Produktbeskrivning

Hieff NGS™ mRNA Isolation Master Kit är ett magnetiskt pärlpaket speciellt för mRNA-rening. mRNA Capture-kulorna är mikrometerstora paramagnetiska mikrosfärer kopplade med Oligo dT (poly A)-svansar, som kan användas för att isolera mRNA från 10 ng till 4 μg komplett RNA genom att binda till mRNA med poly A-svansar.

Specifikationer

Komponenter

Lagring

Produkten bör förvaras vid 2 ~ 8 ℃ i ett år och undvik frysning.

Instruktioner

1. Nödvändigt material ingår ej

Magnetställ, nukleasfria PCR-rör

2. Drift

1) Utjämna mRNA Capture Beads vid rumstemperatur (~ 30 min).

2) Späd 10 ng – 4 μg totalt RNA till 50 μL med nukleasfritt vatten i ett nukleasfritt PCR-rör, placera det på is.

3) Blanda de magnetiska pärlorna genom att vända dem upp och ner eller vortexa. Tillsätt 50 μL av de magnetiska pärlorna i 50 μL totalt RNA-prov och pipettera 6 gånger för att blanda väl. Snurra ner en kort stund till botten av röret.

4) Inkubera blandningen av magnetiska pärlor och RNA i en termisk cykler och kör följande program: 65°C, 5 min; 25°C, 5 min; 25°C, håll.

5) Placera röret på en magnet kuggstång under 5 minuter för att separera mRNA från totalt RNA. Ta försiktigt bort supernatanten.

6) Ta bort röret från magneten kuggstång och återsuspendera de magnetiska pärlorna med 200 μL Beads Wash Buffer. Pipettera hela volymen upp och ner 6 gånger för att blanda ordentligt. Placera röret på en magnet kuggstång i 5 min, och avlägsna försiktigt supernatanten.

7) Upprepa steg 6.

8) Ta bort röret från magneten kuggstång. Tillsätt 50 μL Tris-buffert för att återsuspendera de magnetiska pärlorna och pipettera 6 gånger för att blanda ordentligt.

9) Sätt provet i en termisk cykler och kör följande program för att eluera mRNA:t: 80°C, 2 min; 25°C, håll.

10) Ta bort provet från termocyklern. Tillsätt 50 μL Beads Binding Buffer och pipettera upprepade gånger 6 gånger för att blanda ordentligt.

11) Inkubera vid rumstemperatur i 5 minuter för att tillåta mRNA att binda till de magnetiska pärlorna.

12) Placera röret på magneten ställ i 5 minuter och ta försiktigt bort supernatanten.

[Notera]: En 10 μL pipett behövs för att aspirera den återstående vätskan.

13) Ta bort röret från magneten kuggstång, återsuspendera de magnetiska pärlorna med 200 μL Beads Wash Buffer, pipettera upprepade gånger 6 gånger för att blanda noggrant. Placera röret på magneten kuggstång vid rumstemperatur i 5 minuter. Ta bort och kassera all supernatanten.

14) mRNA slutlig eluering

Schema A: För reservtranskriptionsreaktion

Ta bort röret från magneten kuggstång. Tillsätt 12μL nukleasfritt vatten och pipettera upprepade gånger 6 gånger för att blanda ordentligt. Placera röret i termocyklern och kör följande program: 80°C, 2 min. Placera sedan röret på magneten kuggstång omedelbart, låt stå i rumstemperatur i 5 min. Efter att lösningen har klarnat, aspirera försiktigt 10 μL supernatant i ett annat nytt nukleasfritt PCR-rör.

Schema B: För RNA biblioteksförberedelser

Tillsätt lämplig volym Frag/Primer Buffer enligt relevanta kitinstruktioner för bibliotekskonstruktion.

Notera

1. För din säkerhet och hälsa, vänligen bär laboratorierockar och engångshandskar vid användning.
2. Endast för forskningsanvändning.
3. Var noga med att värma upp till rumstemperatur och blanda väl innan du använder de magnetiska pärlorna, annars kan återhämtningseffektiviteten för proverna påverkas.
4. Operationen bör vara strikt fri från RNas och nukleinsyrakontamination.
5. När denna produkt används med andra reagens, vänligen följ de specifika experimentinstruktionerna för användning.
6. För att få bra reningsresultat måste du ha god integritet av totalt RNA och säkerställa RIN-värdet >7,0.