Globin-mRNA-utarmningsprob (human) är utformad för att avlägsna humant Globin-mRNA. Det kan effektivt ta bort Globin-mRNA från vuxen, spädbarn och embryotrevligt källor, inklusive HBA1/2, HBB, HBD, HBM, HBG1/2, HBE1, HBQ1 och HBZ. Denna produkt används med Hieff NGS^TM MaxUp rRNA Depletion Kit (människa/mus/råtta) (Yeasen#12253) för att effektivt ta bort rRNA och Globin mRNA från totalt RNA. Detta kit är lämpligt för både intakta och nedbrutna RNA-prover. RNA-proverna efter rRNA & Globin-mRNA-borttagning kan användas för sekvensanalys med hög genomströmning av mRNA och icke-kodande RNA, vilket avsevärt ökar andelen giltiga data i sekvenseringsresultat och cDNA-syntes eller andra nedströmsapplikationer.

Produktapplikation

Lämplig för 100 ng~1 μg totala RNA-prover mänskliga, blodresurs från mus och råtta, och för både intakta eller delvis nedbrutna RNA-prover.

Produktkomponenter

Frakt och förvaring

Alla komponenterna levereras med torris och kan förvaras vid -20°C i ett år.

Figur

Totalt 500 ng och 100 ng totalt RNA från mänskligt blod genomgick rRNA-borttagning respektive kombinerat rRNA & Globin-borttagning. Efter bibliotekskonstruktion och sekvensering jämfördes innehållet av Globin-mRNA.

Varningar

1. Använd förbrukningsvaror som är fria från RNase-kontamination och rengör experimentområdet regelbundet. Det rekommenderas att använda ThermoFishers RNAZap^TM högeffektiv spray för borttagning av nukleinsyra för att avlägsna RNas-kontamination.

2. RNA-provet bör vara fritt från genomisk DNA-kontamination. Om gDNA finns kvar i provet bör det digereras med DNas I och renas före användning.

3. Den maximala inmatade volymen för RNA-prov är 10 μL. Om provvolymen är stor kan den koncentreras först.

4. För din säkerhet och hälsa, vänligen bär laboratorierockar och engångshandskar vid användning.

5. Endast för forskning!

Instruktioner

1. Sondhybridisering till RNA

1.1 Späd 10 ng–1 μg totalt RNA med nukleasfritt vatten till en slutlig volym på 10 μL i ett PCR-rör. Behåll RNA på is.

1.2 Montera följande RNA/prob-hybridiseringsreaktion på is enligt tabell 1.

Tabell 1 RNA/probhybridiseringsreaktion

1.3 Blanda noggrant genom att försiktigt pipettera upp och ner minst 10 gånger. Snurra ner röret kort i en mikrocentrifug för att samla upp vätskan från sidan av röret.

1.4 Placera röret i en termocykler och kör följande program i Tabell 2 med det uppvärmda locket inställt på 105°C.

Tabell 2 Reaktionsprogram för RNA/probhybridisering

2. RNas H-digestion

2.1 Sätt ihop följande RNase H-nedbrytningsreaktion på is enligt tabell 3.

Tabell 3 RNas H digestionsreaktion

2.2 Blanda noggrant genom att försiktigt pipettera upp och ner minst 10 gånger. Snurra ner röret kort i en mikrocentrifug för att samla upp vätskan från sidan av röret.

2.3 Placera röret i en termocykler och kör följande program: lock 50°C; 37°C, 30 min; 4°C, håll.

3. DNas jag Matsmältning

3.1 Montera följande DNas I-smältningsreaktion på is enligt tabell 4.

Tabell 4 DNas Ⅰ digestionsreaktion

3.2 Blanda noggrant genom att försiktigt pipettera upp och ner minst 10 gånger. Snurra ner röret kort i en mikrocentrifug för att samla upp vätskan från sidan av röret.

3.3 Placera röret i en termocykler och kör följande program: locket av; 37°C, 30 min; 4°C, håll.

4. RNA-rening

4.1 Utjämna Hieff NGS^TMRNA Cleaner (Cat#12602) till rumstemperatur och återsuspendera pärlorna noggrant genom att vortexa före användning.

4.2 Lägg till 110 µL (2,2×) pärlor till RNA-lösningen från steg 3.3 och blanda noggrant genom att pipettera upp och ner minst 10 gånger.

4.3 Inkubera vid rumstemperatur i 5 minuter för att binda RNA till pärlorna.

4.4 Placera röret på ett magnetiskt stativ för att separera pärlorna från supernatanten. När lösningen är klar (ca 3 minuter), kassera supernatanten. Var noga med att inte röra pärlorna med pipettspetsarna.

4.5 Håll röret på det magnetiska stativet. Tillsätt 200 µL nyberedd 80 % etanol till röret. Inkubera vid rumstemperatur i 30 sekunder och kassera sedan supernatanten. Var noga med att inte röra pärlorna med pipettspetsarna.

4.6 Upprepa steg 4.5 en gång för totalt två tvättar.

4.7 Ta bort resterande etanol med 10 µL - pipettspetsar. Håll röret på det magnetiska stativet och lufttorka pärlorna i upp till 5 minuter med locket öppet.

4.8 Ta bort röret från magnetstativet. Eluera RNA från pärlorna genom att tillsätta 11 μL nukleasfritt vatten. Blanda noggrant genom att pipettera upp och ner minst 10 gånger och snurra röret kort.

4.9 Inkubera i 5 minuter vid rumstemperatur. Placera röret på det magnetiska stativet tills lösningen är klar (~ 3 minuter).

4.10 Överför 10 µL av supernatanten till ett nukleasfritt rör.

Obs: Om du behöver stanna vid denna tidpunkt kan prover förvaras vid –80°C.