Nukleinsyrakvantifiering, som ett av de mest grundläggande experimenten inom molekylärbiologi, påverkar direkt resultatet av nedströmsexperiment. Noggrannheten i nukleinsyrakvantifieringen är avgörande. För närvarande finns det två huvudmetoder för NGS-bibliotekskvantifiering, ultraviolett absorptionsmetoden och den fluorescerande färgmetoden.

Den ultravioletta absorptionsmetoden använder en spektrofotometer för att mäta absorbansen vid 260 nm för DNA och RNA för kvantifiering. Den uppskattar också renheten hos nukleinsyror genom att beräkna OD260/OD280-förhållandet. De detekterade värdena är dock mycket känsliga för interferens från andra föroreningar såsom fria nukleotider, salter och organiska föreningar.

Qubit fluorometrisk kvantifiering använder fluorescerande färgämnen som specifikt binder till dubbelsträngat DNA, enkelsträngat DNA, RNA eller proteiner. Vid excitation av en ljuskälla med specifik våglängd avger färgämnena fluorescens, som inte påverkas av andra föroreningsmolekyler som kan finnas i provet. Fluorescensintensiteten är proportionell mot koncentrationen av målmolekylerna i provet.

Tabell 1. Jämförelse av vanliga nukleinsyrakvantifieringsmetoder

Mål	UV Abs (Nanodrop)	Qubit DNA HS	Qubit DNA BR	Qubit RNA	Qubit ssDNA
Typ av nukleinsyra	DNA, RNA	dsDNA	dsDNA	RNA	ssDNA, oligo
Provkoncentration（ng/μL）	2 ng/μL-15 μg/μL	10 pg/µL-100 ng/µL	0,1 ng/µL-1000 ng/µL	250 pg/ul-1000 ng/ul	50 pg/μL-200 ng/μL
Fördel	Högre kvantifieringsgräns	Bra specificitet	Brett utbud av kvantifiering	Mycket selektiv för RNA	Väl tolererad
Begränsningar	Dålig specificitet	Skydda från ljus under användning	Skydda från ljus under användning	Skydda från ljus under användning	Dålig specificitet och binder även dsDNA

UV-absorbans och Qubit fluorometrisk kvantifiering har var och en sina fördelar och kan komplettera varandra. För preliminär kvantifiering av rutinmässiga nukleinsyraprover för att bestämma koncentration, renhet och närvaron av föroreningar, kan absorbanskvantifieringsmetod väljas. Qubit-kvantifiering är mer lämplig för lågkoncentrationsvärda prover eller exakt kvantifiering som krävs för nedströmsexperiment, såsom nästa generations sekvensering och kvantitativ PCR i realtid.

Yeasen har lanserat flera Qubit-kvantifieringsprodukter: dsDNA HS Assay Kit för Qubit^® (Katt#12640), Klar att använda: 1× dsDNA HS Assay Kit för Qubit^® (Katt#12642), ssDNA Assay Kit för Qubit^® (Cat#12645) och dsDNA BR Assay Kit (Cat#12643), som har fått mycket beröm sedan lanseringen.

Lösning 1 dsDNA HS kvantifiering med hög känslighet

Färdig att använda dsDNA kvantifieringspremix—1× dsDNA HS Assay Kit för Qubit^®

^{Enkel användning: Färdig att använda förblandning, inget behov av förblandning;}

^{Hög känslighet: Detekterbar koncentration så låg som 50 pg/μL;}

^{Bra stabilitet: Fluorescenssignalen varar i 3 timmar, och lagring i rumstemperatur i 20 dagar påverkar inte kvantifieringens noggrannhet;}

^{A.Superb stabilitet: Lagring i rumstemperatur under 2 veckor bibehåller fortfarande stabiliteten (det uppmätta värdet avviker från det teoretiska värdet med mindre än 10%).}

Tabell 2. Stabilitetstest av olika prover vid 4°C och rumstemperatur jämfört med konkurrenter

Kvantitativa reagenser	Bestämd koncentration av λDNA（ng/μL）
	0d		1d		3d	7d			10d		14d
T* 4℃	0,51		0,496		0,524	0,534			0,495		0,499
Yeasen 4℃	0,51		0,508		0,513	0,475			0,48		0,495
Yeasen rumstemperatur lagring	0,51		0,517		0,506	0,486			0,506		0,523
Kvantitativa reagenser	Bestämd koncentration av kalvs gDNA（ng/μL）
	0d	1d		3d			7d	10d		14d
T* 4℃	55,3	53,5		55,40			57,9	55,8		58
Yeasen 4℃	59,4	55,4		57,8			56,1	56,3		59,8
Yeasen rumstemperatur lagring	59	55,7		61,3			58	58,7		56,1

