DL2000 DNA-markör | 100-2000 bp (6 band) | ||
| 10504ES | GoldBand DL5000 DNA-markör | 100-5000 bp (9 band) | ||
| 10505ES | GoldBand DL10 000 DNA-markör | 100-10000 bp (10 band) | ||
| 10511ES | GoldBand fullskalig DNA-stege | 100-12000 bp (20 band) | ||
| 10512ES | GoldBand DL15000 DNA-markör | 250-15000 bp (7 band) |
2.5 Publikationer som använder nukleinsyraelektroforesprodukter (Partial)
[1] Luo J, Yang Q, Zhang X, et al. TFPI är en kolonkryptreceptor för TcdB från hypervirulent clade 2 C. dificile. Cell. 2022;185(6):980-994. e15. doi:10.1016/j.cell.2022.02.010 (IF:41.584)
[2] Huang N, Chen H, Gong H, et al. SeHed, ett nytt genuttryckssystem med stressframkallad väteperox eliminerande egenskaper och anti-aging effekt. signaltransduktion och målinriktad terapi. 2022, 7, 235. doi: 10.1038/s41392-022-01047-2. (OM: 38,1)
[3] Zhang C, Zhou B, Gu F, et al. Mikropeptid PACMP-hämning framkallar syntetiska dödliga effekter genom att minska CtIP och poly(ADP-ribosyl)-ation. mol Cell. 2022;82(7):1297-1312.e8. doi:10.1016/j.molcel.2022.01.020 (IF:17 970)
[4] Zhu M, DaiX. Tillväxtundertryckning av förändrade (p)ppGpp-nivåer är resultatet av icke-optimala resursfördelning i Escherichia coli. Nucleic Acids Res. 2019;47(9):4684-4693. doi:10.1093/nar/gkz211 (IF:11.147)
[5] Rizwan HM, Zhimin L, HarsonowatiW, et al. Identifiering av svamppatogener för kontroll efter skörd Passionsfrukt (Passiflora edulis) sönderfall och multiomics jämförande väganalys avslöjar Lila är mer Resista nt till patogener än en gul sort. j Svampar (Basel). 2021;7(10):879. Publicerad 2021 19 okt. doi:10.3390/jof 7100879 (IF:5.816)
[6] LiT, Zhou B, Luo Z, et al. Strukturell karaktärisering av en Neutralisera nanokroppar med bred aktivitet mot SARS-CoV-2-varianter. Främre Microbiol. 2022;13:875840. Publicerad 2022 juni 2. doi:10.3389/fmicb.2022.875840 (IF:5.640)
[7] Wang T, Ren D, Guo H, et al. CgSCD1 är avgörande för melaninbiosyntes och patogenicitet av Colletotrichum gloeosporioides. patogener. 2020;9(2):141. publicerad 2020 februari 20. doi:10.3390/pathogens9020141(IF:3.018) :141. Publicerad 2020 20 februari. doi:10.3390/pathogens9020141 (IF:3.018)
[8] Lv Y, LiX, Zhang H, Zou F, Shen B. CircRNA-uttrycksprofiler i deltametrinkänsliga och -resistenta
pipiens pallens (Diptera: Culicidae). Comp. Biochem Physiol B Biochem Mol Biol. 2022;261:110750. doi:10.1016 /j.cbpb.2022.110750 (IF:2.231)
[9] Hu M, DaiX. Tillväxtundertryckning genom förändrad (p) ppGpp nivåer resultat från icke-optimal resursallokering i Escherichia coli[J]. Nukleinsyraforskning, 2019, 47(9): 4684-4693.(IF11.6)
[10] Guo L, Yang W, Huang Q, et al. Selenocystein-specifik masspektrometri avslöjar vävnadsdistinkta selenoproteom och kandidatselenoproteiner [J ]. Cellkemikalie biologi, 2018, 25(11): 1380-1388. e4. (IF6.762)
2.6 Publikationer som använder PCR-produkter (delvis)
[1] Wang Y, Fu Z, LiX, et al. Cytoplasmatisk DNA-avkänning av KU komplex i åldrig CD4+ T cell potentierar T cell aktivera tion och åldringsrelaterad autoimmun inflammation. Immunitet. 2021;54(4):632-647.e9. doi:10.1016/j.immu
ni.2021.02.003(IF:31.745)
[2] Yang X, Gao F, Zhang W, et al. "Stjärna" miR-34a och CXCR4 antagonist baserad nanoplex för binäry kooperativ migrationsbehandling mott metastaserande bröst cancer. J Kontrollera Släppa. 2020;326:615-627. doi:10.1016/j. jconrel.2020.07.029(IF:7.727)
[3] QiaoY, Du J, Ge R, et al. A Prov och Upptäckt Mikronål Lappa för Psoriasis MicroRNA Biomarkör
Analys i Interstitial Vätska. Anal Chem. 2022;94(14):5538-5545. doi:10.1021/acs.analchem.1c04401(IF:6.986)
[4] Lin Q,Ye X, Huang Z, et al. Grafen Oxidbaserad Undertryckande av Ospecificitet i Loop-medierad Isother felförstärkning Aktiverar det känsliga Upptäckt av cyklooxygenas-2 mRNA i Kolorektal Cancer. Anal Chem. 2019;91(24):15694-15702. doi:10.1021/acs.analchem.9b03861(IF:6.350)
[5] Lin Q, Huang Z,Ye X, et al. Labb i a rör: Isolering, extraktion, och ärannat förstärkning upptäckt av exosomal lång icke-kodning RNA av magsäcken cancer. Talanta. 2021;225:122090.
doi:10.1016/j.tta.2021.122090(IF:6.057)
[6] Liu C, Zou G, et al. 5-formyluracil som a Mångfunktionell Byggnad Blockera i Biosensor Mönster[J]. Angew Chem Int Ed Engl. 26 juli 2018;57(31):9689-9693.（IF 11 992）
[7] Wang M, Zhang S, Zheng G, et al. Gain-of-Function Mutatjon av kort14 Leder till Spontan Psoriasis-liknande Hud Inflammation genom Förbättrad Keratinocyt Svar på IL-17A. Immunitet. 2018;49(1):66-79.e5.
doi:10.1016/j.immuni.2018.05.012(IF:19.734)
[8] Zhang Y, Ding H, Wang X, et al. MK2 främjar Tfcp2l1 degradering via p-TrCP ubiquitin ligase till reglera mus embryonal stam cellsjälvförnyelse. Cell Rep. 2021;37(5):109949. doi:10.1016/j.celrep.2021,109949 (IF:9,423)
[9] Lin Q,Ye X, Yang B, et al. Realtid fluorescens loop-förmedlad isotermisk förstärkandetion analysera för snabb och känslig upptäckt av streptokocker gallolyticus subsp. gallolyticus förknippas med kolorektal cancer[J].
Analytisk och bioanalytisk kemi, 2019, 411(26): 6877-6887.（IF6.35）
[10] Lin Q,Ye X, Huang Z, et al. Grafen Oxidbaserad Undertryckande av Ospecificitet i Loop-medierad Isother felförstärkning Aktiverar Sensitive Upptäckt av cyklooxygenas-2 mRNA i Colorectal Cancer[J]. Analyti cal kemi, 2019.（IF6.35）
Citering:
[1] Loeb LA, Jr R. DNA-polymeraser och mänsklig sjukdom[J]. Naturrecensioner Genetik.