Beskrivning
Hifair™ Super Reverse Transcriptase är ett nästa generations omvänt transkriptas, som var enknep från M-MLV. Detta enzym saknar RNas H-aktivitet och uppvisar signifikant förbättrad termisk stabilitet, tolererar reaktionstemperaturer på upp till 70°C. Den är mycket lämplig för effektiv omvänd transkription av RNA-mallar med komplexa sekundära strukturer.
Ansökningar
Denna produkt är lämplig för RT-PCR, RT-qPCR, RT-LAMP, RNA-seq och cDNA-syntesexperiment. Temperaturen för omvänd transkriptionsreaktion kan nå upp till 70°C.
Enhetsdefinition
En enhet (U) enzymaktivitet definieras som mängden enzym som krävs för att införliva 1 nmol dTTP i syraolösligt material inom 10 minuter vid 37°C, med användning av Poly(A).Oligo(dT) som mall-primer.
Komponent
| Komponent | Namn | 14612ES92 | 14612ES93 |
| 14612 | Hifair™ Super omvänt transkriptas (200 U/μL) | 50 μL | 250 μL |
Förvaringsvillkor
Förvara vid -25˚C till -15˚C i upp till 18 månader.
Användningsinstruktioner
Förfarande för syntes av cDNA för första strängen
1. RNA-denaturering (valfritt steg)
1. RNA-denaturering hjälper till att öppna sekundära strukturer, vilket avsevärt förbättrar första-strängs cDNA-utbytet.
| Komponent | Volym |
| RNas-fri ddH2O | till 13 μL |
| Oligo(dT)18 (50 μM) eller slumpmässiga primers (50 μM) eller genspecifika primers (2 μM) | 1 μL |
| Mall RNA | Totalt RNA: 10 pg - 5 μg eller mRNA: 10 pg - 500 ng |
· Värm vid 65°C i 5 minuter, kyl sedan snabbt ned på is i 2 minuter.
· Centrifugera kort för att samla upp reaktionsvätskan och tillsätt reaktionsblandningen för omvänd transkription som visas nedan.
2. Inställning av omvänd transkriptionsreaktion (20 μL system)
| Komponent | Volym |
| Reaktionsblandning från föregående steg | 13 μL |
| 5× reaktionsbuffert | 4 μL |
| dNTP-mix (10 mM) | 1 μL |
| Hifair® Super Reverse Transcriptase (200 U/μL) | 1 μL |
| RNas-hämmare (40 U/μL) | 1 μL |
3. Inställningar för omvänd transkriptionsprogram
| Temperatur | Tid |
| 25°C* | 5 min |
| 50-70°C | 15-30 min |
| 85°C** | 5 min |
*När du använder Random Primers, inkubera vid 25°C i 5 minuter. Om du använder Oligo(dT)18 eller Gene-Specific Primers, kan detta steg utelämnas.
85°C uppvärmning i 5 minuter inaktiverar det omvända transkriptaset och kan justeras efter behov.
Den omvända transkriptionsprodukten kan användas omedelbart för efterföljande PCR- eller qPCR-reaktioner, lagras kortvarigt vid -20°C eller för långtidsförvaring vid -80°C efter alikvotering för att undvika frys-upptiningscykler.
Försiktighetsåtgärder
1. Upprätthålla en ren laboratoriemiljö; bära rena handskar och masker. Se till att alla experimentella förbrukningsvaror är RNase-fria för att förhindra kontaminering.
2. Utför alla operationer på is för att förhindra RNA-nedbrytning.
3. Använd RNA-prover av hög kvalitet för att säkerställa effektiv omvänd transkription.
4. Denna produkt är endast avsedd för forskning.
5. För din säkerhet och hälsa, bär en labbrock och engångshandskar när du hanterar produkten.
Dokument:
Betalning och säkerhet
Din betalningsinformation behandlas säkert. Vi lagrar inte kreditkortsuppgifter och har inte heller tillgång till din kreditkortsinformation.
Förfrågan
Du kanske också gillar
Vanliga frågor
Produkten är endast avsedd för forskningsändamål och är inte avsedd för terapeutisk eller diagnostisk användning hos människor eller djur. Produkter och innehåll skyddas av patent, varumärken och upphovsrätt som ägs av Yeasen Biotechnology. Varumärkessymboler anger ursprungsland, inte nödvändigtvis registrering i alla regioner.
Vissa applikationer kan kräva ytterligare immateriella rättigheter från tredje part.
Yeasen är dedikerad till etisk vetenskap, och anser att vår forskning bör behandla kritiska frågor samtidigt som den säkerställer säkerhet och etiska standarder.