Beskrivning
Hieff® Blood Advanced Direct PCR Kit är ett kit som direkt kan amplifiera helblodsprover utan DNA-rening eller provförbehandling, och är kompatibelt med färskt blod, kylt (fryst) blod och kommersiella torkade blodfläckar som innehåller konventionella antikoagulantia som EDTA, heparin, citrat, etc. Kittet innehåller en kombination av genetiskt modifierad DNA-resistens och hög fideltorisk resistens mot PCR. 2× Hieff® Blood Advanced PCR-buffert med stark förlängningsfaktor, amplifieringsförstärkningsfaktor och optimerat buffertsystem för att effektivt amplifiera 8 kb av genomiska fragment under snabba förlängningsförhållanden och ställa in 3-5 sek/kb förlängningstid för fragment under 2 kb, vilket avsevärt förkortar tiden för blodprovsidentifiering och testning.
Specifikationer
| Trohet (mot Taq) | 1 × |
| Hot Start | Ja |
| Hänga över | 3'-A |
| Polymeras | Taq DNA-polymeras (kat: 10726) |
Komponenter
| Inga. | Namn | 10188ES20 | 10188ES60 |
| 10188-A | 2× Hieff® Blood Advanced PCR-buffert | 500 μL | 2,5 ml |
| 10188-B | Hieff® Avancerad High-Fidelity DNA-polymerasblandning | 20 μL | 100 μL |
| 10188-C | Positiv kontroll primermix (10 μM vardera) | 100 μL | 200 μL |
| 10188-D | 10× DNA-laddningsbuffert | 1 ml | 1 ml |
Instruktioner
Rekommenderade PCR-reaktionssystem.
| Komponenter | Volym (μL) |
| ddH2O | till 50 μL |
| 2× Hieff® Blood Advanced PCR-buffert | 25 μL |
| Forward Primer (10 μM) | 2 μL |
| Reverse Primer (10 μM) | 2 μL |
| Hieff® Avancerad High-Fidelity DNA-polymerasblandning | 1 μL |
| Blodprov | X |
2. En slutkoncentration på 0,4 μM per primer rekommenderas, för hög kommer att resultera i ospecifik amplifiering.
3. Den optimala koncentrationen av helblodsmallen sträcker sig från 0,5 % till 20 %, och den rekommenderade användningen är 10 % som första försöksvillkor, det vill säga 5 μL helblod tillsätts som en mall till reaktionssystemet på 50 μL, varvid man var noga med att undvika aspirerande blodproppar. För torkade blodfläckar lagrade på Whatman®-filterkort kan cirka 1 mm2 runda pappersbitar med blodfläckar tas och amplifieras direkt in i PCR-reaktionen utan förbehandling.
Reaktionsprogram
| Cykel steg | Temp. | Tid | Cyklar |
| Initial denaturering | 95 ℃ | 5 min | 1 |
| Denaturering | 95 ℃ | 15 sek | 30-35 |
| Glödgning | 60 ℃ | 15 sek | |
| Förlängning | 72℃ | 3-10 sek/kb | |
| Slutlig förlängning | 72℃ | 5 min | 1 |
Glödgningstemperaturen är ett generiskt Tm-värde eller 1-2°C under primerns Tm-värde. Om amplifieringsprodukten är mindre specifik kan en glödgningstemperaturgradient upprättas för att hitta optimala glödgningsförhållanden.
Förlängningstid på 10 sek/kb kan amplifiera de flesta av målfragmenten under 8 kb, och 3-5 sek/kb kan amplifiera de flesta fragment under 2 kb. Om förstärkningseffektiviteten är låg kan tiden på lämpligt sätt förlängas till 20-30 sek/kb och bör inte överstiga 60 sek/kb.
Frakt och förvaring
Produkterna ska förvaras vid -15℃ ~ -25℃ för 1 år
Siffror
Anteckningar
1. Det rekommenderas att blodmallen används som 10 % av den totala reaktionsvolymen, det vill säga att 5 μL helblod tillsätts till 50 μL reaktionssystemet som mall, varvid man var noga med att undvika aspirerande blodproppar.
2. Förlängningstid på 10 sek/kb kan amplifiera de flesta av målfragmenten under 8 KB, och 3-5 sek/kb kan amplifiera de flesta av fragmenten under 2 KB. Om förstärkningseffektiviteten är låg kan tiden förlängas till 30 sek/kb.
3. Efter PCR-reaktionen rekommenderas det att centrifugera reaktionsprodukten vid 4000 rpm (1000× g) i 1-3 minuter för att fälla ut blodcellsfragment och ta supernatanten för analys nedströms.
4. Denna produkt kan inte användas direkt för medicinsk diagnos.
5. För din säkerhet och hälsa, vänligen bär en labbrock och använd engångshandskar.
Betalning och säkerhet
Din betalningsinformation behandlas säkert. Vi lagrar inte kreditkortsuppgifter och har inte heller tillgång till din kreditkortsinformation.
Förfrågan
Du kanske också gillar
Vanliga frågor
Produkten är endast avsedd för forskningsändamål och är inte avsedd för terapeutisk eller diagnostisk användning hos människor eller djur. Produkter och innehåll skyddas av patent, varumärken och upphovsrätt som ägs av Yeasen Biotechnology. Varumärkessymboler anger ursprungsland, inte nödvändigtvis registrering i alla regioner.
Vissa applikationer kan kräva ytterligare immateriella rättigheter från tredje part.
Yeasen är dedikerad till etisk vetenskap, och anser att vår forskning bör behandla kritiska frågor samtidigt som den säkerställer säkerhet och etiska standarder.