kitet är utrustat med en kraftfull lyseringsbuffert, som snabbt kan lysera prover (t.ex. celler, mussvans, musöra, mustå, muskel etc.) för att frigöra genomiskt DNA, och lysatet kan direkt tillsättas PCR-reaktionssystemet utan rening, vilket är bekvämt för driften. Dessutom kräver detta kit låg provinmatning, 5 mg musvävnad eller 1-5 mm mussvans kan användas för experiment.

Komponenter

Lagring

19697-A (Lysis Solution) bör förvaras kl 2~8℃ för 1 år. Om den används flera gånger, frys in i separata förpackningar för att undvika korskontaminering. 19687-B (Stop Solution) ska förvaras kl -25~-16℃ för 1 år.

Instruktioner

Genomisk DNA-frisättning från mus

1. Klipp 5-10 mg djurvävnad eller 1-5 mm mussvans i ett 1,5 ml centrifugrör*.
2. Tillsätt 90 μL Buffer ML till ovanstående centrifugrör, vortexa försiktigt för att fullständigt infiltrera provet med lysatet och centrifugera kort.
3. Inkubera vid 95°C i 15 minuter i en termostatisk inkubator**.
4. Tillsätt 10 μL Buffer MT, snärta för att blanda och avsluta lyseringen.
5. Valfritt steg: centrifugering vid 12000 rpm i 2 min.
6. Överför supernatanten till ett nytt centrifugrör och förvara vid 4 °C eller -20 °C eller ta supernatanten direkt för efterföljande PCR-amplifiering.

* Vävnad bör skäras upp så mycket som möjligt så att lysreaktionen kan fortskrida smidigare.

**Inkubation vid 95°C i 15 minuter är i allmänhet tillräckligt för de flesta PCR-behov. Om en större mängd DNA krävs eller provet är svårt att lysera kan tiden förlängas till 30 min. Vävnadsblocket behöver inte lyseras fullständigt, och återstoden kan avlägsnas i ett efterföljande centrifugeringssteg.

Cellgenomisk DNA-frisättning

Efter att ha odlat transfekterade celler i en 48-brunnars platta i 3 dagar och nått en celldensitet på cirka 70 000 celler/brunn, avlägsna mediet så fullständigt som möjligt. Tillsätt sedan 90 ul ML-buffert direkt per brunn och pipettera varje brunn. Överför allt till 96-brunnars PCR-plattan. Efter behandling med en PCR-maskin vid 95 °C i 5-15 minuter och kylning, tillsätt 10 ul MT-buffert och blås jämnt och noggrant. Använd högtrohetsenzym (Cat # 10164) eller Taq-enzym, tillsätt 0,5-2 ul cellysat till varje 50 ul av PCR-reaktionssystem och utför PCR.

Figur 1. Direkt PCR med cellysat behandlat med 19697.

Anteckningar

1. Denna produkt är endast avsedd för forskning.
2. Använd skyddsglasögon, labbrockar och engångshandskar för din säkerhet.
3. För att undvika korskontaminering mellan proverna är det nödvändigt att sänka ned kanten på provtagningsanordningen eller den del som är i direkt kontakt med provet i 2 % natriumhypokloritlösning efter varje provtagning, tvätta den flera gånger och sedan torka den kvarvarande vätskan med en ren pappershandduk innan den används igen.För att underlätta testet kan flera provtagningsanordningar förberedas och rengöras enhetligt efter användning för att säkerställa att varje enskilt prov tas med en kontamineringsfri provtagningsanordning.
4. Det rekommenderas att använda nytagen djurvävnad. Vid långvarigt frusna vävnader bör upprepad frysning och upptining undvikas så mycket som möjligt, annars kommer det att leda till nedbrytning av mallen och påverka PCR-effektiviteten.

Dokument:

Manualer