Med den snabba utvecklingen av glykoproteomik och antikroppsläkemedelsforskning har glykosyleringsmodifiering också väckt stor uppmärksamhet. Kontakten mellan celler och celler, och mellan celler och patogener fullbordas huvudsakligen genom interaktion mellan socker och proteiner, och glykosylering bestämmer vidhäftningsegenskaperna hos glykokonjugat. I IgG är den konserverade N-kopplade glykosyleringen vid Asn297 i Fc-regionen också avgörande för dess aktivitet. Vissa antikroppar har dessutom ytterligare N-glykaner, som tillsammans med det konserverade stället vid Asn297 i Fc-regionen påverkar antikroppens igenkänning, halveringstid och immunsvar.
Proteinglykosylering är en komplex post-translationell modifiering som involverar kopplingen av glykankedjor på specifika platser på proteiner. Beroende på typen av glykankedja delas glykoproteiner in i N-länkade glykoproteiner, O-länkade glykoproteiner, etc.; dessutom påverkas proteinglykosylering också av värdcellstypen och fermentationsförhållandena (såsom odlingsmedium, pH-värde, temperatur, etc.). Därför har glykoproteiner vanligtvis heterogenitet i glykosyleringsmönster, inklusive glykosyleringsställen, glykosyleringsnivåer och den specifika strukturen av glykankedjor, vilket gör glykankedjeanalys och strukturell karakteriseringsarbete extremt utmanande. För att erhålla den maximala mängden glykankedjestrukturinformation är huvudstrategin för glykankedjeanalys att först frigöra glykankedjorna från proteinerna och sedan utföra detaljerad analys och karakterisering. I denna strategi är en effektiv, exakt och stabil deglykosyleringsmetod avgörande.
Enzymatiska metoder används för närvarande i stor utsträckning för deglykosylering. För N-länkade glykaner inkluderar vanliga enzymer PNGase F , Endo H och Endo S.
Produktintroduktion
PNGase F är den mest effektiva enzymatiska metoden för att ta bort nästan allt N-kopplat oligosackarider i glykoproteiner, som kan klyva högmannos-, hybrid- och komplexa oligosackaridglykoproteiner kopplade till asparagin, vilket specifikt tar bort N-länkade glykaner. Klyvningsstället är: amidbindningen mellan den innersta N-acetylglukosaminen (GlcNAc) och asparaginresten, samtidigt som asparaginet på proteinet omvandlas till asparaginsyra efter enzymatisk hydrolys.
När al-6-fukos är lokaliserad vid GlcNAc-kärnan, kan PNGas F också skära; endast när α1-3-fukos finns vid GlcNAc-kärnan (vanligt i växt- och insektsglykoproteiner), kan PNGas F inte skära.
Vårt företag erbjuder konventionell PNGase F (Cat#20407ES)，Men den konventionella PNGase F enzymatiska reaktionen kräver flera timmar för att frisätta antikroppar N-glykaner, och på grund av preferensen för glykanfrisättning kan ofullständig deglykosylering leda till partiska resultat, och den erhållna glykanfördelningen kanske inte representerar den korrekta sammansättningen av terapeutiska antikroppar. Att erhålla en korrekt N-glykanprofil så snabbt som möjligt är därför avgörande för glykosyleringsövervakning under produktionsprocessen av antikroppar och antikroppsfusionsproteiner och andra bioterapeutiska medel.
Snabb PNGase F (Katt#20406ES) är ett optimerat rekombinant reagens som snabbt och fullständigt kan deglykosylera antikroppar, immunglobuliner, fusionsproteiner och andra glykoproteiner på några minuter. Detta enzym kan snabbt och utan preferens ta bort alla N-glykaner och kan direkt användas för kromatografi nedströms eller masspektrometrianalys.
Produktegenskaper:
Snabb: Fullständig och snabb deglykosylering på några minuter.
Hög renhet: Inget proteas, glykosidaskontamination, renhet ≥95%.
Icke-selektiv: Ta bort alla N-glykaner snabbt och utan preferens.
Bra kompatibilitet: Används direkt för nedströms kromatografi eller masspektrometrianalys.
Endo H är ett rekombinant glykosidas som kan klyva chitobios-kärnstrukturen av hög-mannos och vissa hybrid-typ oligosackarider i N-glykoproteiner, ta bort den N-länkade hög-mannosen från glykoproteiner.
Vårt företag erbjuder för närvarande jäst rekombinant uttryckt Endo H(Cat#20414ES).
Endo S är ett mycket specifikt glykosidas som kan klyva N-länkade sockerarter mellan chitobios-kärnstrukturerna i tunga IgG-kedjor av vildtyp. Aktiviteten av glykosidas S är inte strikt beroende av peptiden, så X kan vara ett protein, peptid, asparagin eller fri oligosackarid. Glykosidas S är aktivt oavsett närvaron av kärna alfa1-6 fukos eller delande N-acetylglukosamin på substratet. Det är dock inaktivt mot oligosackarider som är tri- eller tetraantennär sialylerade och desialylerade.
Vårt företag erbjuder för närvarande E.coli rekombinant uttryckt Endo S(Cat#20413ES).
Köpguide
| Produktumber | 20406ES | 20407ES | 20414ES | 20413ES |
| Produktnamn | ||||
| Källa | Jäst rekombinant uttryck | Jäst rekombinant uttryck | Jäst rekombinant uttryck | E.coli rekombinant uttryck |
| Specifik aktivitet | Ej tillämpligt | 100 000 U/ml | 1000000 U/ml | 8000 U/mg |
| Klyvningsplats | Nästan alla N-länkade glykaner | Nästan alla N-länkade glykaner | N-länkade hög mannosglykaner | Klyver inom kärndisackaridstrukturen av IgG tung kedja |
| Matsmältningstid | 10 min | 1-3 timmar | 1-3 timmar | 1 h |
| Glykosylering | Lämplig | Lämplig | Lämplig | Lämplig |
| Proteinstruktur | Lämplig | Lämplig | Lämplig | Lämplig |
Testdata
1. Snabb PNGase F Testa
1: Protein MarkerCat#20350ES) 2: Konkurrent + substrat eller antikropp 3: Konkurrent + substrat eller antikropp
4: Yeasen Fast PNGase F + substrat eller antikropp 5: Yeasen Fast PNGase F + substrat eller antikropp 6: Substrat eller antikropp 7: Yeasen Fast PNGase F 8: Konkurrent
2.Endo H-test
Figur 2. Endo H enzymatisk klyvningseffekt (substrat)
3.Endo S-test
Produktinformation
| Produktnamn | Produktnummer | Specifikation |
| 20406ES20/50 | 20 T/50 T | |
| 20407ES01/02 | 15000 U /75000 U | |
| 20414ES92/97 | 10000 U /50000 U | |
| 20413ES80/90 | 1 000 U/5 x 1 000 U |