Beskrivning
Detta kit kan direkt och snabbt utföra PCR-förstärkning av musvävnad (såsom mussvans, musöra, mustå, muskel, etc.) och har stark provkompatibilitet. Utrustat med en kraftfull lyseringsbuffert kan detta kit snabbt lysera prover och frigöra genomiskt DNA. Lysatet kan tillsättas direkt till PCR-reaktionssystemet utan rening, och operationen är bekväm. Dessutom kräver detta kit låg provinmatning, och 5 mg musvävnad eller 1-5 mm mussvans kan användas för experiment.
2× Mouse Direct PCR-blandningen som tillhandahålls av detta kit är en varmstartad PCR-reaktionslösning med en 2-faldig koncentration. Den innehåller alla komponenter som används för PCR-amplifiering förutom mallen och primers, vilket avsevärt förenklar operationsprocessen och minskar risken för kontaminering. Kitet kan användas för transgenidentifiering, musgenotypning, etc.
Drag
- Mindre prov krävs: 5 mg musvävnad eller 1-5 mm mussvans
- Bekväm mallberedning: inget behov av att mala, inget behov av att förfina och rena DNA, högre flöde, spara tid och pengar
- Optimerat PCR-system: med högre specificitet och starkare tolerans för PCR-reaktionshämmare
Ansökningar
- Identifiering av transgena möss
- Genotypning av möss
- Mus gen knockout analys
Specifikationer
| Produktspecifikation | Utrustning |
| Varmstart | Inbyggd Hot Start |
| Villkor för transport | Isförpackningar |
| Produkttyp | Direkt PCR-kit |
| Tillämpas till (ansökan) | Mussvans, musöra, råttå, inälvor, hud, etc. |
Komponenter
| Komponentnr. | Namn | 10185ES50 | 10185ES70 |
| 10185-A | Buffert ML | 5×1 ml | 20×1 ml |
| 10185-B | Buffert MT | 0,6 ml | 2×1,25 ml |
| 10185-C | 2× Mus Direct PCR Mix | 500 μL | 2×1 ml |
- a) Buffer ML är en lyseringsbuffert som innehåller starka proteindenaturanter, använd handskar.
- b) Buffert MT är en stoppbuffert som används för att stoppa lyseringsfunktionen för buffert ML.
- c) 2× Mouse Direct PCR Mix: Innehåller hot-start Taq DNA polymeras, dNTP mix, MgCl2, reaktionsbuffert, PCR reaktionsförstärkare, optimerare, stabilisator, elektrofores indikator färgämne, etc.
Lagring
- Komponent A: Produkten ska förvaras vid 2°C~8°C i ett år. Undvik korskontaminering vid flera användningar under lång tid.
- Komponent B/C: Produkten bör förvaras kl-25℃ ~ -15℃ för ett år. Undvik upprepad frys-upptining.
Siffror
1. Målgen (inom 1 kb) amplifieringsresultat
Bild 1.Lämplig för målgenamplifiering inom 1 kb.
2. Förlängningshastighetsdemonstrationen
Figur 2. 500bp-genen, förlängningshastigheten kan vara så snabb som 1 sek/kb.
Citerad från "TFPI är en kolonkryptreceptor för TcdB från hypervirulent clade 2 C. difficile. Cell. 2022 Mar 17;185(6):980-994.e15. doi: 10.1016/j.cell.2022.02.010".
[1] Luo J, Yang Q, Zhang X, et al. TFPI är en kolonkryptreceptor för TcdB från hypervirulent clade 2 C. svårighet. Cell. 2022;185(6):980-994.e15. doi:10.1016/j.cell.2022.02.010(IF:41.584)
[2] Zhao J, Chen J, Li YY, Xia LL, Wu YG. Brutons tyrosinkinas reglerar makrofaginducerad inflammation i den diabetiska njuren via NLRP3-inflammasomaktivering. Int J Mol Med. 2021;48(3):177. doi:10.3892/ijmm.2021.5010(IF:4.101)
| Vanligt problem | Möjlig anledning | Lösning |
| Det fanns inga band i den positiva kontrollen och proverna som skulle testas. | PCR-reaktionssystemet eller reaktionsbetingelserna var inte lämpliga. | Använd gradient PCR för att utforska de optimala reaktionsförhållandena för PCR. |
| Felaktig förvaring av PCR-reagens förlorar aktivitet. | 2× Mouse Direct PCR Mix ska förvaras vid -20°C och undvik upprepad frysning och upptining under användning. Om den används ofta kan den förvaras vid 4°C under en kort stund. | |
| Grundläggande designproblem. | Prova att göra om primers för att kontrollera. | |
| Den positiva kontrollen har ett band av intresse, och provet som ska testas har inget band eller ett svagt band. | Felaktig förvaring eller långvarig förvaring kan orsaka förlust av reagensaktivitet. | Använd färska reagenser. |
| Tillsätt vävnadslysat i överskott. | Öka reaktionssystemet eller minska mängden lysat. | |
| Provlysblandningen har lagrats felaktigt eller lagrats för länge, och DNA-genomet har brutits ned. | Lysatblandningen kan förvaras vid 4°C i 2-3 dagar.Försök att använda en nyberedd lysatblandning för PCR. | |
| Mängden mall som lagts till är inte lämplig. | Mängden tillsatt mall optimerades inom intervallet 1-10 % av reaktionssystemet. | |
| Otillräckligt antal PCR-cykler. | Öka antalet PCR-cykler, helst 35-40 cykler. På grund av mallens komplexitet bör PCR-reaktioner utföras med 5-10 fler cykler än med renad DNA-mall. | |
| Ospecifik amplifiering | PCR-glödgningstemperatur för låg, cykelnummer, primerkoncentration eller mallkoncentration för hög. | Öka PCR-annealingstemperaturen och minska PCR-cykelantal, primerkoncentration eller mallkoncentration. |
| PCR-primerfelparningar. | Redesign PCR-primers. | |
| Temperaturen är för hög vid beredning av PCR-reaktionssystemet eller tiden är för lång efter att beredningen är avslutad. | Framställningen av PCR-reaktionssystemet utförs vid låg temperatur, och PCR-amplifieringsreaktionen utförs så snart som möjligt efter att framställningen är avslutad. | |
| Målbandet visas i negativ kontroll | Kontaminering av driftverktyg eller reagenser. | Alla reagenser eller utrustning i experimentet bör autoklaveras. Var försiktig och försiktig vid hantering för att förhindra att målsekvensen sugs in i provpistolen eller spills ut ur centrifugröret. |
| Korskontaminering mellan prover. | Varje provtagare används endast för ett prov; eller efter att ha tagit ett prov, doppa kanten av provtagaren i 2 % natriumhypokloritlösning, skölj upprepade gånger och torka sedan återstoden med en ren pappershandduk. |
Betalning och säkerhet
Din betalningsinformation behandlas säkert. Vi lagrar inte kreditkortsuppgifter och har inte heller tillgång till din kreditkortsinformation.
Förfrågan
Du kanske också gillar
Vanliga frågor
Produkten är endast avsedd för forskningsändamål och är inte avsedd för terapeutisk eller diagnostisk användning hos människor eller djur. Produkter och innehåll skyddas av patent, varumärken och upphovsrätt som ägs av Yeasen Biotechnology. Varumärkessymboler anger ursprungsland, inte nödvändigtvis registrering i alla regioner.
Vissa applikationer kan kräva ytterligare immateriella rättigheter från tredje part.
Yeasen är dedikerad till etisk vetenskap, och anser att vår forskning bör behandla kritiska frågor samtidigt som den säkerställer säkerhet och etiska standarder.