Beskrivning
Plant tissue direct PCR kit är ett kit som direkt kan förstärka olika typer av växtblad genom PCR, med bred anpassningsförmåga och stark stabilitet. Satsen använder ett unikt lyseringsbuffertsystem, som snabbt kan lysera en mängd olika växtprover och frigöra genomiskt DNA. Det frigjorda genomiska DNA:t kan användas direkt som en mall utan att ta bort protein, RNA eller sekundära metaboliter i PCR-reaktionen. Dessutom kräver kitet en liten mängd prov, så lite som 1 mm plantblad kan användas för experiment.
2×Plant Master Mix som tillhandahålls i detta kit har stark amplifieringskompatibilitet och kan direkt använda lysatet från provet som en mall för effektiv och specifik amplifiering. Detta reagens är en 2-faldigt koncentrerad PCR-reaktionsblandning, som innehåller alla komponenter som används för PCR-amplifiering förutom mallen och primers, vilket avsevärt förenklar driftsprocessen och minskar risken för kontaminering.
Satsen kan användas för identifiering av transgena växter, växtgenotypning, etc.
Frakt
Produkterna levereras med ispåsar.
Lagring
1. Reagens 10187-A [buffert P1] kan lagras vid 4 ℃ i 1 år.
2. Reagens 10187-B [buffert P2], används för att neutralisera lysat, vilket är fördelaktigt för att lagra provet under en längre tid och kan lagras vid 4 ℃ i 1 år.
3. Reagens 10187-C [2× Plant Master Mix] kan lagras vid -20 ℃ i 1 år. Undvik upprepad frysning och upptining.
Varningar
1. När man gör bladexperiment rekommenderas att man använder nyinsamlad bladvävnad. Om det är en långtidsfrusen vävnad måste den förvaras vid -80°C. Upprepad frysning och upptining bör undvikas så mycket som möjligt för att undvika mallnedbrytning och påverka PCR-effektiviteten. Bladvävnaden är lämplig för unga blad. Om det är ett moget blad, undvik att använda vävnaden i bladets huvudven.
2. Det rekommenderas att amplifiera fragmentet inom 1 kb i längd för bästa amplifieringseffektivitet.
3. Vid provtagning, använd en hålslagare eller kniv för att ta ett prov av lämplig storlek. När proverna är olika måste hålstansen eller kniven rengöras varje gång innan provet bearbetas.
4. För bladvävnad rekommenderas att ta 1-10 mm löv, för liten bladlängd leder till lågt PCR-förstärkningsutbyte, för mycket kommer att hämma PCR-reaktionen, använd metoden för termisk sprickning, mäskning med pipettspets och krossning med en kvarn för att behandla växtblad. Efter behandling måste den skakas och centrifugeras. Var noga med att ta supernatanten för testning. Utfällning kommer att allvarligt hämma PCR-reaktionen.
5. För din säkerhet och hälsa, vänligen bär laboratorierockar och engångshandskar vid användning.
6. Denna produkt är ENDAST för forskningsanvändning!
| Vanliga problem | Möjliga orsaker | Lösningar |
| Det fanns inga band i den positiva kontrollen och proverna som skulle testas. | PCR-reaktionssystemet eller reaktionsbetingelserna var inte lämpliga. | Använd gradient PCR för att utforska de optimala reaktionsförhållandena för PCR. |
| Felaktig förvaring av PCR-reagenser inaktiverar dem. | 2×PCR Mix ska förvaras vid -20℃, undvik upprepad frysning och upptining vid användning. Om den används ofta kan den förvaras vid 4°C under en kort stund. | |
| Grundläggande designproblem. | Prova att göra om primers för att kontrollera. | |
| Den positiva kontrollen har ett band av intresse, och provet som ska testas har inget band eller ett svagt band. | Förhållandet mellan lysbuffert och neutraliseringsbuffert är olämpligt, och lysblandningen kommer att påverka pH-värdet i PCR-systemet. | Under normala förhållanden bör pH-värdet för den neutraliserade lysblandningen vara runt 7-8 (lysprodukten och buffert P2 bör neutraliseras i strikt överensstämmelse med förhållandet 5:1). |
| Provlysblandningen har lagrats felaktigt eller för länge och DNA-genomet har brutits ned. | Lysatblandningen kan förvaras vid 4°C i 5 dagar, försök att använda en nyberedd lysatblandning för PCR. | |
| Mängden mall som lagts till är inte lämplig. | Optimera mängden tillsatt mall inom intervallet <5% av reaktionssystemet. | |
| Otillräckligt antal PCR-cykler. | Öka antalet PCR-cykler på lämpligt sätt, helst 35-40 cykler. På grund av mallens komplexitet är det i allmänhet bättre att använda 5-10 fler cykler av PCR-reaktion än att använda renad DNA-mall. | |
| Ospecifik amplifiering | PCR-glödgningstemperatur för låg, cykelnummer, primerkoncentration eller mallkoncentration för hög. | Öka PCR-annealingstemperaturen och minska PCR-cykelantal, primerkoncentration eller mallkoncentration. |
| PCR-primerfelpassning. | Redesign PCR-primers. | |
| Temperaturen är för hög vid beredning av PCR-reaktionssystemet eller så är placeringstiden för lång efter beredningen. | Framställningen av PCR-reaktionssystemet utförs vid låg temperatur, och PCR-amplifieringsreaktionen utförs så snart som möjligt efter att framställningen är avslutad. | |
| Målbandet visas i negativ kontroll | Kontaminering av driftverktyg eller reagenser. | Alla reagenser eller utrustning i experimentet bör autoklaveras.Var försiktig och försiktig vid hantering för att förhindra att målsekvensen sugs in i provpistolen eller spills ut ur centrifugröret. |
| Korskontaminering mellan prover. | Varje provtagare används endast för ett prov; eller efter att ha tagit ett prov, doppa provtagningsbladet i 2 % natriumhypokloritlösning, skölj upprepade gånger och torka sedan återstoden med en ren pappershandduk. |
Betalning och säkerhet
Din betalningsinformation behandlas säkert. Vi lagrar inte kreditkortsuppgifter och har inte heller tillgång till din kreditkortsinformation.
Förfrågan
Du kanske också gillar
Vanliga frågor
Produkten är endast avsedd för forskningsändamål och är inte avsedd för terapeutisk eller diagnostisk användning hos människor eller djur. Produkter och innehåll skyddas av patent, varumärken och upphovsrätt som ägs av Yeasen Biotechnology. Varumärkessymboler anger ursprungsland, inte nödvändigtvis registrering i alla regioner.
Vissa applikationer kan kräva ytterligare immateriella rättigheter från tredje part.
Yeasen är dedikerad till etisk vetenskap, och anser att vår forskning bör behandla kritiska frågor samtidigt som den säkerställer säkerhet och etiska standarder.