Hieff NGS^TM UCF.ME DNA-selektionspärlor framställs baserat på SPRI-principen (Solid Phase Reverse Immobilization). och är tillämplig för DNA-rening och storleksval under beredningen av nästa generations sekvenseringsbibliotek (NGS). Hieff NGS^TM UCF.ME DNA-selektionspärlor är kompatibla med olika förberedelsesatser för DNA- och RNA-bibliotek. Denna produkt tillverkas i en ultraren anläggning med en hög renhetsnivå och kan användas för DNA-reningssteg under patogendetekteringsprocesser.

Specifikationer

Komponenter

Lagring

Denna produkt bör förvaras kl 2~8℃ i 18 månader.

Frakt och förvaring

Pärlorna skickas med isförpackningar och kan förvaras vid 2°C-8°C i ett år.

Instruktioner

• 1. Förberedelse

Utjämna urvalspärlorna vid rumstemperatur i minst 30 minuter före användning.

• 2. Val av DNA-storlek

Operationsflödet för storleksval visas i figur 1 och protokollet är som följer.

Figur 1. Flödesschemat för urval av DNA-storlek

2.1 Blanda pärlorna noggrant genom att vortexa eller pipettera upp och ner varje gång före användning.
2.2 Lägg till den första omgången av urvalspärlor till provet (se tabell 1). Blanda noggrant genom att vortexa eller pipettera upp och ner minst 10 gånger.
2.3 Inkubera i rumstemperatur i 5 min.
2.4 Snurra ner röret kort och placera det på magnetstativ. När lösningen är klar (ca 5 min), överför supernatanten till ett nytt PCR-rör.
2.5 Lägg till den andra omgången av urvalspärlor till provet från steg 2.4 enligt tabell 1. Blanda noggrant genom att vortexa eller pipettera upp och ner minst 10 gånger.
2.6 Inkubera vid rumstemperatur i 5 min.
2.7 Snurra ner röret kort och placera det på magnetstativ. När lösningen är klar (ca 5 min), aspirera supernatanten och kassera.
2.8 Håll röret i det magnetiska stativet och tillsätt 200 μL nyberedd 80 % etanol utan att störa pärlorna, inkubera i rumstemperatur i 30 sekunder. Aspirera etanolen och kassera.
2.9 Upprepa steg 2.8 en gång för totalt två tvättar.
2.10 Ta bort resterande etanol med 10 µL pipettspetsar. Håll röret i det magnetiska stativet, lufttorka urvalspärlorna med locket öppet tills sprickor precis uppstår (ca 5 min).
Obs: Torka inte valpärlorna för mycket. Detta kan resultera i lägre återställnings-DNA-mål.
2.11 Ta bort röret från magnetstativet. Tillsätt en lämplig mängd ddH2O (≥20 µL) och blanda noggrant genom att vortexa eller pipettera upp och ner minst 10 gånger.
2.12 Inkubera vid rumstemperatur i 5 min.
Snurra ner röret kort och placera det på magnetstativet. När lösningen är klar (cirka 5 minuter), överför 20 μL av supernatanten till ett nytt rör.

• 3. Rekommenderade villkor för urval av DNA-storlek

Kalvtymus-DNA:t fragmenterades genom sonikering för att framställa ett fragment på 100-1 000 bp, och två omgångar av storleksval utfördes enligt tabell 1. Resultaten analyserades med användning av Agilent 2100 Bioanalyzer (Figur 2).

Tabell 1. Rekommenderat villkor för val av DNA-storlek

Obs: "×" i tabellen anger volymen av prov-DNA. Till exempel, om insättningslängden på biblioteket är 250 bp och provets DNA-volym är 100 μL, är volymen magnetiska pärlor som används i den första sorteringsrundan 0,80×100 μL=80 μL; volymen av magnetiska pärlor som används i den andra sorteringsrundan är 0,20× 100 μL=20 μL.

Figur 2. Agilent 2100 högkänsligt DNA-chipelektroferogram