Quick T4 DNA Ligase är en enda enzymprodukt som kan användas för ligering av DNA-fragment och adaptrar i processen för NGS-bibliotekskonstruktion. Denna produkt har verifierats genom sekvensering med hög genomströmning och har utmärkt kvalitet. För kunder som inte behöver experimentell systemjustering rekommenderas att köpa Hieff NGSTM Fast-Pace DNA Ligation Module (Cat#12607).

Produktkomponenter

Frakt och förvaring

Produkten levereras med isförpackningar och kan förvaras vid -20°C i två år.

Enhetsdefinition

I ett 20 μL ligeringsreaktionssystem, när 6 μg λDNA-Hind Ⅲ reageras vid 16 ℃ under 30 minuter, definierades mängden enzym som krävs för att ge mer än 50 % ligering av DNA-fragmenten som en enhet (U).

Varningar

1. Om en liten mängd utfällning inträffar när bufferten smälter, vänd upp och blanda väl före användning;

2. För din säkerhet och hälsa, vänligen bär laboratorierockar och engångshandskar vid användning.

3. Denna produkt är ENDAST för forskningsanvändning!

Instruktioner

1. De nuvarande vanliga DNA-biblioteksbyggsatserna renas i allmänhet inte efter slutreparation och A-Tailing-behandling och utför direkt adapterligering. Se följande förberedelse för reaktionssystemet. Vortexa ordentligt, snurra kort och inkubera i 15 minuter vid 20°C.

[Notera]: *50 % PEG 6000 ingår inte i satsen, du måste förbereda den själv.

**Se följande tabell för antalet adaptrar.

***Mängden Quick T4 DNA Ligase som används kan tillsättas 1-5 μL efter behov.

2. Kvaliteten och koncentrationen av adaptrar som används påverkar direkt ligeringseffektivitet och biblioteksutbyte. För mycket adapteranvändning kan ge fler adapterdimerer, medan lägre användning kan påverka ligeringseffektiviteten och biblioteksutbytet. Följande tabell listar den rekommenderade mängden adaptrar som används i olika Input DNA-situationer med detta kit.

[Notera]: Input DNA mol (pmol)≈ Input DNA(ng)/ [0,66 × Input DNA-medellängd(bp)].

Adapterligationsberäkningsexempel: Hur mycket adapter ska läggas till när inmatat DNA är 100 ng och längden är 300 bp?

Steg 1: Beräkna antalet mol ingående DNA. Formel: Input DNA mol (pmol)≈ Input DNA(ng)/ [0,66 × Input DNA medellängd(bp)]; Ingående DNA-mol (pmol)=100 ÷ (0,66×300) = 0,5 pmol;

Steg 2: Enligt tabellen ovan, beräkna antalet mol adapter som lagts till.; När inmatat DNA är 100 ng, är molförhållandet mellan adaptrar: inmatat DNA 100:1, och antalet mol adaptrar tillsatta = 100 × 0,5 pmol = 50 pmol;

Steg 3: Beräkna adapterns tillsatsvolym. Adapterkoncentration = 15 μmol/L (om du använder ett annat företags adapter måste du bestämma dess koncentration enligt dess instruktioner); Volym tillsatt adapter = mol adapter tillsatt (50 pmol) ÷ koncentration av adapter (15 μmol/L) = 3,34 μL (Obs: 15 μmol/L = 15 pmol/ μL);

Sammanfattningsvis är volymen som adaptern kan läggas till 3,4 μL. (Obs: Den maximala tillsatsvolymen för adaptern överstiger inte 5 μL).