Beskrivning
Hieff™ Mångsidighet T4 DNA Ligase är en variant av T4 DNA Ligase. Detta enzym är lämpligt för att katalysera ligeringsreaktionen mellan kohesiva eller trubbiga molekyler. Det är en enkelenzymprodukt designad för att koppla ihop DNA-fragment och adaptrar under biblioteksberedningsprocessen i nästa generations sekvensering (NGS). The Hieff® Mångsidighet T4 DNA Ligase har validerats omfattande genom sekvensering med hög genomströmning och uppvisar exceptionell kvalitet.
Särdrag
- Hi-fi
- Termotolerant
Lär dig mer om den mångsidiga utvecklingen av T4 DNA-ligas
Specifikationer
| Källa | Rekombinant E.coli |
| Förvaringsbuffert | 50 mM Tris-HC1,100 mM KC1,0,1 mM EDTA, 1 mM DTT, 50 % glycerol, pH 7,5士0,2 @25℃ |
| Enhetsdefinition | I ett ligeringsreaktionssystem på 20 μL definieras den enzymmängd som krävs för att katalysera ligeringen av mer än 50 % av DNA-fragmenten, när 6 μg λDNA-Hind III reageras vid 16°C under 30 minuter, som 1 enhet aktivitet (U). |
Komponenter
| Komponenter | Namn | 12996ES60 60KU | 12996ES62 600KU |
| 12996-A | Hieff® Mångsidig T4 DNA-ligas (600 U/µL) | 100 μL | 1000 μL |
| 12996-B | 10×T4 DNA-ligasbuffert | 500 μL | 3×1500 μL |
Lagring
Denna produkt bör förvaras vid -25~-15 ℃ i 2 år.
Figur
Lämna ett meddelande för att fråga om prestandajämförelsedata mellan detta enzym och andra termostabila och konventionella T4 DNA-ligaser av högsta klass.
Anteckningar
1. Använd labbrockar och engångshandskar，för din säkerhet.
2. Om en liten mängd nederbörd förekommer i bufferten är det ett normalt fenomen. Vänd på och blanda bufferten noggrant innan du använder den.
3. Denna produkt är endast avsedd för forskning.
Protokoll
1. De nuvarande vanliga DNA-biblioteksförberedelsesatserna som använder den ligeringsbaserade metoden kräver vanligtvis inga reningssteg efter slutreparation och A-tailing. DNA-fragmenten utsätts direkt för adapterligering utan rening. Detta kit är kompatibelt med mainstream kommersiellt tillgängliga ändreparation och A-tailing-system för sömlös adapterligering.
Ställ upp följande reaktion i ett mikrocentrifugrör på is, blanda försiktigt genom pipettering eller skakning, Centrifugera kort och värmeinaktivera vid 20°C i 15 minuter.
Tabell 1. Reaktionssystem för adapterligering
| Komponent | Volym(μL） | Slutlig koncentration |
| dA-svansad DNA | 60 | 1× |
| 10×T4 DNA-ligasbuffert | 10 | 0,1 μM-0.5 μM |
| 50 % PEG6000 | 12* | 1 ng -400 ng |
| DNA-adapter | 5** |
|
| 3~5*** |
| |
| Nukleasfritt vatten | upp till 100 | - |
【Notera】*50 % PEG6000-lösningen ingår inte i satsen, du måste förbereda den själv
**Se tabellen 2 för mängd adapter.
***Mängden T4 DNA-ligas kan tillsättas efter behov med 3-5 μL.
2. Koncentrationen av adaptern påverkar direkt ligeringseffektiviteten och biblioteksutbytet. Överdriven användning av adaptrar kan bli resultatet i fler adapterdimerer, medan låg användning kan påverka anslutningseffektiviteten och biblioteksproduktionen. Tabell 2 listar den rekommenderade adaptermängden för olika mängder ingående DNA.
Tabell 2. Rekommenderad adaptermängd för 100 pg-1 μg Input DNA
| Mata in DNA | Koncentration |
| 0,1 ng | |
| 1 ng | 0,5 μM |
| 10 ng | 1 μM |
| 25 ng | 2 μM |
| 100 ng~1000 ng | 10 μM |
【Notera】:Mängden adapter kan justeras enligt kraven i tabellen ovan.
Betalning och säkerhet
Din betalningsinformation behandlas säkert. Vi lagrar inte kreditkortsuppgifter och har inte heller tillgång till din kreditkortsinformation.
Förfrågan
Du kanske också gillar
Vanliga frågor
Produkten är endast avsedd för forskningsändamål och är inte avsedd för terapeutisk eller diagnostisk användning hos människor eller djur. Produkter och innehåll skyddas av patent, varumärken och upphovsrätt som ägs av Yeasen Biotechnology. Varumärkessymboler anger ursprungsland, inte nödvändigtvis registrering i alla regioner.
Vissa applikationer kan kräva ytterligare immateriella rättigheter från tredje part.
Yeasen är dedikerad till etisk vetenskap, och anser att vår forskning bör behandla kritiska frågor samtidigt som den säkerställer säkerhet och etiska standarder.