B.Hög känslighet, bra batch-till-batch-stabilitet

Tabell 3.Stabilitetstest av olika batcher

Batch	Prov	L*			Yeasen			fel
		koncentration1（ng/μL）	koncentration2（ng/μL）	AVG（ng/μL）	koncentration1（ng/μL）	koncentration2（ng/μL）	AVG（ng/μL）
D9801060	λDNA	0,3160	0,3250	0,3205	0,320	0,320	0,320	0,16 %
D8801050		0,3310	0,3320	0,3315	0,319	0,306	0,3125	5,73 %
D7813110		0,345	0,358	0,352	0,334	0,329	0,332	-6,03 %

Lösning 2 dsDNA BR Kvantifiering av brett spektrum

DsDNA-kvantifiering med brett spektrum—dsDNA BR Assay Kit

Hög känslighet: Detekterbar koncentration så låg som 50 pg/μL;

Utmärkt linjäritet: Bra linjäritet inom intervallet 2-1000 ng;

Stark tolerans mot föroreningar: Kan tolerera vanliga föroreningar.

Tabell 4. Stabilitet och tolerans mot föroreningar jämfört med konkurrenter

Yeasen BR						T* BR
standard	RFU1	RFU2	AVG	fel		standard	RFU1	RFU2	AVG	fel
S1	159,63	160,71	160,17	1 %		S1	216,17	211,56	213,865	-2 %
S2	24497,0	25078,64	24787,82	2 %		S2	20532,46	20452,26	20492.36	0 %
mensuration						mensuration
Förorening	Koncentration i 10-μL prov	koncentration1	koncentration2	AVG	Ska testas/kontrolleras	Förorening	Koncentration i 10-μL prov	koncentration1	koncentration2	AVG	Ska testas/kontrolleras
Kontroll (H2O)	/	49	48,6	48,8	0,0 %	Kontroll (H2O)	/	49,8	48	48,9	0,0 %
BSA	1 mg/ml	51,8	52	51,9	6,4 %	BSA	1 mg/ml	54	51,2	52,6	7,6 %
Etanol	20 %	44,6	44	44,3	-9,2 %	Etanol	20 %	44,8	43,4	44.1	-9,8 %
kloroform	4,00 %	49,0	49,8	49,4	1,2 %	kloroform	4,00 %	50,0	47	48,5	-0,8 %
SDS	0,2 %	46,6	45,8	46,2	-5,3 %	SDS	0,2 %	53,2	51,6	52,4	7,2 %
Trition-X100	0,20 %	41,6	40,6	41.1	-15,8 %	Trition-X100	0.20 %	53	51	52,0	6,3 %
dNTP:er	2 mM	44.2	45	44,6	-8,6 %	dNTP:er	2 mM	47,8	46,4	47,1	-3,7 %

Lösning 3 ssDNA-kvantifiering

Det idealiska valet för ssDNA-kvantifiering – högkostnadsprestanda ssDNA-analyssats för Qubit^®

^{Hög känslighet: Detekterbar koncentration så låg som 50 pg/μL;
Utmärkt linjäritet: Bra linjäritet inom intervallet 0-200 ng;
Stabil signal: Utmärkt färgämne kombinerat med uppgraderad optimerad buffert, kan bibehålla stabil fluorescensintensitet vid rumstemperatur och är mycket användbar även i vanliga föroreningsmiljöer som salter, fria nukleotider, lösningsmedel, tvättmedel eller proteiner, vilket säkerställer exakt kvantifiering;
God stabilitet: Inga signifikanta prestationsförändringar efter 6 månaders behandling vid 4°C eller 25°C;
Brett användningsområde: Enkel operationsprocess, som möjliggör snabb kvantifiering av oligonukleotider, primers, denaturerat DNA, enkelsträngat cirkulärt DNA, etc.}

A.Bra repeterbarhet: Kvantifiering i olika Qubit-instrument, olika typer av prover med hjälp av Yeasen flera satser av Cat#12645 testade. Inom intervallet 0-200ng, bra repeterbarhet i mätningar från olika Qubit-instrument.