Beskrivning
Hifair™ AdvanceFast 1st Strand cDNA Synthesis Kit (No Dye) är ett kit för snabb omvänd transkription utvecklat baserat på Hifair™ III 1st Strand cDNA Synthesis Kit (ingen färgämne), lämplig för PCR-amplifiering och RT-qPCR-experiment. Jämfört med Hifair™ III 1st Strand cDNA Synthesis Kit (ingen färgämne), det har stabila detektionshastigheter, specificitet och avkastningssäkerhet, med den totala omvänd transkriptionstiden potentiellt reducerad till mindre än 6 minuter, vilket avsevärt förkortar den experimentella varaktigheten.
Satsen innehåller gDNA Digester Mix, som kan eliminera genomisk DNA-kontamination som finns kvar i RNA-mallen, vilket säkerställer mer tillförlitliga efterföljande resultat. Kitet tillhandahåller två typer av cDNA-syntesprimrar: Random Primers N6 och Oligo (dT)18. Användare kan välja mellan Random Primers N6, Oligo (dT)18eller genspecifika primrar som omvänd transkriptionsprimrar enligt deras behov. Den syntetiserade enkelsträngade cDNA-produkten kan användas direkt för efterföljande PCR- eller qPCR-reaktioner.
Specifikationer
| Kat.nr. | 11150ES10 / 11150ES60 |
| Storlek | 10 T/100 T |
Komponenter
| Komponentnr. | Namn | 11150ES10 | 11150ES60 |
| 11150-A | 4× Hifair™AdvanceFast SuperMix (ingen färgämne) | 50 μL | 500 μL |
| 11150-B | 5×gDNA Digester Mix | 20 μL | 200 μL |
| 11150-C | Slumpmässiga primers (50 μmol/L) | 20 μL | 200 μL |
| 11150-D | Oligo d(T)18 Primers (50 μmol/L) | 20 μL | 200 μL |
| 11150-E | RNase-fritt vatten | 200 μL | 2×1 ml |
Lagring
Denna produkt bör förvaras vid -25~-15 ℃ för 1 år.
Instruktioner
- Om experimentet kräver avlägsnande av resterande genomiskt DNA
1）gDNA-smältning
I ett RNase-fritt centrifugrör, förbered följande blandning och pipettera försiktigt för att blanda väl. Inkubera vid 42 ℃ i 2 minuter.
| Komponenter | Volym (μL) |
| RNase-fritt vatten | Till 10 μL |
| 5× gDNA Digester Mix | 2 μL |
| Totalt RNA* | 10 pg-5 μg |
| eller mRNA* | 10 pg-500 ng |
* Det rekommenderas att den inmatade mängden Total RNA inte överstiger 2 μg. Om uttrycksnivån för målgenen är låg kan inmatningsmängden ökas till maximalt 5 μg Total RNA.
2） Förberedelse av omvänd transkriptionsreaktionssystem (20 μL system)
| Komponenter | Volym (μL) |
| reaktionslösningen från föregående steg | 10 μL |
| 4×Hifair™AdvanceFast SuperMix (ingen färgämne) | 5 μL |
| Oligo d(T)18 Primers (50 μmol/L)** | 2 μL |
| eller Random Primers (* för qPCR) (50 μmol/L)** | eller 2 μL |
| RNase-fritt vatten | Till 20 μL |
* Mängden primers kan justeras i enlighet med mängden mallinmatning. Om den omvända transkriptionsprodukten används för qPCR-experiment, kan Random Primers tillsättas i systemet enligt den rekommenderade mängden.
** Det rekommenderas att först tillsätta 4× Hifair™AdvanceFast SuperMix (ingen färgämne), blanda väl och sedan lägga till omvänd transkriptionsprimer för att säkerställa att primern inte påverkas av gDNA Digester.
3） Inställningar för omvänd transkriptionsprocedur
| Temp. | Tid |
| 55℃* | 5 min** |
| 85 ℃ | 5 sek |
* För mallar med högt GC-innehåll eller komplexa mallar kan temperaturen för omvänd transkription ökas till 60 ℃.
** Denna produkt kan syntetisera cDNA-sekvenser under 14 kb. Om du behöver längre cDNA-produkter kan du på lämpligt sätt förlänga den omvända transkriptionstiden.
- Om experimentet inte kräver avlägsnande av genomiskt DNA
1） Förberedelse av omvänd transkriptionsreaktionssystem (20 μL system)
| Komponenter | Volym (μL) |
| 4×Hifair™AdvanceFast SuperMix (ingen färgämne) | 5 μL |
| Oligo d(T)18 Primers (50 μmol/L)** | 2 μL |
| eller Random Primers (* för qPCR) (50 μmol/L)** | eller 2 μL |
| Totalt RNA* | 10 pg -5 μg |
| eller mRNA | 10 pg - 500 ng |
| RNase-fritt vatten | Till 20 μL |
* Det rekommenderas att den inmatade mängden Total RNA inte överstiger 2 μg. Om uttrycksnivån för målgenen är låg kan inmatningsmängden ökas till maximalt 5 μg Total RNA.
** Mängden primers kan justeras efter mängden mall som matas in. Om den omvända transkriptionsprodukten används för qPCR-experiment, kan Random Primers tillsättas i systemet enligt den rekommenderade mängden.
2） Inställningar för omvänd transkriptionsprocedur
| Temp. | Tid |
| 55℃* | 5 min** |
| 85 ℃ | 5 sek |
* För mallar med högt GC-innehåll eller komplexa mallar kan temperaturen för omvänd transkription ökas till 60 ℃.
** Denna produkt kan syntetisera cDNA-sekvenser under 14 kb. Om du behöver längre cDNA-produkter kan du på lämpligt sätt förlänga den omvända transkriptionstiden.
Anteckningar
- Alla operationer bör utföras på is och bör utföras på ett sätt som undviker RNas-kontamination.
- Denna produkt är endast avsedd för forskning.
- Använd labbrockar och engångshandskar, för din säkerhet.
Dokument:
Betalning och säkerhet
Din betalningsinformation behandlas säkert. Vi lagrar inte kreditkortsuppgifter och har inte heller tillgång till din kreditkortsinformation.
Förfrågan
Du kanske också gillar
Vanliga frågor
Produkten är endast avsedd för forskningsändamål och är inte avsedd för terapeutisk eller diagnostisk användning hos människor eller djur. Produkter och innehåll skyddas av patent, varumärken och upphovsrätt som ägs av Yeasen Biotechnology. Varumärkessymboler anger ursprungsland, inte nödvändigtvis registrering i alla regioner.
Vissa applikationer kan kräva ytterligare immateriella rättigheter från tredje part.
Yeasen är dedikerad till etisk vetenskap, och anser att vår forskning bör behandla kritiska frågor samtidigt som den säkerställer säkerhet och etiska standarder.