Hieff Canace^TM Uracil+ High-Fidelity DNA-polymeras, är en ny generation av högtroget DNA Polymeras baserat på Pfu DNA-polymeras. The Hieff Canace^TM Uracil+ high-fidelity DNA-polymeras möjliggör snabba och exakta PCR-reaktioner för komplexa mallar. Dess tillförlitlighet förbättras avsevärt, och det undviker helt amplifieringsfelet som orsakas av att använda dUTP-innehållande primers/mallar/dNTPs. Produkten är utrustad med en optimerad enzymbuffert och tillägg av PCR-förstärkande komponenter, vilket gör enzymet mycket effektivt och anpassningsbart till ett brett spektrum av mallar, lämpligt för amplifiering av komplexa mallar.

Produktkomponenter

Frakt och förvaring

Komponenterna levereras med isförpackningar och kan förvaras vid -20°C i 1 år.

Produktapplikation

Högfientlig biblioteksförstärkning med dUTP-innehållande primrar/mallar/dNTP.

Varningar

1. För din säkerhet och hälsa, vänligen bär laboratorierockar och engångshandskar vid användning.

2. Endast för forskningsanvändning!

Instruktioner

Hieff Canace^TM Uracil+ High-Fidelity DNA-polymeras används på ett något annorlunda sätt än konventionella high-fidelity-enzymer. Läs instruktionerna noggrant före användning.

1. Rekommenderat reaktionssystem

Alla operationer bör utföras på is. 2×Canace^TM Uracil+ PCR-buffert ska blandas väl efter upptining. Förvärm PCR-instrumentet före systemkonfigurationen. Efter tillsatsen av komponenterna, blanda provet väl med en pipett och snurra ner det till botten av röret, placera det sedan i det förvärmda PCR-instrumentet för amplifiering. Efter användning, återställ alla komponenter till -20 °C för förvaring.

Tabell 1. PCR-amplifieringsreaktion

[Anteckningar]:

1)Reagenser: Tina upp varje komponent tillräckligt före användning;

2) Mallar: Användningen av renade DNA-mallar av hög kvalitet kan avsevärt förbättra effektiviteten och framgångshastigheten för amplifiering;

3)dNTP: Den rekommenderade slutliga dNTP-koncentrationen är 200 μM. DNTP:erna som ingår i satsen innehåller inte dUTP. Om speciella omständigheter kräver beredning av dUTP-innehållande mallar, kan ytterligare dUTP tillsättas till en slutlig koncentration på 400 μM.

4) Polymeraskoncentration: 1 U/50 μL rekommenderas. Den kan optimeras mellan 0,5-2 U/50 μL, överstig inte 2 U/50 μL. För att förhindra polymeras från att bryta ned primers på grund av 3 '→5' exonuklidaktivitet, föreslås att polymeras tillsätts till reaktionssystemet i det sista steget.

5)Mg2+ slutkoncentration: Systemets slutkoncentration är 2 mM. Be vårt företag att tillhandahålla buffert med låg Mg2+-koncentration eller utan Mg2+ om du har särskilda behov.

2. Rekommenderat reaktionsförfarande

Tabell 2. PCR-amplifieringsreaktionsförfarande

[Anteckningar]:

1) Initial denatureringstemperatur och tid: 98 ℃ rekommenderas. Den rekommenderade tiden är 30 sekunder för enkla mallar som plasmid-DNA, 1 min för bibliotek, 3 minuter för komplexa mallar som cDNA och genomiskt DNA och 5-10 minuter för mallar med högt GC-innehåll.

2) Glödgningstemperatur och tid: 60 ℃ rekommenderas, eller temperaturgradient kan ställas in för att hitta den optimala temperaturen för primerglödgning enligt behov. Rekommenderad glödgningstid är 20 sek och kan justeras inom 10-30 sek. För lång glödgningstid kan leda till att de amplifierade produkterna sprids på gelén.

3) Förlängningstemperatur och tid: 72 ℃ rekommenderas. Förlängningstiden anpassas efter faktiska behov.