Concanavalin A (ConA) pärlor är superparamagnetiska polymermikrosfärer som har kopplats kovalent med Concanavalin A (ett växtmannos/glukosbindande lektin isolerat från frön från spannmålsväxter) på deras yta. Dessa pärlor har flera anmärkningsvärda egenskaper, inklusive monodispersitet och stark magnetisk reaktivitet. När Ca²⁺ och Mg²⁺ joner är närvarande kan magnetiska ConA-pärlor effektivt och snabbt separera och rena olika biomolekyler såsom polysackarider, glykoproteiner och glykolipider genom att utnyttja affiniteten mellan ConA-globulin A och de terminala a-D-mannos- och a-D-glukosgrupperna.

ConA magnetiska pärlor erbjuder en bekväm metod för att separera eller fixera celler, vilket säkerställer minimal cellförlust under efterföljande tvättsteg. Dessutom kan de användas för insamling och fixering av kärnor. Dessutom finner dessa pärlor användbara i innovativa tekniker som CUT & Run och CUT & Tag, som är revolutionerande metoder som används i ChIP-seq-experiment.

Sammanfattningsvis är ConA magnetiska pärlor kraftfulla verktyg för effektiv rening av biomolekyler, bekväm cellseparation och fixering, samling av kärnor och tillämpning i banbrytande experimenttekniker.

Specifikationer

Egenskaper

Figurer och tabeller

Tabell 1. Yeasen ConA-pärlorna har hög fångsthastighet. Mängden Concanavalin A (ConA) som används i proportion till mikrosfärerna har verifierats för att säkerställa maximal bindningskapacitet samtidigt som man förhindrar överdriven aggregering av magnetiska pärlor efter cellbindning i CUT&Tag-experiment. Till exempel kan användning av 10 μL ConA-belagda pärlor binda en mängd celler som motsvarar E7-nivåer, med en bindningseffektivitet som överstiger 98 %.

Figur 1. Yeasen ConA-kulor visar hög dispersitet. I pärlmärkningsprocessen valdes ett icke-biologiskt tätningsmedel för att säkerställa effektiv förslutning utan att påverkas av sats-till-batch-variationer. Detta garanterar utmärkt tätning av de magnetiska pärlorna, och bevarar deras höga monodispersitet under lagring av ConA-belagda pärlor, vilket är fördelaktigt för effektiv bindning till kolhydratmolekyler i efterföljande experiment.

Figur 2. CUT&Tag kromatinsignalfördelning med Yeasen Con A Beads.

Lagring

Denna produkt bör förvaras vid 2~8 ℃ i 2 år.

Instruktioner

Följande operationer tar rening av glykoproteiner eller isolering av celler som ett exempel CUT&Tag experiment , se Yeasen Cat# 12598ES för protokoll.

1. Beredning av buffertar

1）Kundlevererat

1. Nödvändigt material som inte ingår: magnetstativ, Eppendorf-rör, PCR-rör, magnetstativ, termocykler etc.
2. Utjämna Pärlor i rumstemperatur i minst 30 min. Återsuspendera pärlorna noggrant genom att vortexa eller skaka flaskan.

1. Provhantering ( ta däggdjursceller som exempel ）

1. Förbered däggdjursceller (1,0 × 10 ⁴~1.0×10 ⁵ celler), centrifugera (4℃，600×g, 3~5 min) och försiktigt kassera supernatanten.
2. Tillsätt 140 μL bindningsbuffert, blanda väl och återsuspendera cellerna, centrifugera och samla upp (4℃，600×g, 3~5 min), försiktigt kassera supernatanten.
3. Tillsätt 90 μL bindningsbuffert, blanda väl och återsuspendera cellerna.
   Varning: Tätt vidhäftande däggdjursceller kan erhållas genom partiell matsmältning med hjälp av ett enzym som trypsin. För djurvävnader, växtceller eller svampceller kräver erhållandet av dispergerade celler eller protoplaster ofta speciella behandlingar som är skräddarsydda för deras specifika egenskaper.

1. Förbered ConA-pärlor

1. Pipettera försiktigt ConA-pärlorna till fullständig suspension, placera 10 μL av pärlsuspensionen i ett nytt 200 μL centrifugrör.
2. Tillsätt 40 μL bindningsbuffert, blanda väl och stå på det magnetiska stativet i 1 min och kassera supernatanten efter att de magnetiska pärlorna adsorberats till centrifugrörets sidovägg.
3. Tillsätt 10 μL bindningsbuffert, blanda väl och återsuspendera ConA-pärlorna.

1. Provbindning

1. Tillsätt det förberedda cellprovet till de förbehandlade pärlorna, pipettera försiktigt de återsuspenderade pärlorna och inkubera sedan på en inverterad mixer (rumstemperatur 30 min eller 4 ℃ över natten).
2. Stå på ett magnetiskt stativ i 1 min, vänta tills de magnetiska pärlorna adsorberas på centrifugrörets sidovägg, kassera försiktigt supernatanten.
3. Tillägga 500 μL Elueringsbuffert till cell-ConA-pärlkomplexet och Pipettera försiktigt till resuspendera pärlor, alltså Stå på ett magnetiskt stativ i 1 min, vänta tills de magnetiska pärlorna adsorberas på centrifugrörets sidovägg, kassera försiktigt supernatanten.
4. Upprepa steg 3) tre eller fyra gånger till.

1. Eluering

1. För glykoproteiner, tillsätt 50~250 μL elueringsbuffert, pipettera försiktigt de återsuspenderade pärlorna och inkubera sedan på en inverterad mixer (rumstemperatur i 10~30 min). Efter inverterad blandning, stå på ett magnetiskt stativ i 1 min, samla supernatanten till ett nytt 1,5 ml rör för att stega SDS-PAGE eller Western blot.
2. För cell, inget behov av eluering.

Anteckningar

1. Utjämna ConA pärlor i rumstemperatur före användning.
2. Undvik frysning, annars försämras pärlmaterialet eller förlust av aktivitet.
3. ConA kräver närvaron av Ca2+- och Mn2+-joner för att vara aktiva, så reagens som innehåller EDTA eller andra metalljonkelatorer bör undvikas under experimentet.
4. När de inkuberas med celler kan ConA-pärlor aggregeras, vilket är normalt och inte påverkar den normala användningen av magnetiska pärlor.
5. Denna produkt är endast avsedd för forskning.
6. Använd labbrockar och engångshandskar, för din säkerhet.

Manuell