Hieff Clone™ Universal II One Step Cloning Kit är ett nyligen uppgraderat kloningskit.

Den noggrant optimerade 2:a generationens 2× Hieff Clone™ Universal II Enzyme Premix kombinerar det rekombinanta enzymet och bufferten som krävs för den rekombinanta reaktionen med tillägg av en unik rekombinant förstärkare för att avsevärt förbättra effektiviteten av rekombinant kloning.

Satsen kan riktas till att klona PCR-produkter till vilken plats som helst av vilken vektor som helst, kompatibel med orenade PCR-produkter, direkt återvunna PCR-produkter, låg koncentration av gummiåtervunna produkter, denna produkt kan återsätta den homologa armens GC-innehåll på 30%-70% av ledfragmentet. Vektorn var fullständigt linjäriserad, och homologa sekvenser av änden av den linjäriserade vektorn på 15-25 bp infördes i 5'-änden av de positiva och omvända PCR-primrarna av det infogade fragmentet, så att 5'- och 3'-ändarna av PCR-produkterna av det insatta fragmentet hade exakt samma sekvens av de två linjäriserade vektorerna, motsvarande de båda ändarna. Under inverkan av rekombinant enzym kan den rekombinanta reaktionen av PCR-produkten och den linjäriserade vektorn fullbordas på så lite som 5 minuter vid 50 ℃. Den positiva graden av kloning kan nå mer än 95%.

Drag

Enkelt: Klona upp till sex DNA-fragment i en enda reaktion.

Flexibel: Designriktlinjer tillåter montering i valfri vektor som du väljer.

Effektiv: Effektiv för ligering av ett till sju fragment.

Ansökningar

Snabb Kloning: Det gör att flera överlappande DNA-fragment kan länkas sömlöst i en isotermisk reaktion på 5–50 minuter i ett steg.

Riktad kloning; Platsstyrd mutagenes.

Specifikationer

Komponenter

Lagring

Denna produkt bör förvaras vid -25~-15 ℃ i 1 år.

Siffror

Fföreställa 1. 10 ng enstaka fragment med låg ingång kopplades i det icke-återupplivningsreceptiva tillståndet i det 6μL lilla systemet. Resultaten visade att 10923ES hade bättre prestanda än konkurrerande produkter, med hög anslutningseffektivitet, fler kolonier och en positiv frekvens på 100 %. AB: Clony tallrik. Molförhållandet mellan bärare (10 kb) och insatt fragment (1 kb) var 1:2. C: Elektroforeskarta identifierad genom insättningsfragment PCR, M: YEASEN 10505ES.

Figur 2. Sex fragment (en total längd av 7,6 kb) klonades in i en 11,6 kb plasmid. Resultaten visade att 10923ES hade bättre prestanda än konkurrerande produkter, med fler kolonier och en positiv frekvens på 100%. AB: Koloniplatta. Molförhållandet mellan bärare (11,6 kb) för att infoga fragment var 1:2. C: Elektroforesanalys av insättningsfragmentet, M: YEASEN 10505ES. Plasmidingång:200 ng/20 μL, 50°C, 50 min.

Relaterade citat och referenser:

[1] Zhang H, Shao S, Zeng Y, et al. Reversibel fasseparation av HSF1 krävs för ett akut transkriptionssvar under värmechock. Nat Cell Biol. 2022;24(3):340-352. (IF:28.824)

[2] Xu Y, Yu Q, Wang P, et al. En selektiv liten molekyl c-Myc-nedbrytare regresserar potentiellt dödliga c-Myc-överuttryckande tumörer. Adv Sci (Weinh). 2022;9(8):e2104344. (IF:16.806)

[3] Guan B, Jiang YT, Lin DL, Lin WH, Xue HW. Fosfatidinsyra undertrycker autofagi genom kompetitiv hämning genom att binda GAPC (glyceraldehyd-3-fosfatdehydrogenas) och PGK (fosfoglyceratkinas) proteiner [publicerad online före tryckning, 2022 mars 15]. Autofagi. 2022;1-15. (IF:16.016)

[4] He X, Li Y, Chen Q, et al. O-GlcNAcylering och stabilisering av SIRT7 främjar bukspottkörtelcancerprogression genom att blockera SIRT7-REGγ-interaktionen [publicerad online före tryckning, 2022 14 april]. Celldöd skiljer sig åt. 2022;10.1038/s41418-022-00984-3.(IF:15.828)

[5] Zhou T, Zhu X, Ye Z, et al. Riskvariant för lupusförstärkare orsakar dysreglering av IRF8 genom samverkande lncRNA och DNA-metyleringsmaskineri. Nat Commun. 2022;13(1):1855. Publicerad 2022 6 april. (IF:14.919)

[6] Li T, Chen X, Qian Y, et al. En syntetisk BRET-baserad optogenetisk enhet för pulserande transgenuttryck som möjliggör glukoshomeostas hos möss. Nat Commun. 2021;12(1):615. Publicerad 2021 27 januari. (IF:14.919)

[7] Wu P, Zhang T, Liu B, et al. Mekanisk reglering av peptid-MHC klass I-konformationer bestämmer TCR-antigenigenkänning. Mol Cell. 2019;73(5):1015-1027.e7. (IF:14.548)

[8] Xiong L, Liu S, Chen S, et al. En ny typ av DNA-fosforotioering-baserat antiviralt system i archaea. Nat Commun. 2019;10(1):1688. Publicerad 2019 11 april. (IF:11.878)

[9] Jiang L, Wang Y, Xia A, et al. En naturlig enkelnukleotidpolymorfismvariant i sulfitreduktas påverkar svavelassimilering i majs. Ny Phytol. 2021;232(2):692-704. (IF:10.152)