Beskrivning
AapCas12b-nukleaset (även känt som C2c1) är ett DNA-endonukleas förmedlat av tracrRNA:crRNA (eller sgRNA), härlett från den termofila bakterien Alicyclobacillus acidophilus. I närvaro av en PAM (TTN)-sekvens vid det dubbelsträngade mål-DNA:t (dsDNA), klyver den specifikt mål-dsDNA:t, vilket orsakar dubbelsträngsbrott och genererar klibbiga ändar. AapCas12b kan specifikt klyva enkelsträngade DNA-mål oberoende av PAM-sekvensen. Både dubbelsträngade och enkelsträngade DNA-mål kan aktivera trans-klyvningsaktiviteten hos AapCas12b. När AapCas12b-enzymet bildar ett ternärt komplex med sgRNA och mål-DNA, aktiveras det för icke-specifik ssDNA-transklyvningsaktivitet, vilket skär av eventuell godtycklig sekvens av ssDNA i systemet. Den optimala klyvningsreaktionstemperaturen för AapCas12b är 60oC, vilket gör den mer värmebeständig än AacCas12b och mer lämplig för användning med LAMP för att utveckla isotermisk amplifiering/CRISPR-Cas-detektionssystem.
Drag
Brett reaktionstemperaturområde: Uppvisar klyvningsaktivitet inom temperaturintervallet 37~65oC
Låg nukleasrest: Inget kvarvarande exonukleas, nickas eller RNas
Cis-klyvningsaktivitet: Mycket effektiv klyvning av dubbelsträngat DNA in vitro
Transklyvningsaktivitet: Hög trans-klyvningsaktivitet, lämplig för nukleinsyradetektion
Ansökningar
CRISPR/Cas-genredigering
Diagnostik och detektion baserat på CRISPR/Cas-systemet
Andra detektionstillämpningar i kombination med isotermisk nukleinsyraamplifieringsteknik (RPA och LAMP), etc.
Specifikationer
| Molekylvikt | 130 KDa |
| Koncentration | 10 µM |
| Renhet | >95 % (SDS-SIDA) |
| Enhetsdefinition | Mängden Cas12b-enzym som krävs för att klyva 1 pmol ssDNA-sond inom 1 minut vid 60oC i en total reaktionsvolym av 20 μL, innehållande 1×reaktionsbuffert, definieras som 1 U |
Komponenter
| Komponenter Inga. | Namn | 14808ES65 | 14808ES80 |
| 14808-A | AapCas12b Nuclease (10 μM) | 100 μL | |
| 14808-B | 10×Reaktionsbuffert | 1 ml | 1 ml |
Fartygping och lagring
Denna produkt bör förvaras vid -25 ~ -15oC i 2 år.
Siffror
Figur 1. Cis-klyvningsaktivitet Verifiering av AapCas12b nukleas
Notera: I en 20 μL-reaktionssystem som innehåller mål-dsDNA med en PAM-sekvens, sgRNA, Cas12b och 1×reaktionsbuffert, inkuberades blandningen vid 60°CoC i 30 minuter och inaktiverades sedan vid 85oC i 5 minuter. Agarosgelelektroforesresultaten visade att tre satser av AapCas12b Nuclease alla var kapabla att effektivt klyva dsDNA, med klyvningseffektivitet jämförbar med den för det importerade varumärket T*.
Figur 2. AapCas12b Nuclease Trans-cleavage Activity Test Resultat
Notera: I en 20 μL-reaktionssystem innehållande Target dsDNA med en PAM-sekvens, sgRNA, Cas12b, Report ssDNA fluorescerande sond och 1×reaktionsbuffert, inkuberades blandningen vid 60°CoC under 1 timme, och fluorescenssignalen uppsamlades var 30:e sekund. Resultaten visade att i närvaro av mål-DNA, sgRNA och Cas12b tillsammans, kunde Report ssDNA-fluorescerande sonden klyvas och därigenom frigöra fluorescenssignalen.
Dokument:
Säkerhetsdatablad
Manualer
Betalning och säkerhet
Din betalningsinformation behandlas säkert. Vi lagrar inte kreditkortsuppgifter och har inte heller tillgång till din kreditkortsinformation.
Förfrågan
Du kanske också gillar
Vanliga frågor
Produkten är endast avsedd för forskningsändamål och är inte avsedd för terapeutisk eller diagnostisk användning hos människor eller djur. Produkter och innehåll skyddas av patent, varumärken och upphovsrätt som ägs av Yeasen Biotechnology. Varumärkessymboler anger ursprungsland, inte nödvändigtvis registrering i alla regioner.
Vissa applikationer kan kräva ytterligare immateriella rättigheter från tredje part.
Yeasen är dedikerad till etisk vetenskap, och anser att vår forskning bör behandla kritiska frågor samtidigt som den säkerställer säkerhet och etiska standarder.