De Magnetisk Resterande DNA Prov Förberedelsesats är lämplig för de förbehandling av resterande DNA i olika biologisk prover. Den kan maximera separationen och reningen av spårmängder av värdcellsresterande DNA i prover genom att använda unika magnetiska pärlor och en noggrann optimerat buffertsystem.

Den magnetiska Kitet för resterande DNA-prov kan användas med en mängd olika värdcellsresterande DNA detektionskit, inklusive CHO Host Cell DNA Residue Detection Kit (Katt#41301ES), HEK293 värdcells-DNA-restdetektionskit (Cat#41302ES), Vero Host Cell DNA Residue Detection Kit (Katt#41303ES), och E.coli Host Cell DNA Residue Detection Kit (Katt#41304ES).

Produktkomponenter

Frakt och förvaring

1. Del I levereras med en ispåse, 4°C i 1 år eller -20°C för långtidsförvaring.

2. Del II skickas i rumstemperatur och lagras i 1 år i rumstemperatur.

3. Del III skickas på torris och förvaras vid -20°C i 1 år.

4. Efter att ha tagit emot varorna, kontrollera om de tre komponenterna i del I, del II och del III är kompletta och förvara dem omedelbart i motsvarande lagringstemperatur.

Varningar

1. Vänligen läs bruksanvisningen noggrant före användning och använd i strikt enlighet med bruksanvisningen. Provbehandling rekommenderas att utföras på en ren bänk eller ett biologiskt säkerhetsskåp.

2. Var uppmärksam på att observera om det finns utfällning eller grumlighet i lösningen förvarad i rumstemperatur (särskilt när rumstemperaturen är låg som på vintern), du kan ta ett vattenbad vid 37°C tills lösningen är klar för att undvika att påverka användningseffekten.

3. Det kan finnas kvarvarande magnetiska pärlor under elueringen, så försök att undvika att aspirera magnetiska pärlor när du tar prover.

4. Vänligen byt tipsen ofta för att undvika korskontaminering, När du använder den här produkten.

5. För din säkerhet och hälsa, vänligen bär personlig skyddsutrustning (PPE), såsom laboratorierockar och engångshandskar, när du använder denna produkt.

6. Denna produkt är ENDAST för forskningsanvändning!

Förberedelse

1. Självförsörjande utrustning: virvelskakare, vattenbad eller metallbad, centrifug, magnetiskt separationsställ, Hangzhou Aosheng Auto-Pure32A automatisk nukleinsyraextraktor eller andra märken av helautomatisk nukleinsyraextraktor.

2. Självförsörjande förbrukningsvaror: 10μL-1000μL filterspetsar med låg adsorption, 1,5 mL centrifugrör med låg adsorption, PCR-rör eller plattor med 96 brunnar och motsvarande rörlock eller membran.

3. Egentillverkade reagenser: absolut etanol (analytisk kvalitet), 1×PBS-buffert (pH 7,4, fri från Mg- och Ca-joner), ultrarent vatten.

4. För den första användningen, tillsätt vattenfri etanol med den volym som anges på etiketten eller i instruktionerna till flaskorna med tvättlösning A* och tvättlösning B*, blanda noga före användning och märk dem väl. Förslut flaskan ordentligt efter användning för att bibehålla etanolnivån i flaskan.

Manuell återstående DNA-extraktion

1. Provbearbetning

1.1 Om provet innehåller ett relativt högt DNA-innehåll, såsom ett vaccin, späd det i lämplig proportion med 1×PBS-buffert (pH 7.4, fri från Mg- och Ca-joner) och sedan extrahera (utspädning av provet är att göra att detektionsvärdet ligger inom det linjära området för standardkurvan och sedan säkerställa noggrannheten i detektionen. och vanligtvis kan en 100-faldig utspädning övervägas).

1.2 Om provet som ska testas är ett torrt pulver, späd det till 10 mg/ml eller 100 mg/ml med ultrarent vatten före användning.

1.3 Om provet har en komplex matris bör ett standardexperiment med tillsats och återvinning utföras för att bestämma lämplig spädning.

2. Tillsätt 100 μL prov till 1,5 mL rör, tillsätt sedan 100 μL lysbuffert, 10 μL proteinas K, vortexa och blanda i 10 sekunder.

[Anmärkningar]: Tillsätt 10 μL proteinas K om koncentrationen av proteinprovet är 0-100 mg/mL, och tillsätt 20 μL proteinas K om koncentrationen av proteinprovet är 100-200 mg/ml.

3. Inkubera vid 60°C i 20 min.

4. Lägg sedan till 400 μL av bindningslösningen, 9 μL glykogen och 6 μL poly A kaliumsalt, och vortexa och blanda väl.

5. Tillsätt 20 μL magnetiska pärlor, vortexa och blanda väl och låt stå i 10 minuter. Vortexa och blanda i 10 sekunder var 3:e minut.

[Anmärkningar]: De magnetiska pärlorna måste vortexas före användning för att säkerställa att de magnetiska pärlorna är ordentligt återsuspenderade. Efter att ha tillsatt prover 4-5 gånger på en gång, rekommenderas att blanda igen.

7. Centrifugera kort för att få ner lösningen och placera centrifugröret på det magnetiska stället i 1-2 minuter. Efter att de magnetiska pärlorna är helt absorberade, avlägsna försiktigt vätskan.

8. Tillsätt 500 μL tvättlösning A (kontrollera om absolut etanol har tillsatts före användning), skaka eller vortexa för att blanda för att säkerställa att de magnetiska pärlorna är dispergerade och att inga magnetiska pärlor har samlats på väggen av centrifugröret.

9. Centrifugera kort och placera centrifugröret på ett magnetställ i 1-2 minuter. Efter att de magnetiska pärlorna är helt absorberade, avlägsna försiktigt vätskan.

10. Tillsätt 500 μL tvättlösning B (kontrollera om absolut etanol har tillsatts före användning), skaka eller vortexa för att blanda för att säkerställa att de magnetiska pärlorna sprids och inga magnetiska pärlor samlas på väggen av centrifugröret.

11. Centrifugera kort och placera centrifugröret på ett magnetiskt stativ i 1-2 minuter. Efter att de magnetiska pärlorna är helt absorberade, avlägsna försiktigt vätskan.

12. För att säkerställa att kvarvarande vätska avlägsnas så mycket som möjligt, centrifugera röret i 10 sekunder snabbt, placera den på ett magnetiskt ställ och använd en 10 μL pipett för att suga upp den kvarvarande vätskan.

13. Öppna locket på röret och låt det stå i rumstemperatur i 3 minuter tills etanolen avdunstar helt. Ingen reflektion eller uppträdande sprickor på ytan av de magnetiska pärlorna tyder på att etanolen har avdunstat helt.

14. Ta bort röret från det magnetiska stativet, tillsätt 50-100 μL förvärmt eluat vid 65°C, skaka och blanda väl. Centrifugera sedan kort, inkubera den vid 65°C i 5 minuter, skaka och blanda en gång var 2-3:e minut.

15. Centrifugera kort igen, placera centrifugröret på ett magnetiskt stativ i 2 minuter. Efter att de magnetiska pärlorna är fullständigt adsorberade, överför försiktigt DNA-lösningen till ett nytt centrifugrör och förvara den vid -20 °C eller vid -80 °C för långtidsförvaring.